牛奶中α-群勃龙、β-群勃龙药物残留检测方案(液质联用仪)

SSL-CA22-230Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-671 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 测定牛奶中的α-群勃龙和β-群勃龙药物残留 LCMSMS-671 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用测定牛奶中a-群勃龙和β-群勃龙药物残留量的方法。两个化合物在 2 ug/L~100.0 ug/L浓度范围内线性良好，相关系数r均在0.999以上。在高、中低三个浓度下，基质标样保留时间和峰面积的 RSD%分别在 0.04%~0.07%和1.14%~2.33%之间，仪器精密度良好。加标浓度为1和5 ug/kg的样品，回收率在73.0~79.8%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于牛奶中的a-群勃龙和β-群勃龙药物残留的准确定量检测。 关键词：三重四极杆液质联用仪牛奶a-群勃龙 β-群勃龙 群勃龙 (Trenbolone) 的化学名称为去甲雄三烯醇酮，是广泛应用的甾类同化激素，具有促进畜禽生长、提高饲料转化率等功能，能促进动物体内蛋白的沉积，在养殖业中普遍使用。但是激素的滥用会对动物、人及生态环境带来危害，长期摄入同化甾体激素会导致动物机体代谢紊乱、发育异常，甚至肿瘤。中华人民共和国农业农村部公告第250号已明确将群勃龙列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》。 为了保障人们的食品安全，农业农村部首次发布了《GB31658.14-2021动物性食品中a-群勃龙和β-群勃龙残留量的测定液相色谱普串联质谱法》。 本文参考该标准，建立了牛奶中a-群勃龙和β-群勃龙残留量的测定的方法。试料中残留的 a-群勃龙和3-群勃龙在弱酸性条件下酶解，用叔丁基甲醚提取，正己烷除脂， HLB和氨基固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法上机测定，方法灵敏度高，定量准确。 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 X3 与三重四极杆质谱仪 LCMS-8050联用系统。具体配置为： 系统控制器：SCL-40 自动进样器：SIL-40C X3 输液泵： LC-40DX3×2 质谱仪： LCMS-8050 柱温箱： CTO-40C 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 在线脱气机： DGU-405 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (100 mmx 2.1 mml.D.， 2um) 岛津(上海)实验器材有限公司， P/N： 227-30001-04 流动相：A相-水，B相-乙腈 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样体积：2uL 洗脱方式：梯度洗脱，初始45%B，时间程序见表1 表1、1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 2.50 Pumps Pump B Conc. 45 3.50 Pumps Pump B Conc. 90 3.51 Pumps Pump B Conc. 90 6.50 Controller Stop 质谱条件 离子源：ESI，正离子模式DL管温度：250℃接口电压： 2kV加热模块温度：400C雾化气：氮气3.0 L/min接口温度：300℃干燥气：氮气10L/min扫描模式：多反应监测(MRM)加热气：空气10 L/minMRM参数：见表2 碰撞气：氩气(230kPa) 表2 MRM 参数 No. 中文名称 英文名称 化学式 CAS No. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 199.2* -10.0 -24.0 -21.0 1 a-群勃龙 17a-Trenbolone C18H2202 880657-17-6 271.2 253.2 -10.0 -21.0 -17.0 199.2* -10.0 -24.0 -21.0 2 3-群勃龙 173-Trenbolone (C18H220210161-33-8 271.2 253.2 -10.0 -21.0 -17.0 *表示定量离子 标准品溶液的配制及样品前处理 标准工作溶液配制： 取a-群勃龙及β-群勃龙浓度为1 mg/mL 的标准储备液1 mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为100 ug/mL 的混合标准中间液。