【解决方案】从饲料到餐桌，硝基咪唑类药物残留量测定助力食品安全！

动物性食品中硝基咪唑类药物残留量的测定SPE-UPLC-MS/MS法硝基咪唑类药物是畜禽饲料中常用的抗原虫感染及抗菌药，并有促进生长的作用，但是该药物及其某些代谢物对哺乳动物具有致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性，饲料中硝基咪唑类药物的不合理使用造成可食性动物组织中药物残留，以至危害到人类食品安全。迪马科技参考《GB 31658.23-2022食品安全国家标准 动物性食品中硝基咪唑类药物残留量的测定》，建立了SPE-UPLC-MS/MS法，可测定猪肉、鸡肉、猪肝中硝基咪唑类药物，本方案使用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，ProElut® PXC净化，Endeavorsil® C18色谱柱分离检测，定量限与标准方法一致，回收率在90%-110%之间。本方案完全重现了国标方法，灵敏度高，回收率好，能满足客户需求。动物性食品中硝基咪唑类药物残留量的测定 UPLC-MS/MS法解决方案 参考《GB 31658.23-2022食品安全国家标准动物性食品中硝基咪唑类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》 硝基咪唑类药物是畜禽饲料中常用的抗原虫感染及抗菌药，并有促进生长的作用，但是该药物及其某些代谢 物对哺乳动物具有致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性，饲料中硝基咪唑类药物的不合理使用造成可食性动物组 织中药物残留，以至危害到人类食品安全。 迪马科技参考《GB 31658.23-2022食品安全国家标准动物性食品中硝基咪唑类药物残留量的测定》，建立 了 SPE-UPLC-MS/MS法，可测定猪肉、鸡肉、猪肝中硝基咪唑类药物，本方案使用乙酸乙酯提取，正己烷除脂， ProElut PXC净化，Endeavorsil C18色谱柱分离检测，定量限与标准方法一致，回收率在 90%-110%之间。 本方案完全重现了国标方法，灵敏度高，回收率好，能满足客户需求。 1、适用范围 本方案适用于猪肉、鸡肉、猪肝中甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑和羟基地美硝唑残留量的测定。 2、标准品配制 (1)标准储备液：由迪马科技标准品部提供，浓度 100 μg/mL，溶于甲醇。(cat.#: 47905) (2)混合标准工作液：吸取适量标准储备液，用甲醇稀释定容，配置成浓度为 0.1 μg/mL的混合标准工作液。 (3)内标储备液：由迪马科技标准品部提供，浓度 100 μg/mL，溶于甲醇。(cat.#: 47972) (4)混合内标工作液：吸取适量内标储备液，用甲醇稀释定容，配置成浓度为 0.1 μg/mL的混合内标工作液。 3、提取 (1)称取 2 g样品，加入混合内标工作液 100 μL，涡动混匀 30 s，静止 10 min； (2)加入 15 mL乙酸乙酯，涡旋 2 min，10000 rpm离心 2 min，取上清于氮吹管中； (3)残渣再用 15 mL乙酸乙酯提取一次，合并 2次提取液，于 35 ℃水浴氮吹至干； (4)先用 3 mL 0.1 mol/L盐酸溶液*溶解残渣，涡旋 1 min，并转移到 15 mL离心管中，再用 2 mL 0.1 mol/L盐 酸溶液清洗氮吹管，合并两次盐酸溶液； (5)向离心管中加 5 mL正己烷，涡旋 1 min，6000 rpm离心 2 min，弃去正己烷层，再加入 5 mL正己烷，重 复除脂一次，弃去正己烷层，下层备用。 *0.1 moL/L盐酸溶液：取浓盐酸 8.3 mL,用水稀释至 1 L,混匀。 4、净化——ProElut PXC 60 mg/3 mL (Cat.#: 68203) (1)活 化：用 2 mL甲醇和 2 mL 0.1 mol/L盐酸溶液活化； (2)上 样：备用液全部过柱，弃去流出液； (3)淋 洗：依次用 2 mL 0.1 mol/L盐酸溶液，1 mL甲醇和 1 mL 2%氨水淋洗，推干，弃去流出液； (4)洗 脱：加入 2 mL洗脱液洗脱，并收集洗脱液； (5)重新溶解：将洗脱液在 35 ℃水浴下氮吹近干(剩余大约 0.2 mL)，用水定容至 0.5 mL，混匀，过 Nylon膜 (Cat.#: 37177)，上机分析。 2%氨水溶液：取 2 mL氨水，加水稀释至 100 mL，混匀，现用现配 洗脱液：取 80 mL甲醇，加水 15 mL、氨水 5 mL，混匀，现用现配 5、基质匹配标准溶液的制备 取经提取和净化的空白试料溶液，加入适量混合标准工作液和 100 μL混合内标工作液，35 ℃水浴下氮吹近 干(剩余大约 0.2 mL)，用水定容至 0.5 mL，混匀，过 Nylon膜(Cat.#: 37177)，上机分析。 6、分析条件 UPLC条件 色谱柱：Endeavorsil C18, 50 × 2.1 mm, 1.8 μm (Cat.