中药中有效成分含量分析检测方案

使用配备PDA检测器的PerkinElmer FlexarFX-15系统检测人参根中的皂苷 简介 在亚洲，人参属植物(又称作人参)的根用作草药已有超过2000年的历史，传说其具有各种各样有益于健康的功效，包括(但不仅限于)抗氧化、抗癌、抗炎症、抗糖尿病、抗高血压的作用。追溯人参的药理活性化合物是皂苷。虽然皂苷潜在的 作用基里尚未完全阐明，但其作用类似于类固醇激素。人参的品种数目繁多，每个品种都有其自身特定的皂苷。实际上已经有超过40种的皂苷单体被鉴定。皂苷是一个多样组的甾体皂苷，该甾体皂苷由四个环状甾体及糖基构成(图1)，，该结构的皂苷被认为是人参属植物中独有的，且以较高的浓度存在于根部。皂苷有两个主要的基团：一个主要基团是，人参二醇基团或者Rb1基团包括Rb1，Rb2，Rc，Rd，Rg3，Rh2和Rh3；另一个主要基团是人参二醇基团或者Rg基团包括Rg1，Re，Rf，Rg2和Rh1。 皂苷定性、定量的分析技术需要确保人参根前处理程序的质量控制，以及其新陈代谢及生物药效的研究。本应用文献介绍了一种同时测定七种皂苷的高效液相色谱法，文章介绍了方法的操作条件及性能数据，包括精密度、准确度、线性。该方法可应用于人参(高丽参)根胶囊及各种类型的皂苷鉴定。 图1皂苷的分子结构 试验 分别称取7中皂苷单体的标准物质适量，70：30的甲醇/水溶液(稀释溶液)溶解，涡旋1min，从而制备皂苷的标准储备溶液，各皂苷单体的浓度均为1mg/mL。分别移取7种皂苷单体的标准储备溶液各0.5m L， 混匀，制备浓度为0.14mg/mL的工作标准。 工作标准连续进样8次以评估精密度。线性范围为7ug/mL-140pg/mL。为了评价方法的准确度，在纯水中加入适量的工作标准制备各皂苷单体浓度均为7ug/mL的溶液，测定回收率。从一种著名品牌的胶囊中取大约3g的人参粉末转移至50mL的容量瓶中，加入30mL的稀释溶液，涡旋1min后超声30min， 然后5000rpm离心10min，收集上层的离心溶液待用。继续在沉淀物中加入15mL的稀释溶液，重复上述涡旋、超声、离心的步骤。收集第二次的上层离心溶液与第一次的上层 离心溶液合并于50mL的容量瓶中，稀释溶液定容至刻度，充分混匀，进样之前用0.2um尼龙滤膜过滤。 一台配有Flexar FXPDA光电二极管阵列检测器的PerkinElmer FlexarTM FX-15 UHPLC为本实验的检测设备，使用PE Brownlee SPP C-18， 50 x2.1 mm， 2.7um(表面多孔颗粒)的色谱柱进行分离。 表1UHPLC系统及色谱条件 时间 流速 B% curve (min) (mL/min) 2.5 0.4 30-35 1 3.5 0.4 35-50 1 进样体积 2uL PDA检测器 扫描范围190-400nm，记录设置为 203nm UHPLC色谱柱 PE Brownlee SPP C-18， 50x2.1 mm，2.7 um (表面多孔颗粒) 流动相 柱温45℃，部件号：N9308402 A：水 B：乙腈 结果与讨论 该方法的测定最佳流速为0.4mL/min， 45℃平衡压力为5150psi(355bar)， 6min钟内所有的色谱峰流出色谱柱。皂苷标准溶液及高丽参的测定色谱图见图2和图3所示。方法获得优越的性能：每种皂苷的线性相关系数的平方(R2)不小于0.997，精密度(相对标准偏差RSD%)范围从0.6%至1.2%。纯水的加标回收率范围从91.2%-108.0%，平均值为99.9%(图4)。详细的方法性能、人参样品测定结果和加标样品的测定结果见表2所示。 图2皂苷工作标准的分析色谱图 图3人参样品的分析色谱图 图47ppm皂苷水溶液的分析色谱图 PerkinElmer， Inc. 珀金埃尔默仪器(上海)有限公司 地址：上海张江高科园区李冰路67弄4号 邮编：201203 电话：8008205046或 021-38769510 传真：021-50791316 www.perkinelmer.com.cn 化合物 RSD% r2 范围 高丽参 7ppm (n=8) (ug/mL) (mg/g) 水加标 Rg1 0.9 0.9997 7-140 13 97.5 Rf 0.6 0.9971 7-140 1 91.2 Rg2 1.2 0.9983 7-140 1 98.7 Rb1 1.1 1 7-140 10 102.1 Rc 1.2 0.9994 7-140 10 100.3 Rb1 1.0 0.9996 7-140 7 101.4 Rd 1.2 0.9997 7-140 4 108.0 Avg/Tot. 1.0/NA 0.9988/NA NA NA/46 99.9/NA NA=不适用 结论 7种皂苷在6min内被很好的分离，方法的线性相关系娄R2≥ 0.997，精密度RSD%≤1.2%，回收率的平均值为99.9%。高丽参的皂苷测定结果为46mg/mL。Flexar FX PDA测器能够稳定和准确的测定的波长范围是190nm-700nm，包含紫外及可见光的波长。PE的Chromera软件提供了多种数据采集和处理的功能，包括创建谱库，峰纯度，三维谱图和等高线图，该软件是一款解析三维光电二级管阵列色谱信息强有力的工具。谱库搜索功能允许储存标准色谱峰，以用于后续实际样品中峰的鉴定、确认。 ( 参考文 献 ) ( 1 . Rebecca M .Corbit， Jorge F.S. F erreira， Stephen D. Ebbs， and L aura L. M urphy. Simplified E x tractionof Ginsenosides from American Ginseng for High-Performance L iquid Chromatography-Ultraviolet Analysis J. Agric. Food Chem. 2005， 53， 9867-9873 9867. ) ( 2. Attele， A.S.； Wu， J.A.；Yuan， C .-S. Ginseng P h armacology：Multiple Constituents and M ultiple Actions. Biochem.Pharmacol. 1999，58， 1 685-1693. ) 注：本应用文献如有更改，恕不另行通知。 要获取全球办事处的完整列表，请访问http：// www.perkinelmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs版权所有 ◎ PerkinElmer， Inc. 保留所有权利。PerkinElmer是PerkinElmer， Inc. 的注册商标。其它所有商标均为其各自持有者或所有者的财产。CN