Copure® PWAX | GB 5009.35-2023糖果和水果罐头中11种合成着色剂的测定

糖果和水果罐头中11种合成着色剂的测定（Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱）《GB 5009.35-2023食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》合成着色剂是指人工化学合成方法所制成的有机色素，因其色彩鲜艳、着色力强、稳定性好、生产成本低等特点广泛应用于食品工业，但有些生产企业为了改良食品感观色泽，超限量、超范围使用合成着色剂，可能会对人体肝脏产生一定影响逗点生物结合自身产品优势，按照国标建立了固相萃取-高效液相色谱法测定硬糖和水果罐头中11种合成着色剂含量的方法，样品经乙醇胺水提取后，经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，11种合成着色剂在0.2 μg/mL到20 μg/mL范围内线性良好，R^2>0.995，加标回收率在80%-100 %范围内，符合测试需求。1、 样本前处理1.1样品提取准确称取试样2 g（精确至0.001 g），置于50 mL离心管中，先加人适量水(2 mL~5 mL)50 ℃水浴超声融化样品，再加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，50℃超声提取20 min，8000 转/分钟离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，残渣中再加入5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取至上清液无明显颜色，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。准确吸取提取液10 mL，50℃氮气浓缩至2 mL左右，分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，调节pH至6.0左右，作为待净化液。注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇700 mL，加入4 mL氨水，用水稀释并定容至1 L，混匀。1.2试样的净化浓缩先依次用6 mL甲醇和6 mL水活化PWAX固相萃取柱（150 mg/6 mL），保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。最后用6 mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50 ℃氮吹至近干。准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.22 μm 亲水PTFE滤膜，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。1.3空白实验1.3.1过程空白：取一支洁净的50 mL离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。1.3.2空白本底实验称取试样2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。2、 标准系列工作液分别精密移取11种着色剂混标中间液（100μg/mL）0.02 mL、0.05mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻线，摇匀，得标准系列工作液。浓度分别为0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL和20.0 μg/mL。3、 仪器条件仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪色谱柱：Commasil® C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇洗脱方式：梯度洗脱，见表1流速：1 mL/min柱温：30 ℃进样量：10 μL检测器：紫外检测器检测波长：415 nm、520 nm、610 nm表1 梯度洗脱程序时间/minA/%B/%0.00901012.0653519.0554522.5505023.0455524.0356534.0356535.0901042.090104、 实验结果4.1 加标回收表2 糖果中加标浓度0.5 g/kg竞品比对结果化合物平均回收率（%）n=2Copure®A品牌柠檬黄96.697.5喹啉黄93.393.2新红98.197.8苋菜红97.697.9胭脂红97.098.2日落黄90.291.3诱惑红98.198.0酸性红96.098.9赤藓红96.096.8靛蓝93.694.6亮蓝96.597.8图1 加标浓度为0.5 g/kg时糖果中11种合成着色剂液相色谱图表1 水果罐头中加标浓度0.1 g/kg竞品比对结果化合物平均回收率（%）n=2Copure®A品牌柠檬黄97.798.4喹啉黄91.592.3新红97.598.2苋菜红96.297.4胭脂红95.395.7日落黄98.199.4诱惑红98.898.9酸性红97.896.7赤藓红84.484.5靛蓝89.189.2亮蓝96.596.2图1 加标浓度为0.1 g/kg时水果罐头中11种合成着色剂液相色谱图5、 注意事项1.标准储备液：固体标物加水溶解，4°C下避光保存6个月。靛蓝标准溶液临用现配。2.糖果样品提取时需要加2-5mL水将其融化，提取次数可根据提取液颜色变化而定。3.过柱前测下样液的pH值，调节至6.0，因为PWAX属于混合型弱阴离子交换反相吸附柱，上样时需要酸性条件。4.收集洗脱液玻璃氮吹管，可使氮吹时间减半。5.50°C氮气浓缩至近干，准确加入2 mLpH为9.0的乙酸铵缓冲溶液复溶，酸性条件下赤藓红回收率低。6. 上机之前过滤所用的滤膜不得使用尼龙滤膜，因为尼龙的化学成分是聚酰胺，会吸附合成着色剂，要用亲水PTFE。货号描述包装COPWAX6150Copure®  PWAX混合型弱阴离子交换柱，150 mg/6 mL30支/盒SDC-3000-Dbiocomma® 多管涡旋混匀仪1台/箱BN2424孔智能水浴氮吹仪1台/箱SF130-22-PTFE-HLPTFE针式过滤器 直径13mm，孔径0.22 μm，有机系100个/盒SC2-12 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒六、订购信息