直链淀粉和支链淀粉中分子量，构象检测方案(场流分离仪)

技术文章WYATTTECHNOLOGY公司网址：www.wyatt.com.cn Wwww.wyatt.com美国怀雅特技术公司 -----AFFF-MALS-RI测定淀粉中直链淀粉和支链淀粉的分子量和尺寸分布 淀粉常被应用于工业和营养保健产品中。其功能性质往往受大分子组分的比率和分子量的影响，一般来说来源，收获年份以及气候的不同都会导致组分的不同。淀粉中包含直链淀粉(AMY)和支链淀粉(AMP)的大分子均聚物。 线性 AMY 是由(1→4)-α-D葡萄糖链接组成的长链，而更高分子量的 AMP 具有分支结构，是由(1→4)-α-D葡萄糖和(1→6)-0-D葡萄糖残基混合链接而成。本工作的目的在于运用AFFF-MALS-RI分离 AMY 和AMP以计算质量比，测定分子量分布，重均分子量(M)和AMP的均方旋转半径(Rz)。我们将这项技术应用到淀粉中，其中AMY：AMP 的比率覆盖了较宽的范围。 Eclipse AF4 系统配备了 18cm 的短通道，一个350um的垫片，一个可再生的纤维素膜(截止限为10KD)。使用18角度 MALS 和OptilabREX示差检测器进行检测。通道流速维持在1.0mL/min， 交叉流速成线性变化，流速在10min 内从1.0变成 0.1mL/min，然后突然变到0ml/min。 综合示差的峰面积能够计算出AMY：AMP比率，得到的结果与标称值高度一致， M、和Rz值在现有文献普遍接受的范围之内。AMP组分的构象图谱亦证实了其分支结构。 由于剪切降解或者柱子对于更高分子量的 AMP有吸附，尺寸排阻色谱在表征淀粉时有一定的限制。AF4 的开放通道打破了这些限制且能够回收完整的 AMP。通过控制不同的交叉流速保证了对 AMY 和 AMP 均有较高分辨率。与 MALS 和RI检测器联用， AMY：AMP 图15种不同AMY：AMP 比率的本地淀粉的 AF4-MALS-RI 结果：分子量分布叠加之后的 AF4-RI图。交叉流速在 10min内从1.0变成0.1mL/min， 然后突然变到 0ml/min。 图25种淀粉中的支链淀粉的构象图(log Rzvs log M)(斜率0.39-0.41表明其分支结构)。        AF4的开放通道打破了传统分离方法中存在的剪切和吸附的限制且能够回收完整的样品。通过控制不同的交叉流速保证了对AMY和AMP均有较高分辨率。与MALS和RI检测器联用，AMY:AMP的质量比可精确测定，这些大分子的分子量同样可估算出来而不需要标准校正。