饲料中喹乙醇检测方案(浓缩仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-2022 解决方案 全自动固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中的喹乙醇 介自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；高效液相色谱-中联质谱法；喹乙醇；饲料 喹乙醇是1965年由德国人以邻硝基苯胺为原料合成的 种抗菌促生长剂，商品名为倍育诺、快育灵等。1976年西欧共同体正式批准喹乙醇为饲料添加剂，随后澳大利业、H本、中国等国家相继批准其作为饲料添加剂使用。喹乙醇不仅具有促进动物生长作用，还具有抗菌生物活性，提高饲料转化率与瘦肉率。然而近年来研究发现，喹乙醇可能引起动物出现急性中毒、蓄积毒性以及亚慢性中毒等，进而影响人类健康。美国、欧盟已全面禁止喹乙醇作为药物使用，我国农业农村部也在2018年1月12日发布第2638号公告，决定停止喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂3种兽药使用丁食品动物。 喹乙醇是1965年惠德国人以邻硝基苯胺为原料合成的一种抗菌促生长剂，商品名为倍育诺、快育灵等。1976年西欧共同体正式批准喹乙醇为饲料添加剂，随后澳大利亚、日本、中国等国家相继批准其作为饲料添加剂使用。喹乙醇不仅具有促进动物生长作用，还具有抗菌生物活性，提高饲料转化率与瘦肉率。然而近年来研究发现，喹乙醇可能引起动物出现急性中毒、蓄积毒性以及亚慢性中毒等，进而影响人类健康。美国、欧盟已全面禁止喹乙醇作为药物使用，我国农业农村部也在2018年1月12日发布第2638号公告，决定停止喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3种兽药使用于食品动物。 图-1喹乙醇结构式 本文参考《农业部2086号公告-5-2014饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定液相色谱-串联质谱法》，试样采用0.1%甲酸水-乙腈溶液提取，经Raykol Fotector Plus全自动固相萃取仪净化，洗脱液经Raykol EVA 80全自动氮吹浓缩仪吹干，20%乙腈水溶液复溶，高效液相色谱检测，外标法定量。添加上机浓度为0.1 ug/mL的加标实验，得到喹乙醇的加标回收率在79%-94%之间， RSD值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中喹乙醇的检测需求。 关键字：全自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；高效液相色谱-串联质谱法；喹乙醇；饲料 全自动固相萃取仪：：賓睿科Raykol Fotector Plus 全自动氮吹浓缩仪：：睿科Raykol EVA 80 高效液相色谱-串联质谱仪： Agilent 1260+6410 HLB固相萃取柱 (RayCure， 200mg/6mL， 货号： RC-204-36476) 甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，甲酸(优级纯)，磷酸二氢钾(分析纯)，盐酸(分析纯)，超纯水。 0.1%甲酸水-乙腈溶液(4+6)：量取400 mL 超纯水，加入0.4 mL甲酸， 再取600 mL乙腈混匀。 0.1 mol/L 磷酸二氢钾溶液：：称取磷酸二氢钾 13.6 g， 用1000 mL水溶解。 0.02 mol/L 盐酸溶液：量取盐酸1.8mL， 加水稀释至1000mL， 混匀。 3.样品前处理 3.1提取 准确称取配合饲料2g于50mL离心管中，加入0.1%甲酸水-乙腈溶液(4+6)10 mL，涡旋1 min， 40℃超声 10 min， 10000 r/min 离心15 min， 收集上清液。残渣用10 mL提取液重复提取一次，合并两次提取液，混匀。取上清液5mL放置于Raykol EVA 80 氮吹浓缩仪在60℃条件下浓缩至约2mL，加入0.1 mol/L 磷酸二氢钾溶液4mL，涡旋溶解残留物，待用。 3.2净化与浓缩 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科Fotector Plus 固相萃取柱 HLB固相萃取柱(RayCure， 200mg/6mL) 活化 甲醇，水 淋洗 0.02 mol/L盐酸水溶液、5%甲醇水溶液 洗脱 甲醇 依次以3mL甲醇和3mL水活化HLB固相萃取柱，，以2 mL/min的速度进行上样，依次以3mL 0.02 mol/L盐酸水溶液和3 mL 5%甲醇水溶液淋洗，然后挤干小柱。