化妆品中10种羟基酸检测方案

DKMA@A reliable partner for your lab 化妆品中10种α-羟基酸的检测方法解决方案 a-羟基酸是指在α位有羟基的羧酸，是一组弱的吸湿性有机酸。因其最初是从苹果、柠檬、甘蔗等水果和植物中提取的，也称果酸。α-羟基酸是一类小分子物质，可迅速被吸收，具有较效的保湿作用；其浓度高时可引起角质脱落和角质溶解，对皮肤干燥、细微皱纹、斑点有显著的改善作用，可使皮肤变得光滑、柔软、富有弹性，因此倍受化妆品厂商的青睐，现在已广泛用于化妆品中。但是α-羟基酸的安全性一直备受争议，由于其浓度越高，酸度越大，对皮肤的刺激性也越大。因此我国的《化妆品安全技术规范》2015版中对其含量有限量要求。国家药品监督管理局于2019年发布了修订后的化妆品中10种a-羟基酸的检测方法，替换《化妆品安全技术规范(2015年版)》中原有检测方法，自2020年1月1日起执行。 迪马科技参考新版检测方法，采用 Diamonsil Plus 5 pm C18-A色谱柱，对10种α-羟基酸进行分离，色谱分离度高，线性良好，可供广大分析工作者参考。 1、适用范围 本方案适用于葡糖醛酸、酒石酸、羟基乙酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、2-羟基丁酸、扁桃酸、二苯乙醇酸、羟基辛酸的测定。 2、标准品配制 (1)单标标准储备溶液：分别精密称取400 mg 葡糖醛酸、200 mg 酒石酸、400 mg 羟基乙酸、400 mg 苹果酸、500 mg 乳酸、400 mg 柠檬酸、500 mg 2-羟基丁酸、10 mg 扁桃酸、10 mg 二苯乙醇酸、60 mg 羟基辛酸于不同的10 mL容量瓶中，分别用水溶解并定容至刻度。 (2)混合标准系列溶液的制备：：分别精密移取不同体积的单标标准储备溶液于10 mL容量瓶中，用水定容，配制成浓度如下表所示的混合标准系列溶液。 a-羟基酸组分 葡糖醛酸 酒石酸 羟基乙酸 苹果酸 乳酸 柠檬酸 2-羟基丁酸 扁桃酸 二苯乙醇酸 羟基辛酸 混合标准系列溶液mg/L 100 50 100 100 125 100 125 2.5 2.5 100 200 100 200 200 250 200 250 5 5 200 400 200 400 400 500 400 500 10 10 400 800 400 800 800 1000 800 1000 20 20 800 2000 1000 2000 2000 2500 2000 2500 50 50 2000 3、提取 取1.0g样品于10 mL 玻璃试管中，置于90℃水浴中 30 min， 以去除挥发性有机溶剂，加水至10mL， 充分涡旋混合30s， 60℃超声提取 30 min， 取适量样品在 4000 rpm 下离心5 min， 取上清液作为待测溶液。 4、分析条件 色谱柱： Diamonsil Plus C18-A， 250 x4.6 mm， 5 pm (Cat.#：99406) 进样量：5uL 柱 温：：室温 检测器： PDA214nm 北京：400-608-7719上海：021-61263966天津：400-633-6606广州：020-85593520成都：028-86612625沈阳：024-22943513重庆：023-62568657石家庄：0311-66686220济南：136-2642-4277青岛：131-5685-9195西安：158-0293-5126哈尔滨：180-4537-3042 流动相： A： 0.1 mol/L 的磷酸氢二铵溶液，用磷酸调 pH值为3.0 B：甲醇 流动相梯度洗脱程序： 时间/min 流速/mL/min V(流动相A)/% V(流动相B)/% 0 0.7 100 0 7 0.7 100 0 7.1 1.0 100 0 14 1.0 50 50 14.1 1.0 35 65 23 1.0 35 65 23.1 0.7 100 0 40 0.7 100 0 5、添加回收结果 化妆品中 10种α-羟基酸的 HPLC 检测的添加回收结果。加标量：混合标准品以葡糖醛酸计2000 ug/mL， 加1.0mL 化合物名称 添加浓度(mg/kg) 回收率(%) 葡糖醛酸 2000 96.53 酒石酸 1000 98.05 羟基乙酸 2000 97.74 苹果酸 2000 98.31 乳酸 2500 97.88 柠檬酸 2000 111.40 2-羟基丁酸 2500 101.53 扁桃酸 50 94.81 二苯乙醇酸 50 95.40 羟基辛酸 2000 95.20 Time (min) 10种α-羟基酸标准溶液(2000mg/L)色谱图(未扣除背景图) ( 广州 ：020-85593520 石家庄 ： 0 311-66686220哈尔滨：18 0 -4537-3042 ) 10种a-羟基酸标准溶液(2000 mg/L)色谱图(已扣除背景图) 峰号 名称 