玉米赤霉醇中杂质定性检测方案(液质联用仪)

离子阱-飞行时间串联质谱定性分析玉米赤霉醇及其杂质 摘 要：本文研究α-玉米赤霉醇(a-zearalanol)标准物质中痕量杂质的测量方法。采用高效液相色谱/离子阱一飞行时间/串联质谱仪(HPLC-IT-TOF MS)对α-玉米赤霉醇中杂质做定性分析，得到杂质的四级谱，碎片质核比(M/Z)测量值与理论值差异的相对值在10ppm之内。分析了多碎片可能裂解途径和结构，推断出α-玉米赤霉醇标准物质中两个主要杂质分别为β-玉米赤霉醇和玉米赤霉酮，并用标准品对上述结果进行了验证。 关键词：：α-玉米赤霉醇 HPLC-IT-TOF MS 杂质 前言 玉米赤霉醇是略带雌激素活性的合成激素，有催生长、提高瘦肉率的药物特性，作为家畜增重的外源激素，效果良好，但对人体生殖系统的形成和血浆中的甲状腺素水平有影响。家畜组织中玉米赤霉醇残留量一般为ug/kg水平，尽管极微量，但它仍对人体有潜在的危害。目前，许多国家对玉米赤霉醇用作动物促蛋白合成激素有严格控制，甚至禁止使用。我国农业部第235号公告明确规定玉米赤霉醇禁止用于所有食用动物，所有可食动物尿液，结构式如图1所示。 图1：：aα-玉米赤霉醇结构图 本文在研究a-玉米赤霉醇(a-zearalanol)标准物质时，采用高效液相色谱/离子阱一飞行时间/串联质关仪(HPLC-IT-TOF MS)对其中杂质进行定性鉴定。高效液相色谱/离子阱一飞行时间/串联质谱仪是将高效液相色谱和离子阱质谱仪(IONS TRAP)以及飞行时间质谱仪(TOFMS)串联起来，使其在准确质量数和灵敏度方面较之其它多级质谱有较大提高，仪器具 备高分辨率性能，能够准确提供分子和碎片离子的结构信息。由HPLC-IT-TOF MS 得到杂质的多级谱，对碎片裂解规律进行了探索，利用TOF较高的质量准确度，推测了杂质的可能结构，并用标准品对方法进行验证，结果表明，高效液相色谱/离子阱一飞行时间/串联质谱方法对杂质定性分析是很有效的。 仪器概况 LCMS-IT-TOF 高速液相色谱-离子阱-飞行时间质谱特点：高精确度(小数点后四位)高分辨率(>10，000)，高灵敏度外标法高校正稳定性真正的 MS" 功能(n=10)快速正负极性转换功能优化的数据分析能力 分析方法 将玉米赤霉醇标准品适量溶于乙腈溶液中，得到其标准溶液。使用岛津UFLC超快速液相色谱系统对其进行分离。 液相色谱条件 ( 色谱柱： Shim-pack XR-ODS， 3.0 mm i.d× 50 mm， 2.2 上 p m ) 流动相：A才水 B 乙腈 洗脱方法：梯度洗脱 时间(min) B相(%)0.0 158.0 909.0-11.0 15 流速：1.0ml/min 进样量： 1ul 质谱条件 离子化模式：ESI源 分析模式：负离子模式 雾化气流速： 1.50L/min CDL温度： 200℃ 加热模块温度：200℃ 检测器电压： 1.70kv 碰撞能量：50% 累积时间：30msec 采集范围： m/z 100-400 自动调谐优化质谱条件，外标法校正质量数 分析结果 1. PDA谱图和总离子流图 图1与图2分别显示了玉米赤霉醇标品分离的 PDA谱图和相应的总离子流图 图2玉米赤霉醇的总离子流图 2..多级质谱分析结果 2.1玉米赤霉素的多级质谱图及预测结果 首先对主成分玉米赤霉醇(峰2)的多级质谱数据进行分析，得到以下的结果 MS1 图3玉米赤霉醇(峰2)多级质谱图 图4玉米赤霉醇多级碎片预测结果 玉米赤霉醇的多级碎片示意图 Ci8H250sExact Mass： 32117.0127402—9-EExxacta：03.1596 ：CoExact Mass：277.1804H0ExactMlass： 23.1542 Exact Mtass：191.1436 对照玉米赤霉醇多级碎片的分析结果，对峰1与峰3化合物的成分进行分析 2.2杂质1(峰1)的多级质谱图及预测结果 图5峰1的多级质谱碎片及预测结果 峰1与峰2相比除保留时间外，具有完全一致的多级质谱碎裂途径。根据以往报道，峰1与峰2分别为玉米赤霉醇的α、β异构体。 2.3杂质2(峰3)的多级质谱图及预测结果下图显示了峰3的多级质谱数据及一级预测结果。 根据所得到的碎片信息及分子式预测结果，推测峰3为玉米赤霉酮 OH CH HOC18H2405Exact Mass： 320.1624 总结 用高效液相色谱/离子阱一飞行时间/串联质谱仪 (HPLC-IT-TOF MS) 对α-玉米赤霉醇标准物质候选物中未知杂质进行了定性鉴定，这种组合式的LC/MS/MS分析方式，充分发挥了不同质谱检测器的优势，飞行时间质谱仪以其较高的全扫描灵敏度和高精密度的质量测定，对低含量未知杂质的鉴定显示出其独特的优势，离子阱多级质谱提供了相应的碎片数据，在标准物质研究中对低含量杂质测量、未知化合物鉴定具有良好的应用前景。这是国内首次采用该方法分析玉米赤霉醇标准物质中的杂质。