Empore™ StageTips（C18）应用于5种混肽的分析​

EmporeTM StageTips (C18) 应用于5种混肽的分析 前言 StageTips是一种填充了Empore膜片的微量移液管。2003年由南丹麦大学，蛋白质组学领域著名学者Matthias Mann教授首次报道，其全称是 "Stop and go extraction tips"， 喻意为蛋白分解产生的肽被Empore膜片拦截，然后由适当的溶剂释放出来。这个过程中，盐份去除，肽得到纯化和浓缩，或者预分馏。Empore膜片主要由高分子纤维网固定住的功能颗粒构成，其具有极佳的物理特性(如柔软、致密)和化学特性(如高保留因子)， 使StageTips特别适用于仪器分析之前处理肽溶液样品。膜片中填料种类的多样性使StageTips具有多种不同性能，可以根据应用内容有多种选择，并可以在一支StageTips中组合使用。关键词： 混肽； StageTips； 1.实验过程 1.1仪器与试剂 LC-20AD液相色谱仪，岛津企业管理(中国)有限公司； PLX412离心机(货号：9034002125))，北京莱伯帕兹检测科技有限公司； 乙腈(色谱纯， Fischer公司))； 甲醇(色谱纯， Fischer 公司)； 三氟乙酸(分析纯，国药试剂) EmporeTM StageTips (C18， 货号：70-2019-1001-3EA)，北京莱伯帕兹检测科技有限公司； 标准物质：HPLC肽标准混合物(产品编号：H2016-1VL)，购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司； 1.2工作液配制 将2.500 mg标准样品溶于5mL 0.1%三氟乙酸缓冲溶液中，浓度为0.5ug/pL (25pg/50pL))； 1.3实验部分 将C18 StageTips用10pL甲醇活化，然后用10pL0.1%三氟乙酸水溶液平衡小柱。取15pL混肽溶液上柱，使用10pL 0.1%三氟乙酸水溶液淋洗小柱一次。用15pL 40% 乙腈/0.1%三氟乙酸的水溶液洗脱StageTips，收集洗脱液于玻璃内插管中，待测。 LC分析 色谱柱：：(C18柱 (250mmx4.6 mm， 5um)； 流动相：0.1%三氟乙酸水溶液：0.1%三氟乙酸乙腈溶液；流速：1.0 mL/min； 检测波长：272nm； 进样量：10pL； 表1流动相梯度洗脱表 时间 流动相A 流动相B 0 90 10 20.0 60 40 20.1 90 10 30.0 90 10 2.实验结果 图1浓度为0.5g/L标准溶液色谱图 3.实验结论 本次实验使用EmporeTM C18 StageTips： (货号：70-2019-1001-3EA， 北京莱伯帕兹检测科技有限公司)对5种混肽进行固相萃取处理后，以高效液相色谱进行分析，发现对其中Val-Tyr-Val， Met enkephalin， Leuenkephalin， Angiotensin Ⅱ四种肽具有较高吸附能力，(加标回收率在100%左右)， 对 Gly-Tyr的吸附能力较差(加标回收率在28.7%左右)。本实验中采用的固相萃取方法简便、快速，适用于多肽分析之前的样品前处理。 表2 3种肽的加标回收率结果 序号 化合物名称 回收率(%) 均值 RSD 1 2 3 4 5 6 % % 1 Gly-Tyr 30.5 30.7 24.4 28.7 27.6 30.3 28.7 7.3 2 Val-Tyr-Val 108.1 102.2 99.9 108.8 112.1 103 105.7 4.4 3 Metenkephalin 107.7 101.9 99.4 108.3 111.7 102.6 105.3 4.4 4 Leuenkephalin 104.4 98.8 93.8 103 107.3 98.3 100.9 4.8 5 AngiotensinⅡ 107.3 101.799.1 107.9 111.2102.2 104.9 4.4