核酸检测中PCR污染原因和处理方法

污染来源：（1）样品间的交叉污染：样品污染主要是由于样品在运输、储存、放置过程中处置不当造成的污染。样品核酸模板在提取过程中，由于操作不当也会导致样品间的污染。（2）试剂的污染：由于操作不当，造成核酸提取、扩增过程中各相关试剂的污染。（3）PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染。极微量的PCR产物污染就可造成假阳性。最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。操作时比较剧烈地摇动反应管、开盖、反复吹吸样液都可形成气溶胶而引起污染。（4）克隆质粒的污染：在用克隆质粒作阳性对照时，有时会出现克隆质粒的污染。（5）实验器具的污染：如移液器的污染等。污染原因：（1）试剂污染：检测阴阳性对照反应结果。如果阴性对照反应结果为阳性，说明PCR反应体系中某一种或数种试剂被污染。若阳性对照反应为阴性，则说明PCR反应体系中存在抑制物质，或一种至数种PCR反应试剂失效。（2）环境污染：在排除试剂污染的可能性之后，如果污染情况仍存在，则考虑可能为环境污染。常见的污染源可能为各种实验表面的污染，包括实验台面、仪器设备表面、各种开关或把手等：对于这些污染可用擦拭实验来查找可疑污染源。其步骤如下：a.用无菌水浸泡过的无菌棉签擦拭可疑污染源；b.0.1mL去离子水浸泡；c.取5μL做PCR实验；d.电泳检测结果。如果经过上述追踪实验，仍不能查找到确切污染源，则污染可能是由空气中PCR产物的气溶胶造成的。污染处理：（1）环境污染：a.稀酸处理法：对可以器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤。b.紫外照射（UV）法：紫外波长（nm）一般选择254nm和300nm，照射30min即可。选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大。c.若可能是气溶胶污染，应该更换实验场所，若条件不允许，则重新设计新的引物（与原引物无相关性）。（2）试剂污染：若经对照实验显示，为试剂造成的污染，应立即更换试剂。