#: 87002)流 速：0.3 mL/min 进样量：10 μL 柱 温：35 ℃流动相：A ：0.1%甲酸水 B：0.1%甲酸乙腈 时间/Min. 0 0.5 2 3 3.1 10 A(%) 95 95 85 0 95 95 B(%) 5 5 15 100 5 5 质谱条件 电离模式：ESI 扫描方式：正离子扫描 检测方式：多反应监测 电喷雾电压：5500 V 雾化气压力：50 psi 辅助气压力：50 psi 气帘气压力：20 psi 离子源温度：500 ℃ 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 目标物名称 定性离子对 定量离子对 DP (V) CE(V) (m/z) (m/z) (母离子/子离子) (母离子/子离子) 甲硝唑 172.0/127.8 172.0/127.8 50 20 172.0/81.9 50 32 羟基甲硝唑 188.2/123.0 188.2/123.0 50 19 188.2/126.1 50 23 地美硝唑 142.2/96.0 142.2/96.0 65 21 142.2/81.0 65 36 羟基地美硝唑 158.1/139.9 158.1/139.9 50 16 158.1/55.0 50 26 甲硝唑-d3 175.1/130.9 175.1/130.9 54 19 羟基甲硝唑-d2 190.2/124.9 190.2/124.9 53 18 地美硝唑-d3 145.3/99.1 145.3/99.1 61 21 羟基地美硝唑-d3 161.2/142.9 161.2/142.9 50 16 7、添加回收结果 添加水平 目标物 样品 添加水平：1 μg/kg 添加水平：5 μg/kg 加标量：混合标准工作液 0.1 μg/mL, 加 20 μL 加标量：混合标准工作液 0.1 μg/mL 加 100 μL 猪肉 鸡肉 猪肝 猪肉 鸡肉 猪肝 甲硝唑 100% 98% 101% 95% 96% 101% 羟基甲硝唑 91% 95% 101% 97% 103% 103% 地美硝唑 96% 95% 109% 109% 91% 105% 羟基地美硝唑 99% 96% 109% 109% 104% 97% 8、目标化合物的 XIC图 猪肉基质匹配硝基咪唑类药物(4 μg/L)及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 猪肉(添加水平为 1 μg/kg)硝基咪唑类及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... 猪肉基质匹配硝基咪唑类药物(20 μg/L)及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... Max. 2.4e5 cps. 2.5e52.0e51.5e51.0e55.0e40.00.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5Time, min 猪肉(添加水平为 5 μg/kg)硝基咪唑类及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 鸡肉基质匹配硝基咪唑类药物(4 μg/L)及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 鸡肉(添加水平为 1 μg/kg)硝基咪唑类及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 鸡肉基质匹配硝基咪唑类药物(20 μg/L)及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... Max. 1.8e5 cps.1.8e51.6e51.4e51.2e51.0e58.0e46.0e44.0e42.0e40.00.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5一一 Time, min 鸡肉(添加水平为 5 μg/kg)硝基咪唑类及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... Max. 4.8e4 cps. 猪肝基质匹配硝基咪唑类药物(4 μg/L)及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 猪肝(添加水平为 1 μg/kg)硝基咪唑类及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 猪肝基质匹配硝基咪唑类药物(20 μg/L)及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 30DIKHA 猪肝(添加水平为 5 μg/kg)硝基咪唑类及内标(20 μg/L)检测的 XIC图 9、目标化合物的定量离子质谱图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... Max. 5.9e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 188.200/123.000 Da ID: qiangjijiaxiaozu... Max. 1.9e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 142.200/96.000 Da ID: dimeixiaozuo 1 fr... Max. 2.2e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 158.100/139.900 Da ID: qiangjidimeixia... Max. 2.4e4 cps. Time, min Time, min Time, min 猪肉基质匹配硝基咪唑类药物(4 μg/L)及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 猪肉(添加水平为 1 μg/kg)硝基咪唑类及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 猪肉基质匹配硝基咪唑类药物(20 