化学药中有效成分含量分析检测方案

天津药学 2002年8月 第14卷第4期77 收度。测定结果，辅料对测定无影响，见表1. 表1 空白辅料吸收光谱数据 波长 吸收度 波长 吸收度 481.1 0.000 481.4 0.002 481.7 0.001 482.0 0.002 482.3 0.001 482.6 0.000 482.9 0.002 483.2 0.001 2.5 回收率实验 按琥乙红霉素片剂处方中除琥乙红霉素外的所有辅料的比例制成混合辅料，取琥乙红霉素约16mg，精密称定，与混合辅料约 30mg，混匀，置100ml容量瓶中，加乙醇5ml振摇溶解，加0.1mol/L 盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过作为供试液。另取琥乙红霉素约16 mg， 精密称定，置100ml容量瓶中，加95%乙醇5ml振摇溶解加0.1mol/ L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照液。分别精密量取上述供试液和对照液各5 ml，置25ml容量瓶中，加0.1mol/L盐酸5. 0 ml，摇匀，加13.5 mol/L 硫酸 12.5 ml，混匀，放置30分钟冷却后，加0.1mol/L 盐酸至刻度，在482nm 波长处分别测定吸收度。按供试液与对照液的吸收度比值计算回收率。测得的平均回收率为99.2%， RSD 为0.9%(n=5)。 2.6 精密度试验 取琥乙红霉素片剂约50 mg，精密称定，置100ml量瓶中，按2.5”项自加乙醇5 ml 振摇溶解”起， 同法操作测定，按吸收度比值计算含量，重复6次，求得RSD为0.8%。 2.7样品测定 取琥乙红霉素片剂约 50 mg，精密称定，置容量瓶中，按2.6”项操作，按吸收度比值计算含量。共测定5批，与抗生素微生物检定法测定结果比较，二法测定结果无显著差异(P>0.05)，结果见表2。 表2 含量测定结果(%) 批号 010520 010521 010912 020101 020102 本法 95.9 95.9 96.3 97.9 96.6 微生物法 95.6 96.5 96.2 97.3 97.1 3 讨论 3.1 利用本法进行回收率试验，回收率良好， RSD 为0.9%；进行精密试验， RSD 为0.8%。测定结果与微生物检定法测定结果无显著差异(P>0.05) 3.2 本法于显色后测定吸收度，为减小误差，供试品溶液与对照品溶液应平行操作，显色剂最好临用新配。 3.3 本法操作简便，对仪器要求不高，检验周期短，与微生物检比较，减少了生产过程中的周转时间，适用于半成品的质量控制。 ( 参考文献 ) ( 1 杜小荣，叶基倩.罗红霉素颗粒剂的紫外分光光度测定.中国医 药工 业 杂志，2000，31(6)：273 ) 顶空气相色谱法测定氢化可的松中有机挥发性杂质 刘树春，安彦，王 卫 (天津市药品检验所，天津300070) 摘 要 目的：建立顶空气相色谱法分析氢化可的松中有机挥发性杂质。方法：采用水溶液顶空进样气相色谱法，用岛津 CBP10-M 25-025石英毛细管色谱柱，按外标法进行定量。结果：二氯甲烷在浓度12~240 mg/L，三氯甲烷在浓度0.12~2.40mg/L，苯在0.040~0.800 mg/L，二氧六环在7.60~152.0 mg/L，三氯乙烯在1.60~32.00 mg/L浓度范围内均呈良好的线性关系。最低检测限分别为1.20、0.12、0.04、3.8和1.6 mg/L；该法的回收率为二氯甲烷99.3%.'，-三氯甲烷101.3%，苯95.04%，二氧六环92.21%，三三氯乙烯101.4%， RSD 分别为4.2%、6.0%、8.9%、11.8%和4.6%(n=9)。结论：方法简单、准确、灵敏度高。 关键词 顶空气相色谱法，有机挥发性杂质，氢化可的松 中图分类号：R977.1*1 文献标识码：A 文章编号：1006-5687(2002)04-0077-02 氢化可的松是肾上腺皮质激素类中的糖皮质激素，现已人工合成，具有很好的抗炎、免疫抑制、抗毒和抗休克等作用。中国药典》2000年版二部和美国药典》25版均有收载。 美国药典》对该品种有严格的有机挥发性杂质检查的规定，其中包括二氯甲烷、三氯甲烷、苯、二氧六环和三氯乙烯。由于美国药典所采用的气相色谱法为 G27 化学交联色谱柱在国内不易获得，而且是直接进样的方法，大量的样品会污染 进样口和毛细管色谱柱。本实验采用水溶液顶空进样分析方法，按外标法测定镁国药典》中所规定的5种有机挥发性杂质，避免了样品对仪器的污染，而且方法灵敏度高，简单快速，样品测定结果令人满意。 