蛋白质中前沿分析技术检测方案(蛋白印迹仪)

SARS-COVID-19新冠多抗原血清学检测 小儿麻痹、埃博拉、MERS、HCV等传染性疾病 后疫情时代蛋白质前沿分析技术 bictechneproteinsimple 公共卫生突发事件中，对人类威胁最大，可引起大规模恐慌的是传染病引起的突发事件(例如，新冠、SARS、埃博拉、禽流感等等)。传染病以其突发性和传播性的基本特点，需要公共卫生系统做出快速响应。本次新型冠状病毒大流行对全球各个国家的公共卫生防治系统发起挑战。 后疫情时代，对更加快速、高通量、自动化、减少研究人员暴露的蛋白质检测分析平台的需求更加前所未有。国家及地方相关部门，需对由病原微生物，包括病毒、细菌和寄生虫引起的传染病入侵机制，对病原体快速鉴定，利用高敏感性和特异性方法阐明分子机制，信号通路，研发疫苗、药物等抗感染手段等。 Ella 全自动微流控ELISA快速检测系统 多重细胞因子检测 细胞因子动态实时监测 预后生物标志物检测 Jess 全自动Digital Western定量检测系统 致病蛋白机制研究 抗原血清学检测 感染后血清抗体确认 传统ELISA和化学发光血清学检测仅能检测 SARS-CoV-2的一个或者两个抗原，基于全自动Digital WesternBlot技术，建立起比传统WB检测时间更快速，更简单易用的平台，用于新冠病毒多抗原(N，S， S1和S2)检测。可作为RT-PCR技术诊断后，对于阴性样本，迟疑样品，可靠的验证平台。 ( 参考文献： ) Edouard S， jaafar R， Orain N ， et al. Automated Westernimmunoblotting detection of anti-SARS-CoV-2 serumantibodies， European journal of Clinical Microbiology &Infectious Diseases，2021. d Uncropped WES immunoblots control Extended Data Fig. 1 S1/2 Panel D-immunoblots Panel D-chromatograps PNGase F + + kDa 250 440 200 116 280 200 Extended Data Fig.2 Panel D-immunoblots Panel D-chromatograps 116 k0 500 D 66 200- 200 比利时鲁汶大学Rega研究所的病毒学家率先在仓鼠上实验成功，接种一剂基于黄热病毒YF17D载体的新冠病毒候选减毒疫苗(YF-S0)即可保护仓鼠免受新冠病毒和黄热病的感染。本项研究发表在Nature (IF： 43)杂志上。研究人员利用ProteinSimple全自动Digital Western Blot系统，检测候选减毒疫苗(YF-SO)抗原S蛋白(糖基化和去糖基化的 S1/2，SO，S1)的表达情况。分子量高达440 KDa的糖基化S1/2和SO蛋白，可轻松检出。 ( 参考文献： ) ( L. Sanchez-Felipe， T. Vercruysse， et al.， A single-dose live- attenuated YF17D-vectored SARS-CoV-2 vaccine candidate，Nature，2021. ) 炎症细胞因子有助于预测COVID-19的严重程度和死亡。美国西奈山伊坎医学院，利用Ella全自动微流控ELISA分析平台，检测COVID-19细胞因子释放综合征(CRS)，进而帮助指导治疗，并可快速动态监测受试者对药物和治疗的反应。本项研究发表在Nature Medicine (IF： 53)杂志上。 ( 参考文献： ) ( Del Valle， D.M.， Kim-Schulze， S.， Huang， HH. e t al.， An inflammatory cytokine signature predicts COVID-19 severity and survival. N ature M edicine， 2020. ) 比利时鲁汶大学Jim Baggen团队， 在Nature Genetics(IF：38)杂志报道了全基因组CRISPR筛选出病毒特异性宿主因子和共享宿主因子，可用于开发抗SARS-CoV-2和人类冠状病毒HCoV-229E(引起普通感冒的病毒之一)的药物。 SARS-CoV-2需要溶酶体蛋白TMEM106B才能感染人细胞系和原代代细胞。TMEM106B过表达可促进SARS-CoV-2或伪病毒感染细胞，表明其在病毒进入细胞中起关键作用。 TMEM106B可能成为COVID-19严重程度的预生生物标志物。 本项研究中， ProteinSimple全自动Digital WesternBlot系统助力新冠病毒受体ACE2在不同细胞系表达相关研究。 Baggenj， Persoons L ， Vanstreels E ， et al.， Genome-wide CRISPR screening identifies TMEM106B as a proviral host factor forSARS-CoV-2. Nature Genetics，2021. 小儿麻痹症，即脊髓灰质炎，是由脊髓灰质炎病毒引起，对儿童健康产生严重威胁的急 性传染病。