茶叶及制品中农兽药残留检测方案

茶业通报.2009.31(2)：81-83Journal of Tea Business 茶 业 通 报822009 GPC-HPLC 法测定茶叶中多菌灵和甲萘威农药残留量 张雪波12，上官良敏' (1.福建省茶叶产品质量检测中心，泉州362400： 2.安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术农业部、教育部重点实验室，合肥230036) (摘 要) 采用高效液相色谱法测定茶叶中多菌灵和甲萘威农药残留。样品通过乙腈提取，凝胶色谱净化(GPC)，在线浓缩，采用 Waters Ci8柱(3.0×250mm×5um)，乙腈和水为流动相梯度洗脱，柱温30℃，流速 0.5mL/min 进行分离， PDA检测器进行检测，波长为285.2nm和220.3nm，进样量5uL。回收率为 84.5%~103.2%； RSD 为3.2%~4.5%；检测限多菌灵为 0.1ug/mL、甲萘威为 0.03ug/mL。(关键词) 多菌灵； 甲萘威；茶叶；凝胶色谱；高效液相色谱 (中图分类号) TS207.5*3 (文献标识码)A (文章编号)1006-5768(2009)02-0081-03 多菌灵和甲萘威属于氨基甲酸酯类杀虫剂，具有良好杀虫和杀螨效果，是我国使用量较大的广谱性农药，在茶园中具有一定的使用范围。我国有茶叶相关标准对部分氨基甲酸酯类农药进行限量，并提出了相应的检测方法[1-4]，标准主要采用固相萃取净化的样品前处理方法，不仅耗费溶剂量大，且样品前处理时间长，费时费力。本研究采用凝胶渗透色谱分析茶叶中 多菌灵和甲萘威残留量，建立一种操作简单，准确可靠的样品前处理技术，回收率为 84.5%~103.2%； RSD为3.2%~4.5%；检测限多菌灵为 0.1ug/mL，甲萘威0.03ug/mL。凝胶渗透色谱方法操作简便，，节省时间，柱子可以重复利用，可实现自动化操作，而且分析重现性非常好，是目前国际上植物类样品进行农药残留检测应用最普遍的一种样品净化技术。 ( (作者简介)张雪波(1978一)， 女 ，福建漳州人，安徽农业大学茶学专业博士生，主要从事茶叶产品质量检测工作和茶叶标准化工作。 ) 茶，以六安州的名义进贡的。“天池茶”应该就是霍山城关及近郊所产的小茶，“南岳天池”是古代霍山八景之首，南岳山及其周围所产的茶叶，叫做“天池茶”，名至实归，很相宜的，它是从上述五种霍山名茶中衍生出来的名称。以上几种茶叶都是茶之极品，它们充分利用了谷雨前所生长出来的优质嫩叶，以不同方法采摘加工，既有霍山茶形态优美，颜色清悠，香味幽远的共性，又有形、色、香三者不同的个性，作为贡品，完全合格，也令人惊叹霍山茶农超人的智慧。 5茶之文化 随着茶叶生产的发展，饮茶的普及，以茶及饮茶为物质基础的意识形态衍生起来，饮茶风俗的形成即是典型的文化现象。茶文化内容丰富，表现形式多样，难以一一列述，这里只叙述一些与皖西(霍山)茶有关的文化现象。唐代饮茶成为一种“雅道”，尤其到了唐的后期，出现了许多赋茶之美，颂茶之德的诗。 今皖浙赣三省交界处和大别山区是主要产茶地，又有兴盛的茶叶贸易，“将到市廛，安排未毕，人来买之，钱财盈溢”。出现了经营茶叶贸易致富的富商。被贬为江洲司马的白居易也说：“商人重利轻别离，前月浮梁买茶去”。正史如《旧唐书》也叙述了，在茶叶贸易过程中，我国出现了原始的汇兑形式“飞钱”，比如 陕西的商人要到霍山买茶，可以在长安某个商号交款，再带有暗记的信物到寿州或盛唐某商号提取等额钱款，只要交纳一定的报酬，可以免除携带之劳和保证路途上的安全。《茶酒论》中还说：“贡王侯宅，奉帝王家，时时献入，一世荣华。”