饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-2021 解决方案 全自动固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇 介自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；高效液相色谱法；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；饲料 介绍 脱氧雪腐镰刀菌烯醇又称呕吐毒索，主要由禾谷刀菌、尖孢镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生。呕叶毒素广泛存在于大麦、小麦、玉米和燕麦中，其污染粮粮的情况非常普遍，世界各地均有报道。呕吐毒素对人和动物均有很强的毒性，能引起人和动物呕吐、腹泻、皮肤刺激、拒食、神经紊乱、流产、死胎等，世界上多个国家均对呕吐素在饲料中的限值标准有着相应规定。 全自动固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇 1.介绍 脱氧雪腐镰刀菌烯醇又称呕吐毒素，主要由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、雪腐镰刀菌等刀菌产生。呕吐毒素广泛存在于大麦、小麦、玉米和燕麦中，其污染粮谷的情况非常普遍，世界各地均有报道。呕吐毒素对人和动物均有很强的毒性，能引起人和动物呕吐、腹泻、皮肤刺激、拒食、神经紊乱、流产、死胎等，世界上多个国家均对呕吐毒素在饲料中的限值标准有着相应规定。 图-1.脱氧雪腐镰刀菌烯醇结构式 本文参考 GB/T 30956-2014《饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》，试样采用超纯水提取，提取液离心后用含有脱氧雪腐镰刀菌烯醇特异抗体的免疫亲和柱经 Raykol Fotector Plus 全自动固相萃取仪净化。以甲醇洗脱小柱，经Raykol EVA 80全自动氮吹浓缩仪吹干，流动相复溶，高效液相色谱检测，外标法定量。添加上机浓度为1.0ug/mL 的加标实验，得到脱氧雪腐镰刀菌烯醇的加标回收率在 88%-104%之间， RSD 值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测需求。 关键字：全自动固相萃取；全自动氮吹浓缩仪；；高效液相色谱法；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；饲料 2.仪器与耗材 全自动固相萃取仪：睿科Raykol Fotector Plus； 全自动液体处理工作站：睿科Raykol Auto Prep 200 全自动氮吹浓缩仪：睿科Raykol EVA 80 脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱 (Romer， 2500ng/3mL)； 高效液相色谱： Waters ACQUITY UPLC I-Class 配备大体积流通池； 甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；超纯水；；聚乙二醇(相相分子质量为8000) 3.标准曲线配制 使用睿科 Raykol Auto Prep 200 可实现标准品的全自动化配制，，可将母液(100 ug/mL)通过工作站的直接稀释模式，配制一条浓度分别为 0.1 ug/mL， 0.5 ug/mL， 1.0 ug/mL， 5.0ug/mL 和10.0 ug/mL的标准工作曲线。 图-2. Auto Prep 200 液体工作站配标程序 4.样品前处理 4.1提取 准确取粉碎试样50 g于250 mL 具塞锥形瓶中，加入10 g聚乙二醇及200 mL超纯水，置于震荡器上震荡提取60 min， 静置，取5mL上清液以10000 r/min 的转速离心5 min， 取1mL上清液于20 mL 玻璃上样管中，待用。 4.2净化与浓缩 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Fotector Plus 固相萃取柱 脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱 (Romer， 2500ng/3mL) 淋洗 超纯水 洗脱 甲醇 以1 mL/min 的速度精确上样1 mL 待测液，用2mL水清洗样品瓶，3mL 水淋洗免疫亲和柱，气推30 mL压干免疫亲和柱，推速为80 mL/min。最后用1.5 mL甲醇以0.5 mL/min的速度洗脱小柱，收集洗脱液用睿科 Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪于50°C条件下吹干，用0.5mL 10%的乙腈水溶液复溶，涡旋混匀，过滤膜上机检测。详细步骤见图-3。 热线：400-885-1816 序号 命令 溶剂 排出 流(mL/min) 体积(mL) 时间(min) 1 清洗样品通道 水 2.8 2 填充样品路径 水 40 3 1.3 3 上样 废水 1 2.5 2.9 4 清洗样品瓶 水 废水 40 2 2.8 5 淋洗 水 废水 2 3 1.9 6 气推 废水 80 30 2.2 7 清洗注射泵 甲醇 60 5 0.5 8 洗脱 甲醇 收集 0.5 1.5 3.3 9 气推 收集 0.5 2 4.4 10 气推 收集 40 10 1.1 11 结束 12 图-3. Fotector Plus 脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和净化方法 5.检测条件 表-2月脱氧雪腐镰刀菌烯醇液相色谱检测条件 色谱柱 WatersBEH-C8(2.1×100 mm，1.7 um) 流速 0.200 mL/min 流动相 A：水， B：乙青 柱温 35°C 进样体积 10uL 梯度洗脱 等度洗脱 A：B=90：10 紫外检测器 波长218nm 取空白试样50 g， 添加上机浓度为 1.0 ug/mL 的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品，进行上述前处理，回收率结果如下表-3所示： 表-3添加实验的回收率及相对标准偏差结果(n=6) 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 4 5 6 DON 102.2 102.8 88.9 98.7 97.5 103.9 99.0 5.6 7.注意事项 7.1.对于颜色较深的提取液，第一次可用 PBS缓冲液淋洗小柱，第二次再用5 mL 超纯水淋洗。 7.2.. 免疫亲和柱使用前需提前从冰箱中取出，于25℃回温20分钟左右，冬天室温较低时建 议放到温度较高的地方回温。 8.总结 8.1.采用睿科 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪能同步进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。 8.2.睿科 Raykol Auto Prep 200 全自动液体工作站可实现混标、标准曲线的配置，全程无需人为值守，让实验人员远离有毒有害物质，保护身体健康。 8.3.睿科Raykol EVA 80 全自动氮吹浓缩仪处理通量高，80个样品可同时进行氮吹，实验平行性好；而且采用氮吹针自动追随液面设计，无需手动调节氮吹针高度且耗气量小，省时省力。 Raykol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.， Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2020年10月版 热线： 网址：：Vwww.raykol.com邮箱： info@raykol.com 邮箱： info@raykol.com网址：： www.raykol.com 本文参考GB/T 30956-2014《饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》 ，试样采用超纯水提取，提取液离心后用含有脱氧雪腐镰刀菌烯醇特异抗体的免疫亲和柱经Raykol Fotector Plus全自动固相萃取仪净化。以甲醇洗脱小柱，经Raykol EVA 80全自动氮吹浓缩仪吹干，流动相复溶，高效液相色谱检测，外标法定量。添加上机浓度为1.0 ug/mL的加标实验，得到脱氧雪腐镰刀菌烯醇的加标回收率在88%-104%之间，RSD值小于10%，表明该方法准确度高、精密度好，可以满足饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测需求。