玉米、花生和黑胡椒中真菌毒素检测方案(液质联用仪)

Agilent Technologies 分析食品基质中的真菌毒素 Agilent Ultivo三重四极杆 LC/MS 系统 前言 真菌毒素是由谷物、水果、蔬菜、坚果和香料等作物上生长的真菌所产生的化合物。人类和牲畜可通过食用受污染的作物而受到真菌毒素的危害；因此，需要对食品中的真菌毒素含量进行监测，以最大程度减小摄入风险。全球监管机构规定的真菌毒素最大残留限量(MRL) 处于 10 ng/g (ppb) 至超过 500 ppb 的范围内，确保有害浓度的真菌毒素不会进入食品供应环节。很有必要对各种食品基质中低浓度真菌毒素的含量进行检测与定量分析，因为每种基质组成都会造成不同的检测挑战。 本研究展示了使用 Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 系统对三种通常受监管的食品中最多12种受监管的真菌毒素进行准确的定量分析(图1)。 图1.集成到 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪中的 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统 如需了解更多信息，请访问： Agilent Technologies Ultivo 专门设计用于解决环境和食品安全分析实验室所面临的众多挑战。 Ultivo 采用的创新技术有助于减小其总体占用面积，同时性能可与更大型质谱系统相媲美。 VacShield 真空盾、飓风型离子导管、涡旋碰撞池和双曲面四极杆等创新最大程度提高了小体积仪器的定量分析性能，改善了仪器可靠性和稳定性，可获得更长的正常运行时间。Ultivo 减少了进行系统维护的用户干预，非专业质谱用户可轻松进行操作和维护。 Agilent MassHunter 软件简化了数据采集、方法设置、数据分析和报告，获得了从采集到报告的最短时间，从而提高了实验室分析效率和可信度。 样品前处理 选择玉米、花生和黑胡椒这三种通常受监管的食品作物代表真菌毒素分析中不同的基质组分。在9分钟的三重四极杆液质联用方法中使用动态 MRM (dMRM) 对玉米和花生基质中的12种真菌毒素以及黑胡椒基质中的5种真菌毒素进行定量分析。将真菌毒素标准品后加标至基质萃取物中进行分析。 用10mL乙腈、10mL水和 EN 萃取盐 (5982-5650)对5g玉米粉样品、5g花生样品或2g黑胡椒样品进行萃取。玉米采用用于蔬菜和水果的分散 SPE (dSPE) (5982-5058)，对黑胡椒采用通用 dSPE 试剂盒 (5982-0029)。对每种基质采用创新的改进型脂质去除吸附剂流过小柱，作为最终的净化步骤。在分析之前，按照 30：70 萃取物/水的比例对加标黑胡椒萃取液进行稀释。 仪器参数 表1.液相色谱和质谱参数 Agilent 1290 Infinity lI液相色谱仪 色谱柱 Agilent Eclipse Plus C18，3.0×150 mm， 1.8 pm 柱温 45°C 进样量 2pl(玉米和花生萃取液)；10pL(黑胡椒萃取液) 流动相 A) 水，0.5 mM氟化铵 +5 mM甲酸铵+0.1%甲酸 B)甲醇， 0.5 mM氟化铵+5mM甲酸铵+0.1%甲酸 流速 0.450 mL/min 梯度 时间 (min) %B 0 30 0.5 30 7.5 100 9.0 100 9.1 30 Agilent Ultivo 干燥气温度 250°℃ 干燥气流速 8L/min 鞘气温度 350°℃ 鞘气流速 12L/min 雾化器压力 30 psi 毛细管电压 3300V(+)，2800 V(-) 喷嘴电压 0V(+)， 0V(-) 分析周期 500 ms 真菌毒素信号响应 采用设计用于 Ultivo 三重四极杆质谱仪的样品前处理技术、液相色谱分离和创新技术组合，使多种食品基质中的真菌毒素均获得了优异的精密度和灵敏度。 图2.对玉米基质中浓度为 MRL 1/10的真菌毒素的检测 真菌毒素最大残留限量和灵敏度 分析结果达到了优异的灵敏度，其中所研究的每种基质中的多数真菌毒素化合物达到了规定 MRL 1/20 的定量限 (LOQ)。 表2.本研究中所用真菌毒素和特定基质的最大残留限量。采用欧盟法规指令1881/2006和105/2010 作为对照。