茶叶已成为朋友间馈赠，官场中贿赂的重要物品，李德裕是操守较为清廉正派的官僚。783年，淮西节度使李希烈送“黄茗”200斤给宦官邵光超，寻求宦官对他割据的支持。淮西节度使辖区的东界是今渭河以西，李希烈所送的“黄茗”极可能就是霍山黄芽。这种恶劣的社会风气自然罪不在茶，却是茶文化中的消极现象。 茶对社会风气的影响，到宋代更为广泛与深入，除了客来上茶的礼仪及上层社会中斗茶的兴起外。茶馆至迟起源于唐代，煎(烹)茶要有一定技支与经验，干这行的被称为“茶博士”，茶馆在宋代已经遍及城乡。西汉时期，民众三人以上聚饮(酒)即罚黄金4两，茶馆使百姓有了更方便、经常的社交场所，扩大了社会交际的空间。同时又为杂曲、渔鼓、说书等艺术开拓了新的平台，元代白朴之所以能留住六安，明代寿州之所以能孕育出张野塘这样的音乐大家，与茶馆为平台的文化氛围是有关系的。 1仪器及试剂 小型粉碎机；；电子分析天平；电动恒温振荡器； J2凝胶渗透色谱系统(带样品自动收集和在线浓缩系统)； GPC填料： Bio-Beads S-X3(聚苯乙烯凝胶)，使用前用环己烷：乙酸乙酯(V：V=1：1)浸泡过夜再装柱使用； 柱子：玻璃柱，2.0cm×40cm； Waters高效液相色谱仪：配置2695四元泵溶剂淋洗系统，自动进样系统， 2996PDA检测器； 试剂：多菌灵和甲萘威标准液均为100Hg/mL(农业部环境保护科研监测所)，甲醇、乙酸乙酯、环己烷、乙腈均为色谱级，甲醇和乙腈经0.45Hm滤膜过滤。 2色谱条件 2.1凝胶净化色谱条件： 流动相：乙酸乙酯：环己烷(V：V)=1：1；流速：3.5mL/min；进样量：2.5mL； 2.2液相色谱分析条件： 流动相：乙乙：水体积比梯度洗脱；柱子： WatersSunfire Cis柱 (3.0mm×250mm×5.0Hm)柱温：30℃， 流速： 0.5mL/min， PDA检测器，波长多菌灵 285.2nm，甲萘威220.3nm。进样量： 5HL 3样品溶液的制备及测定 准确称取 5.0g样品于 50mL 带盖锥形瓶中，加10mL乙腈，溶解，加盖于45℃恒温振荡器中振荡提取 45min，提取液离心，取上清液 2.5mL 经 GPC 净化，收集 20~28min 收集液，经在线浓缩用甲醇定溶至2mL， 0.22Hm有机膜过滤，取5匹进样，测定峰面积，按外标法定量。 4结果与讨论 4.1前处理条件的选择 4.1.1提取溶剂的选择 采用 GPC 凝胶渗透色谱净化方法，提取剂的选择尤为复杂和重要，不仅要考虑到所有组分的回收率， 同时要考虑到净化柱填料所能耐受的有机溶剂种类。当这些溶剂不能满足提取效率要求时，可以考虑进行溶剂转换，但这会带来操作上的烦琐。根据传统方法和标准方法1-4及文献报道较多的提取溶剂有甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷等或者它们的混合溶剂。通过对比试验发现，采用乙腈和流动相提取，杂质少，回收率均符合要求。所以本文采用乙腈作为提取剂，分析结果的灵敏度、准确度和精密度均满足要求。 4.1.2净化条件的研究 凝胶色谱技术是基于凝胶对不同大小分子的排阻效应进行分离，分子量较大的色素、蛋白质等分子先随流动相经过色谱柱，绝大多数的农药组分分子量比较小，扩散进入凝胶孔内较晚流出色谱柱，从而使农药与杂质分离。凝胶净化条件主要考虑填料的选择、流动相的选择、柱长还有流速。结合相关文献资料5，根据本研究试验结果，采用经典的 Bio-Beads S-X3(聚苯乙烯凝胶)作为填料，环己烷：乙酸乙酯(V：V=1：1)为流动相，考虑到节约时间提高效率，且后续的分析方法采用高效液相色谱，与多菌灵和甲萘威同时流出的部分茶黄素之类的物质对其不会造成污染，因此流速采用 4.7mL/min。