自来水中微囊藻毒素检测方案(固相萃取仪)

//莱伯帕兹#EM0009 撰稿人：张海生审 核：马忠强 EmporeTM C18 固相萃取膜片应用于自来水中微囊藻毒素的检测 关键词： 微囊藻毒素， MC， Empore， e47mm 固相萃取膜 前言： 微囊藻毒素(Microcystin， MC) 是一类具有生物活性的，自然环境中广泛分布的肝毒素。它对人体蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用，与肿瘤促进作用有直接关系。中国生活饮用水卫生标准 (GB/T5749-2006)，将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1.0ug/L，该标准的实施对水源水的质量提出出更高的要求[1]。 实验中，采用1升水样通过 47mm 的EmporeM C18 固相萃取膜片 (货号：98-0604-0217-3)处理，并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱。然后通过 HPLC 对提取物进行定量[2]。 1.，实验过程 1.1仪器与试剂 所有试剂均为分析纯或更高。 微囊藻毒素-LR标准物质(农业部环境保护科研监测所， 20ug/mL，溶剂：甲醇)； EmporeM 固相萃取膜： C18，47mm，购自 美国 CDS公司(货号：98-0604-0217-3)； 网址： www. labparts.cn 电话：010-80486450-5036/5037 甲醇(色谱纯， Fisher Chemical) 三氟乙酸(分析纯，天津市福晨化学试剂厂) 磷酸二氢钾(分析纯，北京化学试剂公司) 磷酸(分析纯，国药集团化学试剂公司) 纯净水，产自 Milli-QQ EQ 7000系统，美国密理博 Millipore公司 磷酸二氢钾溶液 (0.05mol/L)：称取 6.8g磷 酸二氢钾，用水溶解，定容至1000.0mL磷酸盐缓冲液：用20%((体积分数)磷酸溶液将磷酸二氢钾溶液调至 pH到3 0.1%三氟乙酸-甲醇溶液：用甲醇将0.1mL一氟乙酸定容至100.0mL Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统， 北京莱伯泰科仪器股份有限公司； 高效液相色谱仪： LC600 二元高压梯度高效 液相色谱，北京莱伯泰科仪器股份有限公司。 1.2工作液配制 微囊藻毒素-LR工作液：将20ug/mL微囊藻 毒素-LR标准物质用甲醇稀释至浓度为2ug/mL； 1.3实验 1.3.1品品制备 1L自来水中加入100mg硫代硫酸钠，再加入200uL 的 2ug/mL 微囊藻毒素-LR标准工作液，样品的加标浓度为 400ng/L。超声30min， 待萃取。使用同一批 EmporeM 固相萃取膜(C18，47mm)对每个样品进行四次重复制备。 1.3.2净化与浓缩 将样品及 EmporeM[固相萃取膜(C18，47mm) 加入 Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统，并按照图1所示的方法进行Sepaths UP 方法编辑并进行固相萃取富集，收集洗脱液。对洗脱液进行氮吹浓缩，当收集液浓缩到近干时，加入流动相定容到1.0mL， 待 HPLC检测。 图1微囊藻毒素-LR SPE 富集方法 ( 地址：北京市顺义区安庆大街6 号 ) 网址： www. labparts. cn ( 电话：01 0 -80486450-5036/5037 ) 1.3.3 HPLC 分析 3，结果与讨论 色谱柱： LabParts C18 反相柱， 5um， 4.6x250mm； 波长：238nm； 流速： 1mL/min； 柱温：35℃； 进样量：20pL； 流动相：：1甲醇：磷酸盐缓冲溶液=65：35 2，实验结果 本次实验展示使用 EmporelM 固相萃取膜(C18， 47mm， 固相萃取柱，货号：98-0604-0217-3)对自来水中微囊藻毒素-LR进行富集提取的方法。实验中，样品经固相萃取净化、浓缩等前处理步骤后，经HPLC分析得到微囊藻毒素-LR：的加标回收率达80.1%~86.4%，：结果较好。四次重复实验RSD=3.1%，通道间的平行性良好。实验表明，EmporelM 固相萃取膜(C18， 47mm， 固相萃取柱，货号：98-0604-0217-3)适用于消微囊藻毒素-LR的萃取净化。 ( 4，参考文献 ) 图2，微囊藻毒素-LR标准工作液色谱图(0.4ppm) ( [1] GB/T 5749-2006 生活饮用水卫生标准[2]GB/T 20466-2006水中微囊藻毒素的测 定 ) 图3加标样品色谱图 表1加标回收率结果 4组平行样回收率，% 标样 平均值，% RSD，% 1 2 3 4 微囊藻毒素-LR 80.1 82.7 86.4 83.3 83.1 3.1 北京莱伯帕兹检测科技有限公司地址：北京市顺义区安庆大街号 北京莱伯帕兹检测科技有限公司 微囊藻毒素（Microcystin，MC）是一类具有生物活性的，自然环境中广泛分布的肝毒素。它对人体蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用，与肿瘤促进作用有直接关系。中国生活饮用水卫生标准（GB/T 5749-2006），将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1.0μg/L，该标准的实施对水源水的质量提出了更高的要求[1]。实验中，采用1升水样通过47mm的Empore™C18固相萃取膜片（货号：98-0604-0217-3）处理，并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱。然后通过HPLC对提取物进行定量[2]。