μg/L)及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 猪肉(添加水平为 5 μg/kg)硝基咪唑类及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... Max. 4.1e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 188.200/123.000 Da ID: qiangjijiaxiaozu... Max. 1.4e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 142.200/96.000 Da ID: dimeixiaozuo 1 fr... Max. 1.9e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 158.100/139.900 Da ID: qiangjidimeixia... Max. 2.2e4 cps. 1.57 1.27 1.83 1.56 鸡肉基质匹配硝基咪唑类药物(4 μg/L)及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 鸡肉(添加水平为 1 μg/kg)硝基咪唑类及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 鸡肉基质匹配硝基咪唑类药物(20 μg/L)及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... Max. 1.8e5 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 188.200/123.000 Da ID: qiangjijiaxiaozu... Max. 5.5e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 142.200/96.000 Da ID: dimeixiaozuo 1 fr... Max. 5.4e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 158.100/139.900 Da ID: qiangjidimeixia... Max. 9.0e4 cps. 1.59 1.23 1.83 1.57 鸡肉(添加水平为 5 μg/kg)硝基咪唑类及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 猪肝基质匹配硝基咪唑类药物(4 μg/L)及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 猪肝(添加水平为 1 μg/kg)硝基咪唑类及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 XIC of +MRM (12 pairs): 172.000/127.800 Da ID: jiaxiaozuo 1 fro... Max. 1.7e5 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 188.200/123.000 Da ID: qiangjijiaxiaozu... Max. 5.2e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 142.200/96.000 Da ID: dimeixiaozuo 1 fr... Max. 8.9e4 cps. XIC of +MRM (12 pairs): 158.100/139.900 Da ID: qiangjidimeixia... Max. 9.3e4 cps. 1.58 1.24 1.80 1.56 猪肝基质匹配硝基咪唑类药物(20 μg/L)及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 猪肝(添加水平为 5 μg/kg)硝基咪唑类及相应内标(20 μg/L)检测的定量离子质谱图 相关产品信息 名称 规格 货号 标准品 4种硝基咪唑类药物混标 100 μg/mL溶于甲醇 1 mL 47905 4种硝基咪唑类内标物混标 100 μg/mL溶于甲醇 1 mL 47972 样品前处理 ProElut PXC 60 mg/3 mL, 50/pk 68203 12管防交叉污染真空 SPE萃取装置 12位 244358 1,3,6 mL柱管通用连接器 15/pk 4803 考克(控制流量) 15/pk 4806 真空/正压两用泵,无油 1/pk 99011 抽滤瓶套装(包括硅橡胶管 2米, 2 L抽滤瓶及橡胶塞) 1/pk 99013 色谱柱 Endeavorsil C18 50 x 2.1 mm, 1.8 μm 87002 高纯试剂·缓冲盐 乙腈 HPLC级 4 L 50101 乙腈 LC-MS级 4 L 50163 甲醇 HPLC级 4 L 50102 甲醇 LC-MS级 4 L 50164 正己烷 HPLC级 4 L 50115 乙酸乙酯 HPLC级 4 L 50104 甲酸 HPLC级 50 mL 50144 通用消耗品 瓶架/白色 50孔 52401A 瓶架/蓝色 50孔 52401B 样品瓶 (棕色/螺纹) 2 mL, 100/pk 1034 样品瓶盖/含垫 (已经组装) 100/pk 1035 ProMax针头式过滤器,尼龙 13 mm 0.22 μm 100/pk 37177 HPLC进样针,平头 25 μL H80465 红色产品货号#1034、#1035火热促销中……