根据多菌灵和甲萘威单标在该条件下的流出时间，结合高效液相测定各时间段的多菌灵和甲萘威的含量，计算回收率，以20~28min 收集时间最佳。 4.2分析条件的优化本研究采用 PDA 检测器，根据多菌灵和甲萘威单标试验，结合文献资料16-71和茶叶中的背景的干扰情况，多菌灵在 285.2nm、甲萘威在220.3nm 波长下不仅吸收大，且基质干扰少，基线波动少。因此，多菌灵选用 285.2nm、甲萘威选用220.3nm的波长进行分析。采用乙腈和水作为流动相，梯度洗脱，具体洗脱条件如表1.分离柱采用 Waters SunfireC18柱(3.0mm×250mm×5.0Hm)，流速：：0.5mL/min，柱温：30℃，进样量：5L。 表1流动相梯度程序 4.3线性关系 分别取 1mL 多菌灵和甲萘威标准溶液(100Hg/mL)，混合，用甲醇定溶至10mL(容量瓶)，再分别稀释为0.10、0.50、1.0、2.0、3.0Hg/mL 的混合溶液，取5mL进样，测定峰面积，以峰面积对浓度作曲线。 多菌灵和甲萘威在0.1~3. 0ug/mL的浓度范围内线性关系良好，在此范围内定量准确。在所选条件下，回归方程为： Y=30700X-2420(多菌灵)， r=0.9994；Y=15800X+353(甲萘威)， r=0.9995。式中Y为待测组分浓度，X为峰面积，r为回归方程的相关系数。多菌灵和甲萘威的检出限分别为1 0.1Hg/mL 和0.03Hg/mL，标准品色谱图见图1。 4.4精密度和回收率试验及检测限 取茶叶20份，其中18份分别进行三个浓度水平(0.5、1.0、2.0Hg/mL)的加标回收率试验，2份为空白样品试验，计算平均回收率和精密度(RSD)结果见表2。多菌灵和甲萘威的检出限分别为0.1ug/mL和0.03pg/mL。 表2多菌灵和甲萘威的回收率和RSD试验(n=6) 组分 加标浓度(Hg/mL) 平均回收率(%) 精密度(%) 多菌灵 0.5 84.5 4.5 1.0 88.7 4.3 2.0 92.5 4.0 甲萘威 0.5 93.8 4.0 1.0 103.2 3.2 2.0 98.5 3.8 5小结 我国是茶叶主要出口国，面对欧盟和日本等国严格的农药残留指标要求，采用与国际先进水平同样的方法对茶叶中的农药残留进行检测，是与国际同行检测能力互认的基础。目前GPC净化方法作为国际先进检测机构检测植物性食品中农药残留的前处理方法已是发展趋势。因此国内检测机构应尽快研究GPC方法在茶叶农药残留检测中的应用，使检测能力达到国际水平， 更好地为我国茶叶出口服务。本研究采用凝胶色谱净化，高效液相色谱梯度洗脱分离， PDA检测器检测，测定多菌灵和甲萘威在茶叶中的残留量，测定结果令人满意，且该方法重现性好，操作简便，节省时间，柱子可以重复使用，基本实现自动化操作，研究结果为茶叶中的氨基甲酸酯残留量测定提供了行之有效的前处理方法和检测手段。 (参考文献) (略) 歙县绿色茶叶标准化生产基地获批准日前，全国产茶大县安徽省歙县被农业部和中国绿色食品发展中心批准为全国绿色食品原料(茶叶)标准化生产基地。近年来，歙县加快推进生态茶园基地建设，并围绕实施品质提升工程，开展农村茶叶初制厂清洁化改造，有效地提高了茶叶的加工质量。目前，歙县全国绿色食品原料(茶叶)标准化生产基地的规模已达8267hm。 (安徽省茶叶行业协会) CChina Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net