生物药品药物研发检测

生物制药从研发到消费者可用性的道路是一个漫长而彻底的过程，旨在确保有效和质量控制。生物仿制药的开发需要与原始生物制药一起评估分子的高阶结构（HOS）。此外，生物制药的结构对制造过程或储存环境的变化很敏感，有必要评估这些分子在任何加工或储存改变后所保持的更高阶结构。 关键词：新型冠状病毒，SARS-CoV-2，新冠肺炎，生物制药，抗体药物，生物相似，VHH抗体，HOS，二级结构，三级结构，圆二色性

圆二色性（CD）是一种在均匀条件下估计低浓度核酸三级结构的有效技术。本申请说明报告了使用高通量CD（HTCD）测量系统和主成分分析（PCA）对G-四链体（G4）适体的三级结构评估。 关键词：核酸医学、生物传感器、DNA适体、G-四链体、G4适体、圆二色性、高通量CD测量系统、HTCD、主成分分析、PCA

近期，中国食品药品检定研究院及国家药品监督管理局的研究人员发表了关于抗体热稳定性分析的相关技术最新的研究成果，可以为国内抗体药物研发企业提供相应的技术参考。

Omni新一代活细胞自动化实时成像系统，能够帮助研究者在培养箱内获得前所未有清晰度的延时影像，去更好地了解细胞动态生长过程。通过自动高质量地捕获样本在明场/荧光下的图像，它能够在培养箱环境中连续地对多孔板中的活细胞进行成像。这将赋予您了解细胞动态生理、追踪其活力以及功能的全新技能。并且灵活性很高，可以快速扫描所有类型的细胞培养皿、培养瓶、微孔板等，同时能通过功能强大而直观的软件迅速提供可靠的分析结果。

显微镜法作为0982检查的第一法，在软膏剂、乳膏剂、凝胶剂等其他剂型中得到了广泛应用，显微镜法粒度分析仪，作为0982粒度检查方法的第一法显微镜法的相关检测设备，得到了越来越多的关注。胤煌科技YinHuang Technology自主研发的显微镜法粒度分析仪YH-MIP-0982在软膏剂、乳膏剂、凝胶剂等得到了广泛的应用。

参照Moderna和BioNtech的新冠疫苗配方，以ALC-0315、MC3、SM102为主要脂质，制备包载mRNA的脂质纳米颗粒（LNP）。

目前生物制品公司的生物过程工艺开发与优化偏重干监测常规的温度、搅拌、溶解气体、OD值等理化条件和少数培养基成分与代谢物等的变化，缺乏对于细胞培养上清液组分直接、全面且快速的客观动态数据分析，因此无法精准优化细胞培养工艺条件，甚至影响抗体类药物等的产品品质:而培养基生产商为了开发高效低成本培养基配方，并且要保证批次间一致性，则需要投入大量的人力物力，配备不同检测功能的仪器来实现培养基成分的全方位检测。为满足快速全面分析细胞培养上清液组分和培养基组分，将基础碳源、氮源、核酸、维生素和其他主要代谢物同时检测分析的需求，我们开发出“细胞培养上清液方法包”。该技术平台采用超快速三重四极杆液质联用仪，仅需 17 分钟，即可同时监测 95 种细胞培养上清液营养成份和代谢物等的相对丰度变化 。无需用户自行开发方法，即装即用。所有目标化合物信息与实验方法全内置，且根据需要可增加，可拓展。

生物技术药物质量研究主要包括分析方法的开发建立、理化特性分析、生物学活性测定、生产工艺的优化及稳定性评价、残留杂质检测、制剂相关的安全性研究、产品的配方及保存运输条件的确定等几个方面，其中任何环节的疏忽都可能对终产品的安全性和有效性产生影响。例如,在细胞培养过程中为消除泡法而加入的消泡剂，不仅对细胞的牛理产生不利影响，也会影响人体健康:蛋白质药物生产、贮藏、运输等过程中产生的聚集体则会导致药物失活， 甚至引起严重不良反应;表面活性剂等药用辅料的品种与用量，直接与生物药临床用药安全性与毒副作用息息相关。因此，质量研究应贯穿生物技术产品的整个研发过程。通过质量研究可以对产品的性质有更全面的了解，确定产品的关键质量属性，并根据产品本身的变异及检测方法的精密度和稳定性确定相应的质控标准。因此，质量研究是质量控制的前提和基础。可在一定程度上促进质控水平的提高并不断完善质量标准。

为简化复杂生物基质中抗体药物的定量分析工作，岛津研发人员对抗体药物前处理过程进行了独特的设计，开发了nSMOL(nano-surface and mo lecular-orientation limited proteolysis)技术，该方法能够有效富集血浆/血清中的抗体药物,实现Fab区域的选择性酶解，提高酶解效率，极大降低了酶解产物的复杂性，为复杂基质中抗体药物准确定量提供了非常有利的工具。

