化学药中有效成分含量分析检测方案

[应用纪要]THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [应用纪要] Waters 使用UPC/MS进行杂质分析 Michael D. Jones 和 Warren Potts 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市) 应用优势 简介 ■角解决复杂杂质分析所面临的难题 帮助做出最终方法开发决策的方法 UltraPerformance Convergence ChromatographyIM (UPC2TM)充分利用亚2pm颗粒固定相的优势，采用二氧化碳作为主要流动相成分。合相色谱作为液相色谱的补充性分析技术，可提供正交的选择性，所以它能够大大提高鉴定出样品中所含杂质的几率。质谱信息有助于分析人员确证、鉴定和定义药物成分的质量。相比于之前发布的反向液相色谱(RPLC)纯度分析法， UPC与质谱仪联用可为药物分析提供一款重要的分析工具。1-3 本实验在方法开发的筛选过程中观察到一些异常现象。“在一个实例中，假设杂质F的标准溶液在几天后将变得不稳定。在本应用纪要中，我们将ACQUITY UPC2TM系统与ACQUITYSQD联用，对方法开发标准品和过期甲氧氯普胺样品分析中出现的未知峰进行鉴定，并分析它们之间的关系。通过相应MS质谱数据推测和确证API的杂质关系。最后，通过甄别杂质分析的MS数据，确保存在未知峰时的方法学专属性，从而进一步调节最终的方法. 图1.甲氧氯普胺的化学结构。 沃特世解决方案 ACQUITY UPC系统Empower@3软件 ACQUITY SQD 质谱仪 KEY WORDS UPC2，药物杂质，稳定性指示法，降解分析，方法开发，甲氧氯普 胺，合相色谱 图2.采用UPCCSH 氟-苯基固定相分析所得的EP杂质双峰图及相应MS谱图分析。 杂质F工作标准品溶液稳定性研究 在方法开发过程中，杂质F的峰形随着时间的推移逐渐降解。一周的时间内，色谱图中出现了相关未知峰。另外，标准溶液的颜色从澄清渐变为褐色。MS分析所得质量数列表见表1。这些质量数与保留呆间2.0-3.5min之间的UV迹线(未示出)中显著的谱峰相关联。m/z=330到296的XIC形成了多个峰。 工作标准溶液采用甲醇制备。多数杂质峰均为甲基化或甲氧基化的产物。基于上述信息，本实验将对备用稀释剂进行考察，抑制此类转化的发生。目前，在进行适用稀释剂研究之前，工作标准溶液的保质期已缩短至3天。表1中第8个未知峰(m/z=258)与4-乙酰氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯(通常被称为“杂质B")的质量数相同。由于保留时间存在差异，杂质F工作标准品中发现的此未知峰经确定与EP杂质B不同，杂质B的洗脱时间大约为0.48 min。其它杂质的来源仍未能确定。它们可能来自溶液的降解产物或参比物质。 名称 Rt (min) 实测 m/z △质量数 推测转化途径 EP杂质F 2.924 286 未知物1 2.268 344 +58 Da 甲氧基化+甲基化 未知物2和4 2.303和2.614 330 +44Da 甲氧基化 未知物3和6 2.680和2.886 296 +10Da 水解+两次甲基化 未知物5 2.864 356 + 70 Da ? 未知物7 3.113 252 -34Da 脱Cl- 未知物8 3.288 258 -28 Da 脱两个CH3基团 表1.甲氧氯普胺EP杂质F标准溶液降解物的质量量。 图3.甲氧氯普胺EP杂质F标准溶液降解物的MS ES+TIC。 过期甲氧氯普胺样品研究 本实实采用Empower 3软件控制ACQUITY UPC系统联用ACQUITY SQD质谱仪，为过期甲氧氯普胺样品中的杂质检测提供了一个简单的解决方案。右键单击查看窗口即可提取UV色谱基线中峰的MS谱图，快速确证已知杂质以及鉴别12种未知杂质，如表2所示。UPC可为杂质检测提供S/N>10和UV色谱基线中面积%20.05%的检测灵敏度。实验对过期甲氧氯普胺样品进行了分析，确定其中是否存在表1中所示的质量数。经MS数据确证，存在与EPF相关的4种杂质(共8种)；m/z=296、344、252和258。除已知杂质外，共检出7种未知杂质。质量数、保留时间、UV信噪比见表2。 图4.UV275nm波长下甲氧氯普胺降解样品的色谱图。