用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液，在Raykol EVA 80氮吹浓缩仪上于60℃浓缩吹干，加入20%乙腈水溶液定容至1 mL，涡旋混匀，过0.22 um滤膜上机检测。详细步骤见图-2。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间人min， 1 清洗样品通道 甲醇 2.8 2 活化 甲醇 有机废液 2 3 1.9 3 活化 水 废水 2 3 1.9 4 上样 有机废液 2 7 4.1 5 清洗样品瓶 HCl (0.02mol/L) 废水 60 3 2.3 6 淋洗 5%甲醇水溶液 有机废液 3 3 1.4 7 气推 废水 80 30 2.2 8 清洗注射泵 甲醇 80 5 0.5 9 洗脱 甲醇 收集 1 5 5.4 10 气推 收集 2 2 1.4 11 气推 收集 40 10 1.1 12 结束 13 图-2. Fotector Plus 固相萃取净化方法 4.检测条件 4.1液质条件 柱子 Waters XBridge BEH HILIC 2.5umx21 mmx50mm 流速 0.200mL/min 流动相 A：10mM ammoniumacetic ((0.1%formicacid)，B： Methanol 柱温 35°C 进样体积 10 uL 检测器 Agilent 6410 离子模式 ESI+ 吹扫气 11 L/min 氮气温度 350°C 簇电压 4000 雾化压力 35 psi 梯度洗脱 0.0-1.0 min， 90%流动相A； 1.0-4.0 min， 50%流动相 A； 4.0-6.0 min， 50%流动相A 保持2min； 6.0-7.0 min， 90% 的流动相A； 7.0-10.0 min， 90%流动相A 保持3 min。 4.2MRM参数 表-2.喹乙醇串联质谱检测参数 CompoundName Precursorlon Production Dwell Fragmentor CollisionEnergy Cell AcceleratorVoltage 喹乙醇 264 143* 25 125 30 7 212 25 125 30 7 5.加标实验 5.1基质效应验证 为消除基质带来的离子抑制对定量测定的影响，需要用空白样品按照上述提取和净化步骤，制备空白提取液，再加入一系列浓度标准品，配制成基质加标曲线。 5.2样品加标测试 为了验证该方法的回收率，本实验向空白配合饲料样品(2g)中加入上机浓度为 0.1 ug/mL的喹乙醇标准品进行上述前处理，测试结果如表-3所示。 表-3添加实验的回收率及相对标准偏差(n=4) 化 合物 回收率 (%) 样品-1 回收率 (%) 样品-2 回收率 (%) 回收率 (%) 样品-4 平均回 收率 (%) RSD (%) 样品-3 喹 乙醇 79.2 83.9 87.6 93.1 85.9 6.8 6.注意事项 光照对喹乙醇分解变质影响很大，为了在检测中得到较高的准确性，整个前处理过程要做到严格避光。 7.总结 7.1采用睿科 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪能同步进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员的工作量，提 高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。 7.2睿科 Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪处理通量高，80个样品可同时进行氮吹，实验平行性好；而且采用氮吹针自动追随液面设计，无需手动调节氮吹针高度且耗气量小，省时省力。 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2020年10月版 邮箱： info@raykol.com热线：址：： Vwww.raykol.com 本文参考《农业部2086号公告-5-2014 饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定 液相色谱-串联质谱法》，试样采用0.1%甲酸水-乙腈溶液提取，经Raykol Fotector Plus全自动固相萃取仪净化，洗脱液经Raykol EVA 80全自动氮吹浓缩仪吹干，20%乙腈水溶液复溶，高效液相色谱检测，外标法定量。添加上机浓度为0.1 ug/mL的加标实验，得到喹乙醇的加标回收率在79%-94%之间，RSD值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中喹乙醇的检测需求。