单细胞铺板效率分析

Namocell的单细胞分选效率 引言在单克隆细胞培养时，手动有限稀释法是最经典的分离单细胞手段之一。这种方式分离单细胞，每个孔中落进去的细胞数目符合泊松分布。依靠单细胞分选仪器分离单细胞的效率，无论从分选能力还是重复性都要明显优于手动的有限稀释方法。测定一款设备分选效率的标准方法，是用荧光校准微球来分选检验。 实验方法Namocell单细胞分离仪通过检测FITC荧光信号，来分选荧光校准微球（Spherotech）和用Calcein AM（Thermo Fisher Scientific）染色的CHO-S细胞。对于分离的细胞可以用Calcein AM染色，用于区分碎片、死细胞和活细胞，然后可以根据Namocell推荐的操作流程分离单个活细胞。为了去除细胞结团，在染色之后可以用40um左右的细胞筛网过滤细胞，尽量保证在上样的时候样本都是单个细胞。作为对照，我们采用1cell/well的细胞密度进行手动有限稀释法铺板。然后，用显微镜在明场下观察每个孔的细胞（或者微球）的数量。同样的实验持续7天，每天做一组对比实验，最后取平均值。通过统计孔板中单细胞、两个细胞和空孔的数量来衡量仪器的分选效率。 实验结论在图例中展示了，用Namocell单细胞分离仪分离的微球和细胞以及手动铺板的数据对比。通过Namocell单细胞分离仪分选的荧光微球保持了很好的一致性---单细胞97%，两个细胞1%，空白2%。通过Namocell单细胞分离仪分选的细胞样本---单细胞93%，两个细胞2%，空白5%。对照样本数据，通过手动有限稀释法得到的分选效率---单细胞31%，两个细胞35%，空白34%。在细胞样本的分散程度比较好的状态下，机器分离的最高单细胞比例是97%。对于手动有限稀释法而言，实验的结果一致性比较差（通过标准差可以看出）。综上所述，Namocell单细胞分离仪的分选效率和一致性要远优于手动有限稀释法。图例：机器分离的微球和细胞的平均分选效率和手动分离的对比。