污染来源:(1)样品间的交叉污染:样品污染主要是由于样品在运输、储存、放置过程中处置不当造成的污染。样品核酸模板在提取过程中,由于操作不当也会导致样品间的污染。(2)试剂的污染:由于操作不当,造成核酸提取、扩增过程中各相关试剂的污染。(3)PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染。极微量的PCR产物污染就可造成假阳性。最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。操作时比较剧烈地摇动反应管、开盖、反复吹吸样液都可形成气溶胶而引起污染。(4)克隆质粒的污染:在用克隆质粒作阳性对照时,有时会出现克隆质粒的污染。(5)实验器具的污染:如移液器的污染等。污染原因:(1)试剂污染:检测阴阳性对照反应结果。如果阴性对照反应结果为阳性,说明PCR反应体系中某一种或数种试剂被污染。若阳性对照反应为阴性,则说明PCR反应体系中存在抑制物质,或一种至数种PCR反应试剂失效。(2)环境污染:在排除试剂污染的可能性之后,如果污染情况仍存在,则考虑可能为环境污染。常见的污染源可能为各种实验表面的污染,包括实验台面、仪器设备表面、各种开关或把手等:对于这些污染可用擦拭实验来查找可疑污染源。其步骤如下:a.用无菌水浸泡过的无菌棉签擦拭可疑污染源;b.0.1mL去离子水浸泡;c.取5μL做PCR实验;d.电泳检测结果。如果经过上述追踪实验,仍不能查找到确切污染源,则污染可能是由空气中PCR产物的气溶胶造成的。污染处理:(1)环境污染:a.稀酸处理法:对可以器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡,使残余DNA脱嘌呤。b.紫外照射(UV)法:紫外波长(nm)一般选择254nm和300nm,照射30min即可。选择UV作为消除残留PCR产物污染时,要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布,UV照射仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大。c.若可能是气溶胶污染,应该更换实验场所,若条件不允许,则重新设计新的引物(与原引物无相关性)。(2)试剂污染:若经对照实验显示,为试剂造成的污染,应立即更换试剂。