蔬菜、水果及制品中添加及非法添加检测方案

HPLC柱前衍生法分析黄曲霉毒素 B1 黄曲霉毒素(AFT)对有机体具有致突、致癌、致畸性，被列为可能的人体致癌物质。黄曲霉毒素在多种人类食物中被发现，如玉米、坚果、花生等等，以B1、B2、G1、G2的形式存在。AFTB1在动物体内可转变成两种主要代谢产物- AFTM1 和AFTQ， 前者的毒性和致癌性与AFTB1相近，主要存在于动物的尿和乳汁中。 也较低，被广泛采用。使用反相液相色谱检测时，可通过柱前衍生法或柱后衍生法，提高AFTB1、AFTG1的检测灵敏度，使之与AFTB2、AFTG2 在相近水平下检测。柱前衍生法无需专用柱后衍生反应系统，方法简单。本方法通过三氟乙酸(TFA) 柱前衍生， HPLC检测黄曲霉毒素B1。该方法可用于4种黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2同时检测，也可用于AFTM1 检测。 黄曲霉毒素可使用正相和反相液相色谱法分离，反相色谱法操作较容易、流动相毒性 样品前处理 取 50pL黄曲霉毒素B1标样溶液(10ng/mL， 溶剂苯-乙腈溶液(98：2 v/v))，用氨气吹干， 加入 200pL 正己烷和 100pL三氟乙酸，混匀1min， 室温下放置 10min， 氮气吹干， 用乙腈水溶液(乙腈/水85：115 v/v) 50uL 重新溶解，混匀 30s，经0.45um滤膜过滤，供液相色谱仪检测用。 LC分析条件 仪器 Shimadzu LC-20A液相色谱系统(含LC-20AT二元泵、CTO-20A柱温箱，RF-10AXL 荧光检测器， LCsolution 色谱工作站) 色谱分析条件 流动相：年甲醇：乙腈：水=1：3：6 Shim-pack VP-ODS (4.6mm*150mm，5um) 流速：1.0mL/min色谱柱： Shim-pack GVP-ODS (4.6mm*10mm)； 激发波长 365nm发射波长425nm 柱温：40℃ 进样量：：10pL 分析结果 黄曲霉毒素B1 (AFTB1)标样色谱图及分析结果 图1衍生后AFB1标样色谱图 图2未衍生AFTB1标样色谱图 表1 黄曲霉毒素B1分析结果 化合物 标样浓度(ng/mL) 保留时间(min) 峰面积 峰高 AFTB1 衍生 10 3.368 329246 37098 AFTB1 未衍生 10 6.721 12685 1024 结论 一三氟乙酸柱前衍生法可用于 AFTB1 检测，增强其荧光强度，提高检测灵敏度。通过以上实验检测 AFTB1标样(10ng/mL)，未经 衍生标液的信噪比为42，衍生后信噪比提高至S/N=1434。