离心法应用于脑脊液细胞学检查

液体细胞学检测对于中枢神经系统感染性炎性疾病，膜下出血和肿瘤细胞发现过程中起着重要作用。由于脑脊液通常含有少量细胞和少量白蛋白，细胞在打结后几小时开始受损。 因此，用于制备细胞学检查载玻片的酒样不应超过2小时。年龄和样品处理方法对诊断结果影响重大。良好的脑脊液准备需要恰好的细胞恢复和排除选择性细胞丢失。可以通过细胞的形态识别正确的细胞群。本次实验介绍离心法应用于脑脊液细胞学检查，使用仪器为德国进口Hettich ROTOFIX 32 A离心机。Hettich离心方法的优势：1. 及时处理样品适合多种细胞检测；最大处理量8 ml；使用无细胞上清液进行进一步分析。2. 制备质量可靠强大的形态保存能力。Hettich离心应用 脑脊液细胞学检查 1508181 二 脑脊液细胞学检查 液体细胞学检测对于中枢神经系统感染性炎性疾 病，膜下出血和肿瘤细胞发现过程中起着重要作用 。另外，对于后续测试和治疗对照。1） 由于脑脊液通常含有少量 细胞和少量白蛋白，细胞在打结后几小时开始受 损。因此，用于制备细胞学检查载玻片的酒样不应 超过2小时.2） 年龄，和样品处理方法对诊断结果影响重大。良好的脑脊液准备需要最佳的细胞恢复和排除 选择性细胞丢失。可以通过细胞的形态识别正 确的细胞群。 Hettich方法的优势 1.及时处理样品 ·适合多种细胞检测 ·最大处理量8 ml ·使用无细胞上清液进行进一步分析 2.优秀的制备质量 ·最佳的形态保存 ·最佳观察效果 制备 1.样品制备 通常，细胞和白蛋白贫液样品的制备质量不令人满 意。因此，我们建议添加人血清或白蛋白溶液。 细胞计数低于10 /μl和白蛋白低于3000 mg / l的样品中加入白蛋白 被认为对稳定细胞至关重要。为了保证白蛋白浓度高于3000毫 克/升，50微升正常血清总蛋白质含量约为。将70g / l加入到 400μl的液体样品中。自体血清不是必需的。3） 涂覆的载玻片的使用也可以增加细胞产量。对于常规染色和常 规染色，建议使用涂有PolysineTM的载玻片进行细胞表面标志物 的免疫细胞学检测，尤其是肿瘤标志物，建议使用SuperFrost®彩 色载玻片。4）（PolysineTM和SuperFrost®是 Gerhard Menzel Glasbear-beitungswerk GmbH＆Co.KG）。 2.必要的配件 样品的可用量和细胞含量决定了适当的室。 对于液体样品，我们通常建议使用1毫升和2毫升沉淀区域为30平方毫米或60平方毫米的小室。 Kammern mit Sedimentflächen von 30 mm² bzw. 60 细胞/样品 up to 2,000 2,000 – 20,000 more than 20,000 sedimentation area 30 mm² 30 mm² 60 mm² volume mm² zu empfehlen. 100 µl – 1 ml 100 µl – 1 ml 400 µl – 2 ml 加入蛋白 yes no no 3.配件组装 脑脊液滑液制备通常需要干固定。出于这个原因，插 件应与过滤卡组装在一起（参见上述小册子中的插图 B1）。处理感染性样品时，应使用卫生密封的盖子关 闭插入物。 1661（参见上述传单中的插图B2）。 1) Kluge et al., Stellenwert der praktischen (klassischen) Liquorzytologie im Gesamtspektrum der Liquordiagnostik, in Kluge et al. (Hrsg.) Atlas der praktischen Liquorzytologie, Stuttgart 2005, p. 2-3. 2) Ibidem, p. 7. 3) Ibidem, p. 8. 4)由耶拿大学临床中心临床化学和实验室诊断学院的酒实验室推荐（克鲁格博士，罗斯科斯博士）。 4.离心 a)沉淀 以275 x g离心细胞室3分钟（这对应于6位转子1,500分 钟-1和4位转子1,700分钟-1）。 在离心过程中，细胞沉积在载玻片上。 b)去除无细胞上清液 离心后，无细胞上清液仍在室内，需要除去少量剩余 物。排空室时，注意不要搅动沉积物。否则，制剂 的质量会受损，细胞可能会丢失。我们建议使用巴斯 德吸管去除上清液。不要将移液器的尖端放在载玻片 上，但小心地向下跟随液位。不要完全排空室，但在 沉积物上留下一滴上清液！ 如果样品中没有添加白蛋白，则回收的上清液可用于 生化分析。 c)干燥沉淀物 用最常见的Giesma染色方法，沉积物需要干燥。再次离 心干燥沉淀物。 清除上清液后，拧下固定环并将其从容器中取出（参见图 B4）。将带有载玻片的细胞悬液，载玻片和过滤卡放回 离心机中并以1,100×g旋转1分钟（这对应于6位转子为 3,000分-1，而4位转子为3,400分-1）。 剩余的上清液通过离心力离心并被过滤卡吸收。构成沉 淀物的细胞停留在载玻片上。 通过离心干燥制剂，可以 避免蒸发的人为现象，如收缩的白细胞或结晶。 d)固定和染色 干制剂可以固定并立即染色。 在Giemsa和May-Grünwald-Giemsa染色方法的最后阶 段，载玻片用缓冲液冲洗（Weise，Sörensen）。此 后，干燥。 ·将用Weise缓冲液冲洗的载玻片放入框架中 ·并将夹片放入离心机中 ·离心1分钟 ，离心力为275 x g的转速 ·转速1,500 min-1在6位水平转子上, 1,700 min-14位水平转子上 · ·将含有干燥载玻片的框架取出离心机 · ·The preparations are ready for examination under the ·这些准备工作已准备好在显微镜下进行检查和/或现在安装 ·擦干细胞悬液 使用6个位置的转子最多可以同时干燥36个滑块 离心机 货号 ROTOFIX 32 A 1206 UNIVERSAL 320 / UNIVERSAL 320 R 1401 / 1406 配件 5) 货号 4位水平转子 1624 6位水平转子 1626 吊篮 1660 吊篮盖 1661 固定环 1662 样品腔 1 x 1 ml (30 mm²) 1663 样品腔1 x 2 ml (60 mm²) 1664 滤纸 1663 and 1664,200个 1675