法国科学家，开发和优化了一种非侵入性免疫检测。利用大猩猩和人类粪便中的肠病毒特异性抗体，进行脊髓灰质炎病毒感染检测。全自动Digital Western Blot jess检测平台，分别检测两种抗原和抗体。 Figure 7. Western blot JessTM using two different antigens， poliovirus vaccine (A) and Ibou002 virusstrain (B). Anti-human IgG/IgA antibody detection was performed for 16 gorilla stools， three humanstools， and one control positive serum (non-diluted and diluted 1：100). ( 参考文献： ) Sereme Y， Zarza S M ， Hacene Medkour， et al.， Stool Serology： Development of a Non-Invasive Immunological M ethod forthe Detection of Enterovirus-Specific Antibodies in Congo Gorilla Faeces. Microorganisms，2021. Merck公司研发并生产全球首个已上市预防埃博拉病毒病的商品化疫苗ERVEBO°即rVSVAG-ZEBOV-GP疫苗。在整个疫苗研发和生产过程中，使用全自动定量毛细管Western Blot检测平台，研究和表征ZEBOV糖蛋白。 自动化Western Blot与传统手工Western Blot技术平台相比有诸多优势： 宽线性范围 更高的通量 因自动化而增强的重复性 高特异性 ( 参考文献： ) Minsker K， Rustandi R R， ShaH ， et al.， Characterization of rVSVAG-ZEBOV-GPglycoproteins using automated capillary western blotting.Vaccine，2020. 12 病原微生物感染后的血清抗体确证实验是必要的。 美国CDC艾滋病毒、肝炎、性病和结核病国家中心，基于全自动Digital Western Blot检测平台，建立HCV血清抗体确认检测。 评价： 特异性100%、灵敏度95%、全程自动化、 单次运行时间： 3h 样本量：100个/天 ( 参考文献： ) M aja， Kodani， Miranda， et al.， An AutomatedImmunoblotMethod for Detection of IgG Antibodies to Hepatitis C Virus：a Potential Supplemental Antibody Confirmatory Assay.Journal of clinical microbiology，2019. 自噬是一种影响病毒感染和其他疾病的重要细胞过程，BECN1增强自噬，SKP2减弱自噬，是自噬关键调节蛋白，因而SKP2-BECN1是宿主抗病毒药物一个很有前途的靶点。ATG14寡聚体的增加与自噬增强成正比，检测ATG14单体及其寡聚体可以反应自噬水平。 德国马克斯·普朗克精神病研究所，利用全自动DigitalWestern Blot平台检测MERS-CoV感染细胞，发现可显着降低ATG14寡聚体，说明MERS-CoV抑制了自噬的活性。同时， SKP2抑制剂可以增加ATG14寡聚体，增强自噬，是抗MERS-CoV感染的先导药物。 ( 参考文献： ) Gassen N C， Niemeyer D ， Muth D ， et al.，SKP2 attenuatesautophagy through Beclin1-ubiquitination and its inhibitionreduces MERS-Coronavirus infection. Nature Communications，2019 Healthy controlsMedian (range) Survived Fatal pC 9value survived-control p value fatal- control p value survived- fatal TNF-c 6.120(2.840-10.07) 18.24(8.22-106.4) 35.42(16.47-321.6) <0.0001* <0.0001* NS IL-4 0.0(0.0-0.4) 0.0(0.0-0.38) 0.03(0.0-13.82) NS NS NS IL-6 2.23(0.62-4.24) 51.49(1.65-622.4) 214.0(43.62-417.012) <0.0001* <0.0001* 0.0325* IL-10 2.340(1.060-3.65) 9.15(2.14-194.7) 40.66(10.28-301.9) <0.0001* <0.0001* NS IL-12 6.12(2.84-10.07) 17.6(8.22-106.4) 35.42(16.47-321.6) <0.0001* <0.0001* NS IL-13 1.350(0.0-3.80) 3.69(0.02-93) 2.92(2.92 (0.43-25.82) NS NS NS IL-17A 1.660(0.64-4.07) 3.55(0.05-34.43) 6.805(3.34-55.44) 0.0041* <0.0001* 0.0219* IL-18 178.7(64.82-341.1) 844.4(132.2-51，203) 1278(229.5-17，926) <0.0001* <0.0001* NS IL-22 22.49(12.37-47.26) 26.18(0.25-708.2) 96.76(11.83-2622) NS 0.0250* 0.0457* NS， not significant *p<0.0001 细螺旋体病又称钩端螺旋体病，是一种人畜共患病。