1 仪器与试药 岛津GC-14B 气相色谱仪， HSS-2B 顶空进样器， CR-7A eplus 数据处理机。氢化可的松由天津市某药厂提供，所用 试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：岛津 CBP10-M25-025石英毛细管柱0.22mm×30 mm；柱温60℃；进样口温度140℃；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，温度260℃；载气为氮气。对照品及供试品图谱见图1和图2。理论板数按二氧六环峰计不低于30000，每个峰之间的分离度大于1.5。 1二氯甲烷 2三氯甲烷 3苯E4二氯六环 5三氯乙烯 图1对照品溶液色谱图 图2 供试品溶液色谱图 2.2 线性范围配制不同浓度的对照水溶液，取上述对照溶液各5.0 ml 置于 15 ml顶空瓶中，加无水硫酸钠1.0g密封，在80℃加热60分钟，取顶空瓶中气体，在上述色谱条件下，进样0.5ml，以对照溶液中各主成分峰的峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标进行线性回归。结果见表1。 表1 线性范围测定结果 名称 浓度范围(mg/L) 回归方程 r n 二氯甲烷 12~240 Y=1691X-17 400 0.996 8 6 三氯甲烷 0.12~2.40 Y=9032X-647.5 0.997 8 6 苯 0.040~0.800 Y=10 370X+ 9.7 0.9977 6 二氧六环 7.60~152.0 Y=422.2X+1110 0.9992 6 三氯乙烯 1.60~32.0 Y=1293.5X-2698 0.9939 5 2.3 回收率与精密度 取已测知有机挥发性杂质量的氢化可的松样品1.0g精密称定，配制成分别含对照品二氯甲烷96、120 和 140 mg/L；三氯甲烷0.96、1.2和1.44 mg/L；苯0.32、0.40和0.48 mg/L；二氧六环60.8、76.0和91.2 mg/L 外标法计算测定结果，见表2。 表2 回收率与精密度测定结果 名称 回收率(%) RSD(%) n 二氯甲烷 99.3±4.2 4.2 9 三氯甲烷 101.3±6.0 6.0 9 苯 95.04±8.5 8.9 9 二氧六环 92.21±10.9 11.8 9 三氯乙烯 101.4±4.6 4.6 9 2.4样品的测定 取氢化可的松样品1.0g精密称定，置顶空瓶中，加无水硫酸钠1.0 g，精密加水5 ml， 密封，照上述方法测定。测定结果表明3批样品中二氯甲烷、三氯甲烷、苯、二氧六环和三氯乙烯均未检出。 2.5最低检出限 S/N> 3本方法水溶液中二氯甲烷、三氯甲烷、苯、二氧六环、三氯乙烯的最低检出限分别为1.20、0.12、0.04、3.8和1.6mg/L。 3讨论 3.1 限度问题 有机挥发性杂质在在在国药典》25版版，特指对二氯甲烷、三氯甲烷、苯、二氧六环和三氯乙烯进行检查的方法，其限度见表3. 表3 有机挥发性杂质限度 名称 限度(ug/g) 二氯甲烷 600 三氯甲烷 60 苯 2 二氧六环 380 三氯乙烯 80 由于上述5种溶剂均属于1997年第四届人用药品注册技术规范国际协调会(ICH)所列入的第一类和第二类必须控制的毒性试剂，所以美国药典》25版对此控制非常严格。(国药典》2000年版尚未对该品种作出要求。 3.2气液平衡温度由于采用顶空进样的方法，顶空瓶中气体的量十分重要，我们在样品中加入一定量的无水硫酸钠，并把平衡温度控制在80℃，可以减少气体中水分的含量。 3.3外标法测定本法采用外标法是由于采用3 HSS-23 型全自动温度平衡和自动进样装置，温度控制准确，取样精度可靠，对于限度检查项，完全能满足分析要求。 4总结 件国药典》2000年版二部附录收载了有机溶剂残留量测定法，以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂残留量，其中包括苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷，反而不包括美国药典》中有机挥发性杂质的三氯乙烯，但在正文中所检查残留溶剂的品种较少。本文所建立的顶空气相色谱法，由于使用了商品化的毛细管柱，更能解决由于进样量大而使进样口和毛细管柱的污染问题，而且操作简单，方法准确可靠，有助于提高国内药品标准水平。 ( 参考文献 ) ( 陈新谦.新编药物学.第13版.北京：人民卫生出版社， 1992.363 ) 收稿日期：na Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net