预混饲料中维生素B检测方案(液相色谱仪)

IGASSINEO新仪D-009-202109 高效液相色谱法检测预混饲料中维生素B，，的含量 维生素B1是一种常见的水溶性的维生素，参与机体内辅酶的形成，并且不能自行合成，必须要从外界获取。 维生素 B1 适用于维生素B1缺乏症，具有维持正常糖代谢及神经传导的功能，也用于消化不良、神经炎等的辅助治疗，对于机体的生理功能、新陈代谢有着非常重要的作用。 维生素作为各种关键酶部分，畜禽缺乏时，易产生碳水化合物代谢障碍，食欲减退，生长迟缓，消化道疾病及繁殖障碍等症状。 因此，在饲料中添加维生素B1能够有效的预防动物在生长发育过程中出现的上述症状。然而预混饲料中维生素B1含量的检测需要一个科学的实验方法，本次实验使用悟空 Wooking K2025高效液相色谱仪对其进行检测。 实验部分 高效液相色谱法测定 预混饲料中维生素B1的含量 仪器与试剂 仪器与设备： 悟空 Wooking K2025高效液相色谱仪，分析天平(精确到 0.0001g)， 容量瓶(10、100、1000mL，带刻度)，涡旋振荡器等； 悟空 Wooking K2025高效液相色谱仪 试剂与材料： 符合GB/T6682的一级水；甲醇(色谱级)；冰乙酸(优级纯)；三乙胺(分析纯)；庚烷磺酸钠(优级纯)；二水合乙二胺四乙酸二钠(优级纯)；酸性乙醇溶液；维生素B1(硝酸硫胺素，纯度大于99%)。 实验方法 样品前处理： 称取试样0.25 g~0.5 g(精确到0.0001 g)，置于100 mL棕色容量瓶中，加入提取液约70 mL，边加边摇匀，置于超声水浴中超声提取 15 min， 期间摇动2次，冷却，用提取液定容至刻度，摇匀。取少量溶液于离心机上8000 r/min离心5 min ， 上清液过 0.45um微孔滤膜，待上机测定。 色谱条件 ①色谱普：C184.6×250mm， 5um或者相当的色谱柱； ②流动相：称取庚烷磺酸钠1.1g、EDTA 50mg于1000 mL容量瓶中，加入约1000mL水，同时加入25 mL冰乙酸、约10mL三乙胺，超声使固体溶解，用pH计调节溶液 pH为3.7，过0.45um滤膜 ， 取800mL该溶液，与200 mL甲醇混合； ③柱温：25℃； ④进样量：20pL； ⑤流速：1.0 mL/min； ⑥波长：242nm。 结果与讨论 1、按照上述色谱条件进行采集，维生素B1标准溶液的色谱图1如下： 7.35 Jminj 45mAL 图1维生素B1标准溶液(5ug/mL)色谱图 2、将维生素B1标准溶液逐级稀释至信噪比 S/N 为3左右，计算仪器的检出限，数据结果见表1。经计算仪器针对维生素 B1检出限为 0.089pg/mL，定量限为 0.296ug/mL。 表1灵敏度测试数据 目标物 浓度(ug/mL) 峰高 噪声 S/N LOD LOQ (mV) (mV) (ug/mL) (ug/mL) 维生素 Bi 0.1 0.230 0.068 3.382 0.089 0.296 3、将维生素B1浓度为 1ug/mL、2ug/mL、5ug/mL、10pg/mL 和 20ug/mL 的标准曲线溶液在 HPLC 上进行测定，绘制校准曲线，线性方程及相关系数见图2，曲线的相关系数为 0.9999，线性关系良好。 图2维生素B1标准溶液校准曲线 4、购买市售的预混饲料作为样品进行处理，并根据样品含量对样品进行加标回收实验。 经计算，此市售的预混饲料样品中维生素 B1 的含量为 769mg/kg，加标回收率为93%。 图3市售预混饲料样品色谱图 图4市售预混饲料加标回收实验色谱图 结果与讨论 通过对维生素B1线性、重复性、灵敏度的测试以及对市售预混饲料样品中维生素 B1的含量进行测定。结果表明，使用悟空 Wooking K2025高效液相色谱仪测定维生素B1线性关系良好，确定系数 R2为 0.9999；连续进样7针，标准品保留时间的 RSD 为 0.060%， 峰面积RSD 为 0.269%，定性、定量均有良好的重复性；仪器检出限为0.089pg/mL， 定量限为 0.296ug/mL 完全满足饲料中维生素 B1含量测定的需求。 -- -- 维生素B1是一种常见的水溶性的维生素，参与机体内辅酶的形成，并且不能自行合成，必须要从外界获取。维生素B1适用于维生素B1缺乏症，具有维持正常糖代谢及神经传导的功能，也用于消化不良、神经炎等的辅助治疗，对于机体的生理功能、新陈代谢有着非常重要的作用。维生素作为各种关键酶部分，畜禽缺乏时，易产生碳水化合物代谢障碍，食欲减退，生长迟缓，消化道疾病及繁殖障碍等症状。因此，在饲料中添加维生素B1能够有效的预防动物在生长发育过程中出现的上述症状。然而预混饲料中维生素B1含量的检测需要一个科学的实验方法，本次实验使用悟空Wooking K2025高效液相色谱仪对其进行检测。