黄曲霉素(AFT)对有机体具有致突、致癌、致畸性,被列为可能的人体致癌物质。黄曲霉毒素在多种人类食物中被发现,如玉米、坚果、花生等等,以B1、B2、G1、G2的形式存在。AFTB1在动物体内可转变成两种主要代谢产物-AFTM1和AFTQ,前者的毒性和致癌性与AFTB1相近,主要存在于动物的尿和乳汁中。
黄曲霉毒素可使用正相和反相液相色谱法分离,反相色谱法操作较容易、流动相毒性也较低,被广泛采用。
HPLC柱前衍生法分析黄曲霉毒素 B1 黄曲霉毒素(AFT)对有机体具有致突、致癌、致畸性,被列为可能的人体致癌物质。黄曲霉毒素在多种人类食物中被发现,如玉米、坚果、花生等等,以B1、B2、G1、G2的形式存在。AFTB1在动物体内可转变成两种主要代谢产物- AFTM1 和AFTQ, 前者的毒性和致癌性与AFTB1相近,主要存在于动物的尿和乳汁中。 也较低,被广泛采用。使用反相液相色谱检测时,可通过柱前衍生法或柱后衍生法,提高AFTB1、AFTG1的检测灵敏度,使之与AFTB2、AFTG2 在相近水平下检测。柱前衍生法无需专用柱后衍生反应系统,方法简单。本方法通过三氟乙酸(TFA) 柱前衍生, HPLC检测黄曲霉毒素B1。该方法可用于4种黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2同时检测,也可用于AFTM1 检测。 黄曲霉毒素可使用正相和反相液相色谱法分离,反相色谱法操作较容易、流动相毒性 样品前处理 取 50pL黄曲霉毒素B1标样溶液(10ng/mL, 溶剂苯-乙腈溶液(98:2 v/v)),用氨气吹干, 加入 200pL 正己烷和 100pL三氟乙酸,混匀1min, 室温下放置 10min, 氮气吹干, 用乙腈水溶液(乙腈/水85:115 v/v) 50uL 重新溶解,混匀 30s,经0.45um滤膜过滤,供液相色谱仪检测用。 LC分析条件 仪器 Shimadzu LC-20A液相色谱系统(含LC-20AT二元泵、CTO-20A柱温箱,RF-10AXL 荧光检测器, LCsolution 色谱工作站) 色谱分析条件 流动相:年甲醇:乙腈:水=1:3:6 Shim-pack VP-ODS (4.6mm*150mm,5um) 流速:1.0mL/min色谱柱: Shim-pack GVP-ODS (4.6mm*10mm); 激发波长 365nm发射波长425nm 柱温:40℃ 进样量::10pL 分析结果 黄曲霉毒素B1 (AFTB1)标样色谱图及分析结果 图1衍生后AFB1标样色谱图 图2未衍生AFTB1标样色谱图 表1 黄曲霉毒素B1分析结果 化合物 标样浓度(ng/mL) 保留时间(min) 峰面积 峰高 AFTB1 衍生 10 3.368 329246 37098 AFTB1 未衍生 10 6.721 12685 1024 结论 一三氟乙酸柱前衍生法可用于 AFTB1 检测,增强其荧光强度,提高检测灵敏度。通过以上实验检测 AFTB1标样(10ng/mL),未经 衍生标液的信噪比为42,衍生后信噪比提高至S/N=1434。
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