主要杂质已标记。 Rt %面积 USPs/n m/z 杂质B 0.49 0.48 148 258 未知物#1 0.90 0.34 54 226 杂质“9” 1.18 1.34 255 (ESI-) 180 杂质D 1.41 1.14 229 224 未知物#2 2.18 0.12 22 306 未知物#3 2.33 0.02 8 358 未知物#4 2.38 1.29 195 n/a 杂质A(同分异构体1) 2.49 0.28 48 342 杂质A(同分异沐体2) 2.53 0.41 65 342 相关杂质F(未知物1) 2.61 0.69 87 344 相关杂质F(未知物6) 2.83 0.06 10 296 杂质F 2.91 0.51 82 286 相关杂质F(未知物7) 3.09 0.14 20 252 未知物5 3.14 0.55 77 310 相关杂质F(未知物8) 3.28 0.14 20 258 杂质G 3.37 0.87 130 316 甲氧氯普胺 3.43 86.07 8186 300 未知物6 3.60 2.83 380 266 未知物7 3.63 1.09 165 272 杂质H 4.53 1.62 101 (ESI-)194 表2.过期甲氧氯普胺样品进样后的UV275nm色谱迹线峰列表。 结论 ACQUITY UPC系统联用MS为杂斤分析提供了一个全面的解决方案。此配置能够科学、快速地解答参比标准品杂质的相关问题，如上述杂质C参比标准品的相关内容所示。UPC/MS可为杂质F工作标准品的稀释剂选择提供指导，并可相应调整工作标准溶液的保质期。另外，通过杂质F的稳定性研究可深入了解药物样品中可能存在的其其潜在杂杂。此外，过期甲氧氯普胺中还检测到7种未知杂质。通过Empower 3软件可轻松实现对UV和MS数据的分析。总之，采用UPC²/MS系统增加了药物质量方面的知识储备，可改善实现分析目标的方法学步骤。 ( 参考文献 ) ( 1. A huja S， Alsante K. H a ndbook of Isolation and Cha r acterization of Impurities inPharmaceutical Compounds. Elsevier. 2003. ) ( 2. Jones MD et al. Identification and Characterization of an Isolated ImpurityF r action： Analysis of an Unknown Degradant Found in Quetiapine Fumarate. Waters Application Note 720003079EN.2 0 09 Oct. ) ( 3 . Jones M D et al. A Workflow Ap p roach for the ldentification and St r uctural Elucidation of Impurities of Quetiapine Hemifumarate Drug Substance. Wa t ers Application Note 720003081EN. 2009 Oct. ) ( 4. Jones MD， Potts W. UPCMethod Development for Achiral Imp u rity Analysis.Waters Appl i cation Note 720004577. 2013 Jan. ) THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE， Waters、 Empower、和ACQUITY是沃特世公司的注册商标。Ultra Performance Convergence Chromatography、UPC、CSH和The Science of What’s Possible是沃特世公司的商标。其他所有商标均归各自的拥有者所有。 O2013沃特世公司。印制于中国2013年2月720004575ZH AG-PDF ( 沃特世科技(上海)有限公司 ) 成戈：028-65545999 ( 沃特斯中国有限公司 香港：852-29641800 ) 免费售后服务热线：800(400) 820 2676Www.waters.com 使用UPC²/MS进行杂质分析 使用UPC/MS进行杂质分析