使用StageTips实现MALDI靶标物样品制备完全自动化

使用StageTips实现MALDI靶标物样品制备完全自动化 方法简介 对MALDI靶标物的胶内酶解和后续制备是大批量蛋白质鉴定项目的关键步骤，为了实现高通量和可靠性的目标，必须通过自动化。通常酶解后提取液体积太大，需要浓缩和/或脱盐，无法直接加载至MS系统。。在这里，我们尝试使用StageTips来优化从凝胶上清液中提取肽的方法。 产品信息 货号：70-2019-1001-3EA 规格：Empore 6091 C18 StageTips， 200ul， 96T 使用方法 将StageTips放置于仪器的Tips支架上，实验过程中他们将被一根不锈钢针捡起，不锈钢针被密封在StageTip内的C18层上方，不锈钢针的尖端与C18层上方仅有几pL的空间。淋洗和洗脱以10-400nL/min的流速从Tip的上端进行。由于不锈钢针与C18层之间的空间非常小，所以分配速度完全由仪器控制。 单次慢速通过的肽溶液足以被完全提取。肽与C18层结合后，C18层被淋洗，之后Tips被放回Tips支架。为了洗脱目标物，将少量60%乙腈或基质溶液吸入针中，再从Tips支架中取出Tips， 多肽被从Tips底端缓慢地洗脱下来。 对于StageTips， 由于C18填料层的高背压，必须先将样品吸入不锈钢针，再缓慢的释放以通过填料层。采用非常缓慢的仅有10nL/min的释放速度来避免洗脱过程中的飞溅情况。 总结 一根专用的不锈钢针被密封在Tips填料层的上方，肽段可以在很小的空间内脱盐和富集，并直接洗脱获得MALDI靶标物，从而实现在StageTips上MALDI靶标物样品制备的完全自动化。