炒货食品及坚果制品中真菌毒素检测

采用液相色谱碘柱后衍生法检测果仁类食品中的黄曲霉毒素，样品经过免疫亲和柱净化，进样液相色谱分析，经碘溶液柱后衍生后荧光检测器检测。方法简便快速，易操作。黄曲霉毒素B1、G1线性范围0.01~0.05 μg/mL，B2、G2线性范围0.003~0.015 μg/mL，线性相关系数R均在0.999以上，LOD和LOQ范围分别在0.060~0.159 ng/mL和0.200~0.530 ng/mL，回收率在89%～102%之间。

本应用简报介绍了真菌毒素及相关代谢物精确质量谱库的创建及其在食品中真菌毒素筛查领域的应用。与 Agilent 1290 Infinity 液相色谱联用的 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 在正离子和负离子电喷雾模式下运行，系统采用双电喷雾安捷伦喷射流技术。在一种或两种离子化模式下采集大量真菌毒素及相关代谢物的精确质量数谱图，并采集所有相关离子形态的精确质量数谱图。对有 44 种指示物加标的三种不同基质进行萃取。在靶向 MS/MS 和全离子 MS/MS 采集模式下对样品进行分析。本研究证明了两种采集模式与高效数据分析工作流程和真菌毒素及相关代谢物个人化合物数据库与谱库 (PCDL) 联用，对复杂基质中真菌毒素筛查和验证的价值。

真菌毒素是由谷物、水果、蔬菜、坚果和香料等作物上生长的真菌所产生的化合物。人类和牲畜可通过食用受污染的作物而受到真菌 毒素的危害；因此，需要对食品中的真菌毒素含量进行监测，以最大程度减小摄入风险。全球监管机构规定的真菌毒素最大残留限量 (MRL) 处于 10 ng/g (ppb) 至超过 500 ppb 的范围内，确保有害浓度的真菌毒素不会进入食品供应环节。很有必要对各种食品基质中低浓度真菌毒素的含量进行检测与定量分析，因为每种基质组成都会造成不同的检测挑战。本研究展示了使用 Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 系统对三种通常受监管的食品中最多 12 种受监管的真菌毒素进行准确的定量分析。

本应用简报介绍了用于测定杏仁、榛子、花生和开心果中的 191 种真菌毒素及其他真菌代谢物和验证测定结果的多目标方法的开发。除受欧盟监管的所有真菌毒素以外，该方法还涉及到常在食品中发现的许多真菌毒素。该方法包括酸化的乙腈-水混合液的简单萃 取、原萃取液的稀释以及 UHPLC/MS/MS 的测定。采用溶剂标准品对所有化合物进行校准。 此外，本应用简报还介绍了对四种测试基质中 65 种最重要的真菌毒素进行的部分验证工作。该方法表现出优异的灵敏度，能够检出花生中低至 0.04 µg/kg 的恩镰孢菌素 B3，并 具有良好的重现性，大多数分析物的标准偏差均小于 10%。大约 60% 的基质-分析物组 合获得了 70% - 120% 的表观回收率。回收率较低的原因包括萃取回收率较低（例如伏马 菌素类）或几种较早流出的分析物所存在的信号抑制。少数情况下存在信号增强效应， 因此导致表观回收率较高。 该方法适用于受天然污染的坚果样品分析，总共能够鉴定出 40 种不同的真菌代谢物。有趣的是，最常检出的毒素并非当前受欧盟监管的化合物，而是白僵菌素、恩镰孢菌素 B 和巨孢子素。污染最严重的榛子样品中包含 26 种不同的毒素。全部结果在 Varga 等人的文章中有更详细的介绍。

1、提取 50 g 粉碎样品与200 mL 甲醇水溶液（85%）混合，超声提取20 min，过滤；取40 mL 滤液，加入40 mL 氯化钠溶液（0.1%），用50 mL 正己烷分两次萃取，正己烷弃去；然后用50 mL 三氯甲烷分两次萃取，收集三氯甲烷萃取液，减压浓缩至约2 mL。 2、净化 a 活化： 依次将3 mL 甲醇、3 mL 三氯甲烷加入ProElut Silica 500 mg/3 mL (Cat.#63004) 中，流出液弃去； b 上样： 将处理浓缩液加入小柱中，用2 mL 三氯甲烷洗涤浓缩瓶，也加入柱中，流出液弃去； c 淋洗： 用3 mL 正己烷、3 mL 乙醚、3 mL 三氯甲烷淋洗，流出液弃去； d 洗脱： 用6 mL 三氯甲烷+ 丙酮（9+1）洗脱样品，收集洗脱液； e 重新溶解：室温下将洗脱液用氮气吹干，然后用50% 甲醇水溶液溶解，微孔滤膜过滤，HPLC 分析

采用免疫亲和色谱柱对样品进行前处理后，再通过LC/MS以及荧光衍生-HPLC法对花生中的黄曲霉毒素进行分析。