蛋白中分子量，粒径检测方案(凝胶色谱仪)

多角度光散射与 QELS 联用表征蛋白 合成高分子的第13篇应用文摘中提到，多角度激光检测器与准弹性光散射(QELS)组件联用时，通过测定样品的流体力学半径和均方旋转半径，我们可以得到高分子的结构信息。在这篇应用文摘中，我们将会报道如何使用 WYATT 的在线 QELS 评价SEC 分离效果的好坏以及判断蛋白的构象。 图1显示的是X蛋白和BSA的分子量随洗脱体积变化的图谱，测定中使用了 miniDAWNTristar 检测器以及特定的 SEC 条件。蛋白X分子量大约是 57KD，与 67KD 的BSA 单体分子量非常接近。但是，蛋白X的洗脱时间却比 BSA单体的洗脱时间晚得多。洗脱时间靠后，最有可能的原因就是蛋白X的结构要比 BSA更加紧凑或者蛋白X 与柱填料之间有相互作用。 使用 miniDAWN Tristar 测定样品分子量的同时，，1WYATTQELS 检测器可测出这些蛋白的流体力学半径Rh。结果如图2所示。蛋白X的Rh是3.0nm，而 BSA单体的 Rh 是 3.4nm。这也与球形结构的预期相符。由此得出结论，蛋白X出峰时间较晚很明显是由于与柱填料有相互作用，而不是因为结构更加紧凑。 总之，可以根据流体力学半 图1BSA单体和蛋白X分子量与洗脱体积的关系图。 图2 BSA 单体和蛋白X的自相关函数，由此计算样品的Rh。 径和洗脱时间的信息，来评估 SEC 分离效果的好坏，帮助我们找到更合适的 SEC方法。此外，可以根据已知构象蛋白的分子量和流体力学半径的比率，判断未知蛋白的构象。