分别精密量取混合标准中间液适量，用甲醇稀释配制成浓度分别为20、50、100、200、500和1000 ng/mL 的混合标准工作液。 样品前处理： 参考 GB 31658.14-2021《动物性食品中a-群勃龙和β-群勃龙残留量的测定液相色谱-串联质谱法》中试样的处理与净化方法。 基质加标校准曲线溶液的制备： 准确量取混合标准工作液适量，分别加入6份空白试料中，添加浓度分别为0.4、1、2、4、10和20 ug/kg，充分混匀。按酶解、提取和净化步骤操作，制成浓度分别为2、5、10、20、50和 100 ng/mL的系列基质添加标准溶液。 结果与讨论 3.1a-群勃龙及β-群勃龙标准溶液谱图 图1为2ng/mL a-群勃龙及β-群勃龙标准溶液的 MRM 色谱图，色谱峰分离良好，通道无干扰。 图1 2 ng/mL a-群勃龙及β-群勃龙标准溶液 MRM色谱图 3.2线性关系 将2、5、10、20、50和100 ng/mL 的基质混合标准工作液按1.2中的分析条件进行测定，外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线如图2所示。a-群勃龙及β-群勃龙校准曲线及在基质中的检测限、定量限的结果见表3。 图2(a-群勃龙及β-群勃龙校准曲线 表3 a-群勃龙及β-群勃龙校准曲线及检测限、定量限 编号 化合物 校准曲线 相关性系数R 准确度% 检测限(ng/mL) 定量限 (ng/mL) 1 a-群勃龙 Y=(20757.3)X+(3937.46) 0.9999 96.8~105.8 0.21 0.63 2 B-群勃龙 Y=(26015.1)X+(8919.02) 0.9999 94.1~102.4 0.19 0.56 3.3精密度 浓度为 2、10 ug/L 和 100 ug/L基质标准工作液连续测定6次，考察仪器的精密度。不同浓度样品中待测物保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.04%~0.07%和1.14%~2.33%之间，仪器精密度良好。 表4a-群勃龙及β-群勃龙保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 编号 化合物 RSD% (2ug/L) RSD% (10 ug/L) RSD% (100pg/L) R.T Area R.T Area R.T Area 1 α-群勃龙 0.07 1.78 0.04 2.23 0.04 1.14 2 β-群勃龙 0.05 2.33 0.04 2.05 0.04 1.74 3.4回收率 取空白牛奶5g，加入混标工作液，使加标浓度为1 ug/kg 和 5 ug/kg， 样品经提取与净化后，按照1.2中的分析条件测定a-群勃龙及β-群勃龙的加标回收率，平行测定3次。两个化合物的回收率在73.0~79.8%之间，具体结果见表5。 表 5a-群勃龙及β-群勃龙回收率结果 (n=3) 编号 化合物 加标浓度1 ug/kg 加标浓度 5 ug/kg 回收率% RSD% 回收率% RSD% 1 a-群勃龙 73.0 8.84 75.4 4.30 2 3-群勃龙 75.2 6.45 79.8 2.63 结论 依据国家标准《GB 31658.14-2021动物性食品中a-群勃龙和β-群勃龙残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定牛奶中α-群勃龙和β-群勃龙龙留的方法。样品经酶解后用叔丁基甲醚提取，HLB 和氨基 SPE 小柱净化，三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 进行检测。a-群勃龙和β-群勃龙在2ug/L~100.0 ug/L浓度范围内线性良好，相关系数r均在0.999以上。加标浓度为1和5ug/kg的样品，回收率在73.0~79.8%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于牛奶中群勃龙残留的准确检测。 岛津应用云 依据国家标准《GB 31658.14-2021动物性食品中α-群勃龙和β-群勃龙残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定牛奶中α-群勃龙和β-群勃龙残留的方法。样品经酶解后用叔丁基甲醚提取，HLB和氨基SPE小柱净化，三重四极杆质谱仪LCMS-8050进行检测。α-群勃龙和β-群勃龙在2 μg/L~100.0 μg/L浓度范围内线性良好，相关系数r均在0.999以上。加标浓度为1和5 μg/kg的样品，回收率在73.0~79.8%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于牛奶中群勃龙残留的准确检测。