内源性物质的生物分析目前主流分析方法有四种，包括替代基质法，替代待测物法，标准加入法和背景扣除法。本文重点就替代基质法做重点介绍，这种方法的特点是成本低，获取简单。

Thermal shift assay（TSA），也被称为差示扫描荧光法（DSF）是表征蛋白热稳定性的常用方法之一，广泛应用于蛋白配体互作表征，突变体、缓冲液、去垢剂筛选等领域。但DSF的实验操作较繁琐，需要根据蛋白的特性及去垢剂兼容性选择合适的染料，优化蛋白和染料的比例，在配制样品时还要考虑染料自带的有机溶剂对蛋白的影响。 时下被行业深度认可的无标记的TSA验证方法-也称nanoDSF技术，可解决DSF技术的局限性，样品无需加染料就可以直接上机检测了。下面我们一起通过用户的文献案例来进一步了解。

外周血单个核细胞是造血干细胞（HSC）在骨髓中发育而来的，是外周血中帮我们抵御疾病和感染的重要防线。

本文中，我们使用岛津细胞培养分析方法包通过LC-MS/MS方法监测mAb生产中的细胞培养工艺，该方法包能够在单个分析批中同时分析125种培养基组分。

本文使用生物惰性液相色谱仪分析质粒三种构型，通过优化色谱柱温度，使3种状态质粒分离度均大于1.5，实现基线分离。质粒样品重复分析6次，保留时间RSD小于0.1%，峰面积RSD小于1.80%，重复性结果佳。此方法适用于质粒样品的分析。

了解勃林格殷格翰如何为其单克隆抗体寻找最佳缓冲条件

动态光散射（DLS）是一种强大的技术，是一种测量颗粒大小、低聚化和分散性，以及环境变化（如药物偶联物的添加或储存缓冲液的变化）对它们的影响的方法。可提供有关生物制剂制备物的纯度和聚集状态的信息，并增加对候选物稳定性的更深入了解。 阅读DLS技术指南电子书，了解其工作原理，以及它如何帮助您优化候选药物的筛选过程。 我们介绍了在整个生物制药流程中，DLS技术如何帮助您改善每一个决策，同时也提供了一些设计DLS实验的实用技巧。

小核酸药物包括反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASO）药物、小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）药物、微小RNA（microRNA，miRNA）药物、RNA适配体(Aptamer)药物等，其中ASO和siRNA是目前主流的小核酸药物研究方向。

药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。由于肝脏是药物代谢的主要场所，体外代谢模型多以肝脏为基础。

单核细胞（monocytes）是体积最大的白细胞，直径14~20μm，呈圆球形，约占血液中单个核细胞数的10~30%。单核细胞是重要的天然免疫效应细胞，在感染过程中能快速从外周血迁移到组织中，参与病原体的识别和清除。同时，单核细胞还是巨噬细胞和树突状细胞的前体细胞。

第一题 CD3占比能高达70%？有人种差异吗？ 答：CD3的占比个体间差异较大，低至30-40%，高的话能够达到70-80%，40-60%是最常见的占比范围。 第二题 贵公司的CD34+细胞是如何分选得到的? 答：本公司提供的CD34+细胞是由我们国外试验室从经动员后的人外周血中分选而来，再通过进口运输至国内。

中国药典2020版0903不溶性微粒检查法包括光阻法和显微计数法两种方法。光阻法的测定原理是通过微粒对光的阻挡被传感器进行接收而判定微粒的大小及数量，因此光阻法不适用于黏度过高和易析出结晶的制剂，也不适用于进入传感器时容易产生气泡的注射剂。当光阻法测定结果不符合规定或供试品不适合用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。

umu试验，又称SOS/umu试验，是1985年由Oda等根据损伤时诱导SOS反应而表达umuC基因这一基本原理建立并发展起来的检测环境诱变质的短期筛选试验 。

本文使用生物惰性超高效液相色谱仪Nexera XS inert与LCMS-2050连用，测定了小干扰核苷酸siRNA分子量。采用DUIS（ESI+APCI）离子源的负离子模式分析待测样品，通过优化流动相和质谱采集参数，去除干扰质谱峰，使用LabSolutions软件自带的“质谱多电荷分析”功能准确测定siRNA分子量。结果显示，siRNA正义链质谱图中含8种多电荷离子，电荷数量分布为4~11，多电荷分析测定分子量为6631.63 Da，与理论值的偏差为0.34 Da。siRNA反义链质谱图中含7种多电荷离子，电荷数量为4~10，多电荷分析测定分子量为6637.64 Da，与理论值的偏差为0.39 Da，质量准确度高。LCMS-2050具有质量范围宽的特点，结合LabSolutions软件自带的“质谱多电荷分析”功能，可以用于测定siRNA分子量。

