奶粉中三聚氰胺检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RKFT-F013 解决方案 奶粉中三聚氰胺的检测 介绍 三聚氰胺 (Melamine)(化学式： C3H6N6)，俗称密胺、蛋白精， IUPAC命名为“1，3，5-三嗪-2，4，6-三氨基”，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料；其中常混合有结构类似的三聚氰酸，在摄入人体进入肾细胞后，三聚氰胺会与三聚氰酸结合形成结晶沉积，从而造成肾结石并堵塞肾小管，并有可能导致肾衰竭。2008年6月震惊全国的“三鹿事件”主要是由于食用了含有大量三聚氰胺的三鹿牌婴幼儿配方奶粉引起的。 本文参考 《GB/T 22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中第二法建立了基于睿科Fotector Plus全自动固相萃取分析奶粉中三聚氰胺的检测方法，试样用1%三氯乙酸溶液提取，使用阳离子交换固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证，内标法定量，回收率于87%-97%之间， RSD=4.7。说明该方法能满足奶粉中三聚氰胺的检测。 1.仪器与耗材 1.1仪器和耗材 睿科 Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 睿科 Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站 睿科 Auto EVA 80全自动平行浓缩仪 高效液相色谱(HPLC) Agilent 1260，质谱检测器(MS) Agilent 6410 固相萃取小柱： MCX， 60mg/3mL (RayCure，货号： RC-204-72855) 1.2试剂 取适量的三聚氰胺标准品用甲醇：水=50：50溶液稀释成浓度为1000mg/L的标准储备液，于4℃避光保存。 乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，氨水(分析纯)：含量为 25%~28% 乙酸铵溶液(10mmol/L)：准确称取0.772g乙酸铵于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀备用。 甲醇水溶液：准确量取甲醇 50mL 与水50mL，混匀后备用。 1%三氯乙酸溶液：称取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。 氨化甲醇溶液：准确量取 5mL 氨水和95mL甲醇，混匀备用。 使用睿科 Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站可实现标准品的全自动化配制，可将购买的标液(1000ug/L)通过工作站的直接稀释模式，配制成浓度为 10 mg/L的工作中间液，紧接着可通过程序设置，吸取该工作液，配制一条浓度分别为 0.05mg/L， 0. 1mg/L， 0.5mg/L， 1. 0mg/L 和 2.0mg/L 的标准工作曲线。 图-1.Auto Prep 200 液体工作站配标程序 3.样品前处理 3.1样品提取 称取1g(精精至0.01g)试样于 50mL 具塞塑料离心管中，加入4mL 1%的三氯乙酸与 1mL乙腈，超声10 min 后用 4000 r/min 离心10 min， 上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后(或者以高于10000 r/min速度离心)，重复提取一次，合并提取液，待净化。 3.2固相萃取净化条件 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 固相萃取柱 MCX (RayCure， 60 mg/3 mL) 淋洗 水、甲醇 洗脱 5%氨水甲醇 将 MCX柱子安装在仪器上，分别用5mL甲醇和5mL水，以 2mL/min 速度活化，将上述待净化液以1mL/min速度上样，用5mL水冲洗样品瓶，然后用3mL 甲醇以2 mL/min 速度淋洗固相萃取柱，用氮气吹干柱子5min。最后用6mL 氨化甲醇以1mL/min 速度洗脱，洗脱液用睿科Raykol EVA 80 全自动平行浓缩仪在50℃、1L/min的条件下吹干，残渣用 1mL 流动相溶解，过微孔滤膜后上机检测。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积(mL) 时间min 1 清洗样品通道 甲醇 1.3 2 活化 甲醇 有机废液 2 5 2.9 3 活化 水 废水 2 5 2.9 4 上样 有机废液 1 10 10.8 5 清洗样品瓶 水 废水 60 3 3.8 6 淋洗 水 废水 2 3 1.9 7 淋洗 甲醇 有机废液 2 3 1.9 8 气推 有机废液 80 30 2.2 9 清洗注射泵 5%氨化甲醇 60 3 0.4 10 洗脱 5%氨化甲醇 收集 1 6 6.5 11 气推 收集 1 2 2.4 12 气推 收集 20 5 0.8 13 结束 14 图-2. Fotector Plus 奶粉中三聚氰胺固相萃取净化方法 4.检测条件 4.1 液相色谱条件 表-2三聚氰胺液相色谱检测条件 柱子 Waters XBridge BEH HILIC 2.5um×21×50mm 流速 0.200 mL/min 流动相 A：10mM ammonium acetate B： acetonitrile 柱温 30°C 进样体积 5u L 检测器 MS/MS 6410 离子模式 ESI+ 吹扫气 11 L/min 氮气温度 350°C 簇电压 4000 雾化压力 35 psi 洗脱梯度 0-1.5 min， 5%流动相 B； 2 min-3. 5 70%流动相B，5.0-6.05%流动相 B 4.2 MRM 参数 化合物 母离子(m/z) 定量子离子(m/z) 定性子离子(m/z) 碎裂电压(v) 碰撞能量(ev) Melamine 127 85.2 68.2 100 20 Melamine-13C3 130 87 / 100 20 4.311色谱图 图-3.三聚氰胺标准品色谱图(100g/L) 5.方法可行性验证 取奶粉 1g，添加标准品(100uL， 1 ppm)进行上述样品前处理过程，实验结果如下表-2所示。回收率在87%-97%之间， RSD=4.76%(n=4)，符合回收率以及相对标准偏差的要求。 表-3加标回收率及 RSD 值 化合物 回收率(%) 平均回收率 RSD (%) S S， S Sa (%) 三聚氰胺 89.81 93.40 97.21 100.21 95.16 4.76 6.结果与讨论 相比于标准，样品提取时用1%三氯乙酸溶液提取两次，，可以提高回收率。 按照标准，固相萃取整个上样过程流速不能超过1mL/min。采用睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取仪可以设置流速，对流速进行准确控制，这是手动固相萃取无法达到的。 7.总结 采用高通量全自动固相萃取仪法，准确性、重复性、再现性均满足实验要求，能够用于《GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》对奶粉中三聚氰胺的测定。 采用睿科 Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪对样品进行检测能同井进行6个样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实验人员更迭对检测结果的影响最小化。 睿科Raykol Auto Prep 200 全自动液体工作站可实现混标、标准曲线的自动配制，全程无需人为值守，让实验人员远离有毒有害的化学物质，保护身体健康。 睿科 Raykol EVA 80 全自动平行浓缩仪处理通量高，80个样品可同时进行氮吹，实验平行性好；而且采用氮吹针自动追随液面的设计，无需手动调节氮吹针且耗气量小，省时省力。 全自动液体样品处理工作站标曲配制 全自动固相萃取仪净化 全自动平行浓缩仪 浓缩 RayKol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp.，Ltd. 网址： www.raykol.com 电话：400-885-1816 邮箱： info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知◎睿科集团股份有限公司 2021年10月版 邮箱： info@raykol.com热线：址：www.raykol.com 热线：箱： info@raykol.com网址：www.raykol.com 奶粉中三聚氰胺的检测，采用睿科全自动固相萃取仪分析奶粉中的三聚氰胺检测方法，试样用1%三氯乙酸溶液提取，使用阳离子交换固相萃取柱净化。