该病一般通过接触水或土壤中带菌宿主的尿液传播，经皮肤或胃肠道途径造成人类感染。临床症状为高烧、黄疸、肾衰竭等等，可危及生命。本项研究，使用Ella检测TNF-α，IL-4， IL-6，IL-10，IL-12，IL-13，IL-17A，IL-18，和IL-22共9个细胞因子。表明，细胞因子水平可以作为钩端螺旋体病患者的预后生物标志物。 ( 参考文献： ) ( Wan S， Abdullah M ， Sekawi Z ， et al. Raised l evels ofIl-6，Il- 17a， and Il-22 i n fatal leptospirosis. European journal of Clinical Microbiology & I nfectious Diseases，2019. ) Q热(QFever)是一种人畜共患传染病，由革兰氏阴性细菌贝贝柯克斯体(Coxiella burnetii)感染产生。该细菌主要寄生在牛、山羊和绵羊等动物中。通过尿液、粪便和牛奶等分泌物大量传播。常见的临床症状有发热、咳嗽、夜间盗汗、疲劳、肌肉酸痛和头痛等症状。该项研究，利用Ella检测IL-10、IL-1β、IL-1Ra和IL-6的浓度，得出急性Q热感染，对循环血单核细胞的转录和循环细胞因子有持久影响的结论。 ( 参考文献： ) ( PhRR ， John S ， Keijmelsp， et al.Long-Lasting Transcriptional Changes in Circulating Monocytes of Acute QFever Patients. O pen Forum I nfectious Diseases，2019. ) 狂犬病是由狂犬病毒所引起的急性传染病，人畜共共。旦出现狂犬症状，致死率近乎100%。美国亚特兰大CDC的研究人员，在热反应性壳聚糖水凝胶中配制了一种狂犬病毒+避孕双重疫苗ERA-2GnRH。该疫苗既诱导了高强度和持久性狂犬病毒中和抗体(rVNA)，同时也诱导了促性腺激素释放激素(GnRH)抗体，并且持续时间更长，体现了疫苗更高和持久的免疫力。 由于GnRH抗体分子量较小(~2KD)，使用传统WesternBlot以以检出。故该项研究，使用全自动DigitalWestern Blot系统进行抗体检测。全自动DigitalWestern Blot系统检测范围为2-440 KD。 ( 参考文献： ) ( Wu x， Yang Y， K ling C ， e t al.Inactivated R abies Virus- Vectored Immunocontraceptive Vaccine in a Thermo-Responsive Hydrogel Induces High and Persistent Antibodiesagainst R abies， b ut Insufficient Antibodies againstGonadotropin-Releasing Hormone fo r Contraception.Vaccines，2019. ) Jess全自动DigitalWB ·入侵机制研究 ·细胞因子检测 ·病原体快速鉴定 ·预后生物标志物检测 ·抗原抗体检测 ·药物&疫苗效力检测 ·信号通路研究 ·疫苗研发 ·药物研发 ·毒理学评价 biGtechneproteinsimple ProteinSimple是美国纳斯达克上市公司Bio-Techne 集团(NASDAQ：TECH)旗下行业领先的蛋白质分析品牌。 地址：上海市长宁路1193号来福士广场3幢1901室 电话：021-60276091 热线：4000-8b63-973 邮箱： PS-Marketing.CN@bio-techne.com 网址： www.bio-techne.com 本手册涉及的商标除了归ProteinSimple所有外，其他商标归各自所有者拥有。 版本号：20220223 公共卫生突发事件中，对人类威胁最大，可引起大规模恐慌的是传染病引起的突发事件（例如，新冠、SARS、埃博拉、禽流感等等）。传染病以其突发性和传播性的基本特点，需要公共卫生系统做出快速响应。本次新型冠状病毒大流行对全球各个国家的公共卫生防治系统发起挑战。后疫情时代，对更加快速、高通量、自动化、减少研究人员暴露的蛋白质检测分析平台的需求更加前所未有。国家及地方相关部门，需对由病原微生物，包括病毒、细菌和寄生虫引起的传染病入侵机制，对病原体快速鉴定，利用高敏感性和特异性方法阐明分子机制，信号通路，疫苗研发、药物等抗感染手段等。