奶粉中三聚氰胺检测方案(固相萃取仪)

睿科全自动固相萃取仪应用文集文集编号 FD0005 采用睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取技术同时测定奶粉中三聚氰胺残留 摘要：：本文采用Fotector Plus 全自动固相萃取净化，在HPLC-MS以正离子模式下检测，建立奶粉中三聚氰胺测试的一种新方案。三聚氰胺在 0.1~10ug/L范围内均呈良好的线性关系，相关系数均大于 0.99；在10ug/Kg和100ug/Kg 2 个浓度加标水平下的平均回收率为88.2%~94.5%之间，相对标准偏差(RSD%，n=4) 为2.8~5.1之间。满足奶粉中三聚氰胺的检测需要。 1前言 三聚氰胺是一种以尿素为原料的重要的氮杂环有机化工中间体，在木材、塑料、涂料、减水剂、造纸、粘合剂、纺织、皮革、电器、医药、阻燃剂等行业中应用广泛。近年来， -些不法商人为提高食品或饲料中的氮含量，把工业用三聚氰胺添加在食品或饲料中。2008年爆发了婴幼儿因食用了含三聚氰胺的奶粉而致肾结石甚至死亡的恶性事件。卫生部等五部门颁布“2008年第25号乳制品及含乳食品中三聚氰胺临时管理限量值规定”的公布，规定：婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为 1mg/kg液态奶，(包括原料乳)、奶粉及其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值 2.5mg/kg。因此建立快速检测方法是十分必要的。 在最近二十多年里， SPE 已经成为最有用的样品前处理技术，用于色谱分析之前、选择性的样品，从而延长色谱系统的寿命，改善定性和定量。它也可将目标分析物的原始基质环境较为简单以适合后续分析的体系，从而一定程度缓解了对分析仪器的要求。 2试验部分 2.1仪器与试剂 睿科Fotector Plus 全自动固相仪，液质联用仪 Agilent 1260+Agilent 6410 ESI 三重四级杆，氮气吹干装置。MCX 固相萃取柱(Waters 60mg/3mL)， 氨水、三氯乙酸，甲醇、乙腈均为 TEDIA 的色谱纯试剂。三聚氰胺标准样品 1mg/mL。 2.2样品制备 称取1g(精确至0.01g)试样于 50 mL具塞塑料离心管中，加入8mL1%的三氯乙酸与 2mL乙腈，超声10min 后振荡，用8000r/min 离心10min，上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后(或者以高于10000r/min 速度离心)，重复提取一次，合并提取液，待净化。 2.3净化 用3mL甲醇、5mL1%三氯乙酸分别活化 MCX 固萃萃取柱，上样完成后，再用3mL1%三氯乙酸和3mL 甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液；再用一定量5%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液。浓缩至干，用20%甲醇水定容至1mL溶解残留物，经0.22um滤膜过滤后，供高效液相色谱-串联质谱测定。仪器运行程序如下： Command Solvent Dutput Push speed Volume Time Sample path wa... CH30H Wastel：1 20 5 0.3 2 Syringe washing CH30H 20 2 0.1 3 Condi ti on CH30H Wastel 1 3 3 4 Condition C2HF302 Waste2 2 5 2.5 5 Sample loading Waste2 1 10 10 6 Vials washing C2HF302 WasteZ2 60 2 0 7 Rinse C2HF302 Waste2 2 3 1.5 8 Air push Wastel 20 5 0.3 9 Rinse CH30H Waste2 2 3 1.5 10 Air push Waste2 20 5 0.3 11 Dry 5 2 Syringe washing 5%NH3-CH30H 20 3 0.2 13 Elute 5%NH3-CH30H Wastel 1 6 6 14 End 2.4检出限、精密度、回收率 为了消除因基质而带来的离子抑制对定量测定的影响，需用空白样品提取液来配制所使用的一系列标准工作溶液，绘制标准曲线进行定量。7种麻醉剂在低浓度范围5-200ug/L线性良好，可以满足定量分析的需要。在空白鱼肉样品中添加不同含量的2个水平7种麻醉剂的混合标准溶液，按照2.3步骤进行加标回收率实验。每个添加浓度平行重复4次操作，测定精密度，结果见表1，三聚氰胺 MRM 图谱见图1。 图1三聚氰胺标准品的 MRM 图谱 (0.2mg/L) 表1三聚氰胺回收率/% 名称 加标水平 平均回收 RSD%/ /Hg.L 率/% (n=4) 三聚 10 88.2 5.1 氰胺 100 94.5 2.8 3结论 3.1按照标准，固相萃取整个过程流速不能超过 1mL/min，可以对洗脱流速进行适当的优化，可以适当的节省时间。 3.2用三氯乙酸提取进行提取时，用少量1%三氯乙酸的重复提取一次，可以提高回收率。 3.3 Fotector Plus能够自动的完成整个固相萃取流程，从活化到上样，清洗样品瓶，洗脱。 3.4 Fotector Plus 采用全自动操作，固相萃取过程中可以排除操作带来的误差，能够获得手动固相萃取无法达到的 RSD 水平。