YH-MIP-0103显微计数图像法粒度分析仪已解决传统显微镜法测试数据准确性不足、操作繁琐、对人眼伤害较大、检测结果不可追溯等问题，全新一代YH-MIP-0205 Pro型显微计数图像法粒度分析仪在上一代仪器已有的技术优势下，进行了全新优化，新一代产品能够以全自动的方式实现样品中的不溶性微粒检测！

在整个制药行业中，重组单克隆抗体 (mAb) 为生物治疗产品在销售额和临床份额的快速增长起到了重要作用。最近，因为独特的治疗效果，复杂的蛋白质包括抗体-药物偶联物 (ADC)、双特异性抗体和融合蛋白等重新获得了科学家们的特别关注。在蛋白质药物的关键质量属性（critical quality attribute, CQA）评估过程中，电荷异质性需要对蛋白分子进行深入的结构表征，以确保其安全性、有效性和效力。 此外，对电荷变异体的监测也是蛋白质药物质量控制（QC）中必要的步骤。目前，主要有两种检测蛋白质药物电荷变异体的方法：离子交换(IEX) 色谱和成像毛细管等电聚焦(iCIEF) 或 CIEF，两者传统上都使用 紫外（UV） 作为检测器。UV检测虽然具有良好的稳定性和灵敏度，但受限于其定性能力，无法对分离后的电荷变异体进行更深入的鉴定。为了分析电荷异构体的成因，必须进行准确的定性分析。高分辨率质谱（HRMS）是定性蛋白质分析的有力手段之一。然而，由于所用溶液体系的限制，传统上IEX 和 iCIEF 不能直接与质谱连接。鉴于iCIEF在蛋白质电荷变异体分析中具有分辨率高、通量高等优点，已经逐渐成为生物制药行业生产与质量控制阶段的金标准。因此，科学家们也在尝试各种将iCIEF与高分辨质谱直接连接的技术。其中一种方法是基于芯片的直连技术，然而该方法是使用化学试剂形成pH梯度，稳定性有所欠缺，且分辨率会下降；其他的直连方法在通量、稳定性以及与质谱离子源连接的便利性等方面均有不足。 本文中所使用的CEInfinite (Advanced Electrophoresis Solution Ltd., AES) iCIEF平台，与该公司的专利卡柱和两性电解质配合使用，对mAb、ADC等分子的电荷变异体均可实现高分辨率分离，且兼具良好的稳定性。更为重要的是，所用溶液体系中无甲基纤维素、尿素等，两性电解质也与质谱兼容，这使得iCIEF与高分辨质谱在线直连测量电荷变异体完整蛋白分子量成为可能。该平台与质谱离子源部分连接简单，无需额外接口（图1），不同工作模式切换简便。

细胞分选（Cell Sorting）是指根据细胞所具有的特性把某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术，它是对某一特定细胞进行生化分析和功能分析的前提和基础。常用的细胞分选方法主要有流式分选和磁性细胞分选，但随着 DNA、RNA 与蛋白质相互作用研究的不断发展和适配体技术的诞生，适配体分选也成为了细胞分选的一个新方向。

在生物医药领域，磁珠分离技术由于其强大的功能性被广泛应用，可用于细胞分离、核酸提取、细胞活化与扩增等方面。其中细胞分离磁珠的使用可以通过其阳性、阴性的特质，温和地分离出高产量的、纯的、具有活性和功能性的细胞，避免让细胞穿过致密的分离柱，使得分离的细胞保留其天然特征。 然而引入磁珠进行分离时常常面临一些尴尬的问题，例如磁珠残留。如何对细胞分离过程中残留的磁珠进行筛选与识别，胤煌科技(YinHuang Technology )从实际应用角度出发，推出YH-MIP系列显微计数图像法粒度分析仪，助力细胞分离磁珠残留精准识别。

本文应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱MALDI-8020对mRNA和DNA生产所用的NTP和dNTP原料进行质谱分析，可直接检测到核苷酸原料的分子量及组成形式。本方法操作简便、分析速度快，结果直接可靠，为mRNA和DNA生产相关原料的质量控制提供了参考。

MALDI-TOF质谱技术具有前处理简单、分析速度快、分析质量范围宽、图谱简单易解析等优点，本文介绍了应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱MALDI-8020快速检测寡核苷酸药物的分子量及杂质的案例，该方法除直接测定样品精确分子量外，还可对可能含有的杂质情况进行监测。

本文使用生物惰性超高效液相色谱四极杆质谱联用仪LCMS-2050测定反义寡核苷酸分子量。采用DUIS（ESI+APCI）负离子模式对待测样品进行质谱扫描，使用LabSolutions软件对质谱图进行多电荷分析。结果表明，质谱图中含5种多电荷离子，电荷数量为4~8。通过多电荷解卷积分析计算得到该反义寡核苷酸样品分子量为6681.57 Da，与理论值的偏差为0.4 Da，质量准确度高。LCMS-2050具有质量范围宽的特点，适合分子量较大的反义寡核苷酸分子量检测。