膜蛋白中分子量，构象检测方案(凝胶色谱仪)

膜蛋白是活体细胞的重要组分。它们包含了基因组约三分之一的ORF， 在活体细胞中起着重要作用且是大量药物的作用靶点。在其原生环境中，跨膜蛋白插入疏水性磷脂双分子层的内部。膜蛋白的体外表征需要将蛋白从细胞膜中提取出来，并维持蛋白的可溶和原生状态。通常使用两亲性化合物提取膜蛋白，术语称作洗涤剂，得到所谓的蛋白-洗涤剂复合物(pdc)。有几种膜蛋白是天然的寡聚物，如何维持这种精确的分子寡聚状态是我们进一步研究的关键。 这里，我们描述了一种方法，测定膜蛋白的四级结构，在整个蛋白处理过程中，我们都遵循它的保存方法。众所周知，传统的 SEC 柱校正并不适用于 pdc 样品， pdc 的体积和形状取决于洗涤剂的含量组成。 通过研究 Methanosarcina mazeiCorA 转运蛋白在两种洗涤剂中的四级结构，得到了本文摘中的相关谱图。对于同源CorA 的晶体结构研究表明，该功能蛋白以五聚体的形式存在，可引导离子跨过细胞膜。在 LDAO 中纯化后的蛋白的 SEC 洗脱谱图(CorALDAO，图1)要比在DDM 中得到的谱图(CorADDM，图2)更尖锐也更对称。 结合 MALS，示差检测器以及UV检测器在280nm 的信号我们可以解决“两个方程，两个未知数”的难题，计算出每一个 pdc 中蛋白和洗涤剂的分子量。奇怪的是，尽管 CorALDAo 洗 图1 SEC/MALS/LS 分析 LDAO 纯化后的 CorA ，使用了15ml 柱体积的 Shodex KW804 色谱柱。在该洗涤剂中， CorA 仅以单体形式存在。 图2 SEC/MALS/LS 分析 DDM 纯化后的 CorA，使用了15ml柱体积的 Shodex KW804 色谱柱。在该洗涤剂中， CorA 以五聚体形式存在。 脱得更好，但是它却是以单体状态存在而非原生态，而 CorADDM 却维持它的五聚体四级结构。 This note graciously submitted by David Veesler， Architecture et Fonction des MacromoleculesBiologiques， Unite Mixte de Recherches UMR6098， CNRS，Universite de Provence Universitede la Mediterranee， Marseille France.