保留时间min 峰面积uV*s 峰高pV 理论塔板数N USP 拖尾因子 分离度 1 葡糖醛酸 4.345 399093 83237 15261.88 1.319 -- 2 酒石酸 4.639 692072 137383 15056.56 1.014 2.009 3 羟基乙酸 5.028 381886 80313 20101.25 1.134 2.655 4 苹果酸 5.681 660564 100419 14006.67 0.972 3.914 5 乳酸 6.956 377953 57249 20832.93 1.091 6.625 6 柠檬酸 7.832 684272 100566 26147.76 1.141 4.533 7 2-羟基丁酸 11.964 472216 45059 27443.3 1.246 17.125 8 扁桃酸 19.913 503286 111300 334915.5 1.253 37.272 9 二苯乙醇酸 23.224 1025995 156304 239256.4 1.263 20.218 10 羟基辛酸 25.521 306007 33133 154378 1.131 10.216 广州：020-85593520 石家庄：0311-66686220 哈尔滨：180-4537-3042 以下色谱图均已扣除背景干扰 Time (min) 10种a-羟基酸标准溶液(800mg/L)色谱图(已扣除背景图) 峰号 名称 保留时间min 峰面积 uV*s 峰高pV 理论塔板数N USP 拖尾因子 分离度 1 葡糖醛酸 4.35 163989 33834 14370.91 1.297 -- 2 酒石酸 4.633 282061 57504 16010.67 1.078 1.942 3 羟基乙酸 5.028 150641 31764 19805.49 1.151 2.73 4 苹果酸 5.683 270078 45426 16663.03 1.061 4.109 5 乳酸 6.959 151462 23305 21365.81 1.082 6.962 6 柠檬酸 7.801 273791 41279 27150.29 1.282 4.432 7 2-羟基丁酸 11.991 186158 18254 28988.42 1.157 17.789 8 扁桃酸 19.891 199538 44122 331606.5 1.249 37.633 9 二苯乙醇酸 23.219 417519 63134 233626.4 1.264 20.15 10 羟基辛酸 25.516 124324 13402 155613.5 1.121 10.19 Time (min) 10种α-羟基酸标准溶液(400 mg/L)色谱图 峰号 名称 保留时间min 峰面积 pV*s 峰高 pV 理论塔板数N USP 拖尾因子 分离度 1 葡糖醛酸 4.357 84208 17357 15107.5 1.351 -- 2 酒石酸 4.637 144009 29096 15736.33 1.069 1.933 3 羟基乙酸 5.034 74680 15641 19255.38 1.106 2.71 4 苹果酸 5.69 135471 23588 18100.07 1.091 4.175 5 乳酸 6.966 73632 11566 21910.29 1.117 7.136 6 柠檬酸 7.789 127713 20737 31205.55 1.323 4.516 7 2-羟基丁酸 11.983 93740 9182 27411.77 1.099 18.005 8 扁桃酸 19.872 99318 21369 317210 1.246 36.64 9 二苯乙醇酸 23.245 216576 31609 224511.5 1.24 19.996 10 羟基辛酸 25.551 61188 6693 155400.2 1.14 10.126 北京：400-608-7719 上海：021-61263966 天津：400-633-6606 广州：020-85593520 成都：028-86612625 沈阳：024-22943513 重庆：023-62568657 石家庄：0311-66686220 济南：136-2642-4277 青岛：131-5685-9195 西安：158-0293-5126 哈尔滨：180-4537-3042 Time (min) 10种α-羟基酸标准溶液(200 mg/L)色谱图 峰号 名称 保留时间min 峰面积 pV*s 峰高pV 理论塔板数N USP 拖尾因子 分离度 1 葡糖醛酸 4.35 39186 8403 15028.64 1.268 -- 2 酒石酸 4.628 69974 14283 15763.73 1.077 1.92 3 羟基乙酸 5.025 38090 7841 19234.87 1.136 2.715 4 苹果酸 5.681 67856 