本研究中所有的规定 MRL 均小于等于 SANTE MRL 真菌毒素的欧盟 MRL2.3 本研究所用的规定 MRL 浓度 真菌毒素 玉米 花生 黑胡叔 玉米和花生 黑胡椒 黄曲霉毒素B1 2 ppb 2 ppb 5 ppb 2 ppb 5 ppb 黄曲霉毒素B2 黄曲霉毒素 黄曲霉毒素 黄曲霉毒素 2 ppb 5 ppb 黄曲霉毒素 G1 总和： 总和： 总和： 2 ppb 5 ppb 黄曲霉毒素 G2 4 ppb 4 ppb 10 ppb 2 ppb 5 ppb 赭曲霉毒素A 3 ppb 不适用 15 ppb" 3 ppb 15 ppb 伏马菌素B1 500 ppb 不适用 不适用 500 ppb 不含 伏马菌素B2 伏马菌素 不适用 不适用 500 ppb 不含 伏马菌素B3 总和： 不适用 不适用 500 ppb 不含 1000 ppb 呕吐毒素 750 ppb 不适用 不适用 75 ppb 不含 玉米赤霉烯酮 100 ppb 不适用 不适用 100 ppb 不含 T-2毒素 不适用 不适用 不适用 100 ppb 不含 HT-2毒素 不适用 不适用 不适用 500 ppb 不含 图3.研究的各种基质中所有真菌毒素的定 量限，定义为规定 MRL的百分比 真菌毒素的精密度和线性 本研究中的所有化合物均获得了优异的线性，在所用的校准范围内，R²值>0.99。所研究基质中的真菌毒素在 LOQ 下获得的 %RSD 值均<10%。 图4.真菌毒素在全部三种基质中表现出优异的精度， LOQ处的所有 RSD <10% 图5.所有基质中浓度为 MRL 1/10 的黄曲霉毒素 B1 (200 ppt或 500 ppt)表现出的优异精密度 ( 参考文献 ) 1. Bennett， J.W.； Klich， M. Mycotoxins.Clinical Microbiology Reviews 2003，16(3)，497-516 2. Commission Regulation (EC) No1881/2006. Setting maximumlevels for certain contaminants infoodstuffs. Official Journal of theEuropean Union.L364/5-24.19 December 2006 3. Commission Regulation (EU) No105/2010.Amending Regulation(EC) No 1881/2006 settingmaximum levels for certaincontaminants in foodstuffs as regardsochratoxin A. L 35/7-8. OfficialJournal of the European Union.5 February 2010 图6.所有基质中的所有化合物均获得了优异的线性，R²值≥0.99。上图示出玉米基质中6种真菌毒素线性的示例 结论 查找当地的安捷伦客户中心： · Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 系统是一套创新的质谱仪，可以最大程度减小实验室工作空间的需求并减少维护挑战，从而使高通量实验室获得高效工作环境 · Ultivo 是一款体积小而功能强大的工具，能够对多种食品基质中远低于规定 MRL 浓度的通常受监管的真菌毒素进行准确而灵敏的检测 www.agilent.com/chem/contactus-cn免费专线：800-820-3278，400-820-3278(手机用户)联系我们：LSCA-China_800@agilent.com在线询价：www.agilent.com/chem/erfq-cn ·Agilent MassHunter 软件提供了一种管理和报告 LC/MS数据简便易用的一体式工具 www.agilent.com 本资料中的信息、说明和指标如有变更， 恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司， 2017 2017年6月22日，中国出版 5991-8162CHCN 修订版1.0 前言真菌毒素是由谷物、水果、蔬菜、坚果和香料等作物上生长的真菌所产生的化合物。人类和牲畜可通过食用受污染的作物而受到真菌毒素的危害；因此，需要对食品中的真菌毒素含量进行监测，以最大程度减小摄入风险。全球监管机构规定的真菌毒素最大残留限量(MRL) 处于 10 ng/g (ppb) 至超过 500 ppb 的范围内，确保有害浓度的真菌毒素不会进入食品供应环节。很有必要对各种食品基质中低浓度真菌毒素的含量进行检测与定量分析，因为每种基质组成都会造成不同的检测挑战。本研究展示了使用 Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 系统对三种通常受监管的食品中最多 12 种受监管的真菌毒素进行准确的定量分析。结论• Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS 系统是一套创新的质谱仪，可以最大程度减小实验室工作空间的需求并减少维护挑战，从而使高通量实验室获得高效工作环境• Ultivo 是一款体积小而功能强大的工具，能够对多种食品基质中远低于规定 MRL 浓度的通常受监管的真菌毒素进行准确而灵敏的检测• Agilent MassHunter 软件提供了一种管理和报告 LC/MS 数据简便易用的一体式工具