肉与肉制品中挥发性盐基氮检测方案

岸卫生生控制PORT HEALTH CONTROL第6卷第6期Vol.6 No.628 摘自《口岸信息》2001年第39期 乙酰丙酮一甲醛分光光度法测定肉与肉制品中挥发性盐基氮 张沛玲李 薇 徐州市卫生防疫站(221003) 摘要 研究采用乙酰丙酮—甲醛分光光度法测定肉与肉制品中挥发性盐基氮。该方法简单，操作方便，氮的浓度在 10~80pg/25ml呈线性，样品经7次重复测定，RSD 为 3.42%；平均回收率为95.2%。 关键词 分光光度法 肉制品 挥发性盐基氨 判定肉与肉制品的新鲜程度，常以测定其挥发性盐基氮作为重要指标，通常采用半微量定氮蒸馏法1[2]。为免去蒸馏这一繁琐过程，本文介绍了乙酰丙酮一甲醛分光光度法测定氮的含量3]，该方法无需蒸馏，准确度高、回收率高。 11 材料与方法 方法原理 在醋酸盐缓冲液存在的条件下，pH值控制在5~6时，乙酰丙酮一甲醛试剂与待测物反应，生成黄色化合物，颜色深浅与氮的含量在线性范围内成正比，与标准比较进行定量。 1.2仪器与试剂 1.2.1 实验仪器：721型分光光度计；恒温水浴箱。 1.2.2 试剂：硫酸铵标准储备液的配制：精密称取0.4720g在105℃干燥两小时的硫酸铵，加少量水溶解后移入100ml容量瓶中，加水至刻度摇匀。此溶液每毫升相当于 1mg氮；硫酸铵标准使用液的配制：吸取 10.0ml硫酸铵标准储备液置于100ml容量瓶中，加水至刻度，此溶液每毫升相当于 100pg氮；pH5.61醋酸钠醋酸缓冲溶液的配制：称取8.2g无水醋酸钠加适量水溶解，再加入0.5ml冰醋酸混匀加水稀释至100ml；乙酰丙酮一甲醛溶液的配制：将1.5ml甲醛(360g/l)与7.8ml乙酰丙酮混匀，加醋酸钠-醋酸缓冲液稀释至100ml。 1.3 操作方法 1.3.1 样品预处理 将样品除皮、骨、脂肪、结缔组织后取净肉切碎搅匀，称取10.00g置于锥形瓶中加水至100.0ml，不时振摇，放置 30min 后过滤，吸取 5.0ml 滤液于100ml容量瓶中加水至刻度，混匀备用。 1.3.2 测定 吸取1.00ml滤液稀释液(约含含20~70pg)置于25ml具色比色管中。吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80ml硫酸铵标准使用液(相当于0、10、20、30、40、50、60、70、80pg氮)，分别置于25ml具色比色管中，加水至10ml。于样品测定管、标准系列管中各加4ml乙酰丙酮一甲醛溶液混匀，加水至25.0ml，摇匀，置沸水浴中加热 15min，取出，置冷水浴中冷却至常温。用 1cm 比色杯，以0管调节零点，于波长412nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。 1.3.3 结果计算 X：样品中挥发性盐基氮的含量(mg/100g) A：测得样品中挥发性盐基基的含量(pg) m：样品质量(g) V：测定用样品体积(ml) 2 结果与讨论 2.1 溶液的最大吸收峰 按本实验操作，在721型分光光度计上，用30pg氮的标准管，在波长400~420范围内每间隔 2nm比色，测其最大吸收峰为412nm。 2.2 条件试验 2.2.1显色剂用量的选择 乙酰丙酮一甲醛溶液作为显色剂在加在4.0ml时吸收光度值最大。 2.2.2溶液的发色及稳定性 该显色溶液随温度和时间的增加而加深，采用沸水浴 15min 可获最大吸光度，并保持恒定 30min。 2.2.3显色剂的稳定性 显色剂不甚稳定，新配制显色剂为淡黄色，久放后颜色加深，测定时吸光度值降低。因此，显色剂配制好之后，应在1~2天内使用。比较结果见表(1)。 表1显色剂放置天数与吸光度结果比较 时间(天) 1 2 3 4 5 6 7 30pg吸吸光度 0.3800.380 0.365 0.357 0.340 0.321 0.301 部分样品制备液中蛋白质可导致溶液混浊，影响比色，但测定过程中沸水加热 15min 后蛋白质凝固，放冷后用定量滤纸过滤可除去沉淀，定容后比色不影响结果。 2.4乙酰丙酮一甲醛分光光度法同蒸馏法精密度和回收试验对比 取同一份样品，加人适量标准液(硫酸铵标准使用液 20ug)，经t检验结果表明无显著性差异(P>0.05)。见表(2) 表2分光光度法与蒸馏法精密度和回收试验比较结果 方法 测定次数(n) 测定均值(pg) 样加标测得均值(ug) 平均回收率(%) S RSD(%) 分光光度法 7 2.69 22.58 95.2 0.062 3.42 蒸馏法 7 2.67 22.54 95.0 0.065 3.60 3 小结 乙酰丙酮一甲醛分光光度法测定肉与肉制品中挥发性盐基氮，其方法简单快速、精密度高、最小检出量都能满足分析工作需要。与蒸馏法相比，测定结果一致。 ( [1]中华人民共和国国家标准.食品卫生检查方法理化部分 中国标准出版社，1998；169 ) ( [2]翟永信.现代食品分析手册.北京大学出版社，1988；70 ) ( [3]《水质分析大全》编写组编.水质量分析大全.科学技术文献出版社重庆分社，1989 ) 法国新型非活性炭疽疫苗研究取得进展 法国巴斯德研究所日前宣告，该所研制的新型非活性炭疽疫苗已经过动物实验。目前他们正在寻找合作伙伴，以期尽快做人体实验。 据主持这项研究的法国专家米谢勒·莫克介绍，他们研制的疫苗是在一种特殊蛋白质的基础上生产的，这种蛋白质参与炭疽杆菌所分泌毒素的合成。这位专家解释说，炭疽杆菌所分泌的毒素是使人体发病甚至死亡的主要原因，而现有的抗菌素对其根本无法抵御。她表示，他们研制的非活性疫苗针对的正是这些毒素，在对感染炭疽杆菌的实验鼠做实验后，疗效非常显著。 关于这种疫苗的商业生产，这位专家表示，目前他们的研究还处于动物实验阶段，在商业化生产之前，还需要长期的人体实验。第一步是要保证疫苗对人体没有毒副作用，然后还要验证疫苗对人体的有效性。而所有的过程，至少还需要几年的时间才能完成。 法国专家表示，巴斯德体制改革的初步实验成功对炭疽疫苗研究意义重大，因为长期以来科学界一直没有获得过令人满意的人体疫苗，现有的疫苗不但药效时间短，对人体有许多毒副作用，而且对最威胁人体生命的肺吸入性炭疽疗效也不理想。 据介绍，科学家早在100多年前就已研制成功防治动物炭疽的疫苗，但这些疫苗全部是在弱化的炭疽杆菌的基础上生产的活性疫苗，给人接种后，有使某些人罹患弱化炭疽及出现其他不良反应的危险。因此，许多国家一直禁止在人类炭疽治疗中使用活性疫苗。