11982 17745.07 1.113 4.163 5 乳酸 6.96 36770 5833 21804.78 1.082 7.12 6 柠檬酸 7.781 62726 10409 33065.9 1.31 4.567 7 2-羟基丁酸 11.973 45640 4578 27433.17 1.185 18.212 8 扁桃酸 19.859 50102 10679 311846.2 1.249 36.561 9 二苯乙醇酸 23.243 107893 15593 215445.2 1.221 19.755 10 羟基辛酸 25.541 32204 3403 160015 1.136 10.087 Time (min) 10种α-羟基酸标准溶液(100 mg/L)色谱图 峰号 名称 保留时间 min 峰面积 pV*s 峰高 uV 理论塔板数N USP拖尾因子 分离度 1 葡糖醛酸 4.353 20333 4291 15227.57 1.292 2 酒石酸 4.63 34697 7140 16413.05 0.982 1.938 3 羟基乙酸 5.027 18007 3827 19996.9 1.204 2.764 4 苹果酸 5.686 34685 5998 17996.49 1.116 4.23 5 乳酸 6.966 19070 2924 21399.38 1.031 7.11 6 柠檬酸 7.796 30494 5192 32173.99 1.313 4.558 7 2-羟基丁酸 11.996 24186 2339 25347.71 1.127 17.675 8 扁桃酸 19.878 24579 5380 308724.3 1.189 35.465 9 二苯乙醇酸 23.245 53416 7931 220822.1 1.089 19.753 10 羟基辛酸 25.543 16460 1715 145488.7 1.245 9.868 R^2=0.9998 标准曲线浓度分别为： 标准曲线浓度分别为： 100mg/L、200mg/L、400mg/L、800mg/L、2000mg/L 50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、1000mg/L R^2=0.9999 R^2=0.9999 标准曲线浓度分别为： 标准曲线浓度分别为： 100mg/L、200mg/L、400mg/L、800mg/L、2000mg/L 100mg/L、200mg/L、400mg/L、800mg/L、2000mg/L R^2=0.9999 R^2=0.9999 标准曲线浓度分别为： 标准曲线浓度分别为： 125mg/L、250mg/L、500mg/L、1000mg/L、2500mg/L 100mg/L、200mg/L、400mg/L、800mg/L、2000mg/L ( 广州 ：020-85593520 石家庄 ： 0 311-66686220哈尔滨：18 0 -4537-3042 ) Area 标准曲线浓度分别为： 125mg/L、250mg/L、500mg/L、1000mg/L、2500mg/L 2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L 添加水平为 30mg/kg(以葡糖醛酸计)的化妆品中10种α-羟基酸检测液相色谱图 ( 广州 ：020-85593520 石家庄 ： 0 311-66686220哈尔滨：18 0 -4537-3042 ) 化妆品中10种α-羟基酸检测(空白)液相色谱图 相关产品信息 货号 名称 规格 色谱柱 99406 Diamonsil Plus C18-A 极性改性反相色谱柱 250x4.6 mm， 5 pm HPLC级溶剂 50102 甲醇 HPLC级 4L 50133 磷酸 HPLC级 50 mL 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色(现货) 50孔 52401A 瓶架/白色(现货) 50 孔 1034 样品瓶(棕色/螺纹) 2mL， 100/pk 1035 样品瓶盖/含垫(已经组装) 100/pk H80465 液相进样针，平头 25 pL 红色产品货号#1034、#1035火热促销中 ( 广州 ：020-85593520 石家庄 ： 0 311-66686220哈尔滨：18 0 -4537-3042 ) 上海：阳：岛：津：庆：安：京：都：南： α-羟基酸是指在α位有羟基的羧酸, 是一组弱的吸湿性有机酸, 可迅速被吸收，具有较好的保湿作用；其浓度高时可引起角质脱落和角质溶解, 对皮肤干燥、细微皱纹、斑点有显著的改善作用, 可使皮肤变得光滑、柔软、富有弹性, 现在已广泛用于化妆品中。迪马科技参考新版检测方法，采用Diamonsil Plus 5μm C18-A 色谱柱，对10种α-羟基酸进行分离，色谱分离度高，线性良好，可供广大分析工作者参考。