牛奶中四环素类检测方案(旋涡混合器)

兽残篇www.biocomma.cn55 牛奶中四环素类药物检测的固相萃取方法(Copure@ HLB) 《GB/T21317-2007动物源性食品中四环素类兽药残留量高效液相色谱法》 一、样品提取 称取混匀牛奶试样5.00g(精确到0.01 g)，置于50 mL离心管中，用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至50 mL， 涡旋混合1 min， 冰水浴超声10 min， 转移至50 mL离心管中，冷却至0℃-4℃，5000 r/min 离心10 min(温度低于15℃)，用快速滤纸过滤待净化。 二、SPE柱净化 (CopureHLB， 60 mg/3mL) 活化： HLB柱依次用5mL甲醇和5mL水活化。 上样和洗脱：准确吸取10 mL备用液过 HLB 固相萃取柱，待样液全部流出后，依次用5mL水和5mL甲醇/水溶液(1：9，v/v)淋洗，弃去全部流出液。2.0 kPa 以下减压抽干5 min， 最后用10 mL甲醇/乙酸乙酯溶液(5：95， v/v)洗脱，收集洗脱液。 重新溶解：洗脱液于40℃氮气吹干，加1.0 mL， 10 mmol/L三氟乙酸水溶液溶解残余物，水系滤膜过滤，供高效液相色谱测定。 三、仪器条件 设备： Waters Alliance 2695 色谱柱： XB-C18(4.6 mm×250 mm， 5 Hm) 检测器： Waters 2487紫外检测器 检测波长：350nm 流动相：A：乙腈 B： 10 mmol/L三氟乙酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 表1流动相梯度洗脱程序 时间/min A(%) B(%) 4.0 96.0 8.0 30.0 70.0 18.0 35.0 65.0 20.0 4.0 96.0 28.0 4.0 96.0 订购信息 流速：1.0 mL/min 进样体积：20L 四、实验结果 表220.8 mg/kg牛奶基质中四环素的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 土霉素 81.2 80.1 80.2 80.5 1.4 四环素 79.5 80.9 80.5 80.3 1.8 金霉素 95.8 98.1 95.1 96.3 1.6 强力霉素 84.3 89.5 84.4 86.0 3.5 表3W品牌0.8 mg/kg 牛奶基质中四环素的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) 1 土霉素 82.5 83.6 83.1 四环素 84.5 85.4 85.0 金霉素 95.4 96.0 95.7 强力霉素 84.8 87.3 86.1 分钟 图1添加水平为0.8 mg/kg 牛奶基质中四环素检测色谱图 货号 描述 包装 COHLB360 Copure@ HLB 固相萃取柱， 60 mg/3 mL 50支/盒 SF130-22-PTFE-HL 聚四氟乙烯针式过滤器，滤13 mm/0.22 Hm/水系 100个/盒 MF047-45-MCE MCE/中47 mm/0.45 Hm/水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/D47 mm/0.45Hm/有机系 200片/盒 V2-AL 2mL棕色短螺纹广口样品瓶，带书写处 100个/盒 SC2-5 2 mL 蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 100个/盒 SPEMF12G 12位固相萃取负压装置，玻璃缸体 1个/盒 一、样品提取 称取混匀牛奶试样5.00 g(精确到0.01 g)，置于50 mL离心管中， 用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至 50 mL，涡 旋混合 1 min，冰水浴超声 10 min，转移至 50 mL 离心管中， 冷却至 0℃ -4℃，5000 r/min 离心 10 min( 温度低于 15℃ )， 用快速滤纸过滤待净化。二、SPE 柱净化（Copure® HLB，60 mg/3 mL） 活化：HLB 柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 上样和洗脱：准确吸取 10 mL 备用液过 HLB 固相萃取柱， 待样液全部流出后，依次用 5 mL 水和 5 mL 甲醇 / 水溶液 （1:9, v/v）淋洗，弃去全部流出液。2.0 kPa 以下减压抽 干 5 min，最后用 10 mL 甲醇 / 乙酸乙酯溶液 (5:95, v/v) 洗脱，收集洗脱液。 重新溶解：洗脱液于 40℃氮气吹干，加 1.0 mL，10 mmol/ L 三氟乙酸水溶液溶解残余物，水系滤膜过滤，供高效液相 色谱测定。三、仪器条件 设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2487 紫外检测器 检测波长：350 nm 流动相：A：乙腈   B：10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 表 1 流动相梯度洗脱程序柱温：室温 流速：1.0 mL/min 进样体积：20 µL 四、实验结果 表 2 0.8 mg/kg 牛奶基质中四环素的添加回收结果