粮油中特丁硫磷残留检测方案(浓缩仪)

Raykol Applications Collection-RKFT-F010 全自动固相萃取-气相色谱/质谱联用测定粮油中多种农药以及相关化学品残留 1.介绍 使用乙腈进行加速溶剂提取，经盐析、离心后，取上清液，经石墨化碳黑与氨基柱串接固相萃取净化，用甲苯+乙腈(1+3)洗脱农药以及相关化学品，洗脱后经过溶剂交换，供 GC/MS 检测，以环氧七氯为内标，采用内标法定量，涵盖大麦、小麦和大米等基质；对于相关各项目定量限如下表所示，该方法各项目符合各个国家标准中残留限量的要求。 本应用文章参考 GB 23200.9-2016《食品安全国家标准粮谷中475种农药及相关化学品残留量测定气相色谱-质谱法》，采用C18及 GCB/NH柱进行净化气相色谱/质谱联用技术检测，建立了复杂粮油样品基质中对多种农残方案快速有效前处理和检测分析方法。 关键字：全自动固相萃取； GC-MS；农残 2.仪器、试剂以及耗材Raykol Fotector Plus 全自动固相萃取仪气相色谱/质谱联用仪 Agilent 7890A+5975C氮气吹干装置：Raykol AutoEVA-60全自动平行浓缩仪Raykol Auto Prep 200 全自动液体样品处理工 作站 气相色谱柱：DB-1701 30 mx0.25 mmx0.25 um GCB/NH2 固相萃取柱(500mg/500mg， 6mLCNWBOND) C18固相萃取柱(500mg/6 mL CNWBOND) 3. 样品提取与前处理 3.1样品提取 3.2第一次净化 称10g制备好的样品与10g硅藻土混合(精确至0.01g)，移入快速溶剂萃取仪34 mL 萃取斧中，在10Mpa， 80℃条件下加热5 min， 用乙腈静态萃取3 min， 循环2次，使用60%萃取罐体积的乙腈淋洗，氮气吹干100 s， 取萃取液1/2或者1/4(根据含油多少)待净化。 将C18柱安装在 Fotector Plus 上，活化：约10mL 乙腈，，上样：将待净化的乙腈提取液转移到固相萃取柱上，淋洗：15 mL 乙腈淋洗收集所有流出液，具体步骤见图-1所示。采用AutoEVA-60全自动浓缩仪将上述收集液氮吹浓缩至1mL左右。 No Step Source Output Flowrate(mL/min) Volume(mL) Time(min) 1 Rinse Sample Path C2H3N 60 5 1.5 2 Condition C2H3N Wastel 5 10 2.6 3 Load Sample Collect 3 15 6.1 4 Rinse C2H3N Collect 3 15 5.7 5 Air Push Wastel 20 10 1.3 6 End Tube Max 50.0 Tube Rack Type Tube Rack(Low Volume(ml) Solvent Concentrated ACN 20.0 Volume(ml) Gas Pressure(psi) 4.2 Concentrated 50.0 Temperature(℃) Needle Follow 1.3 Needle Revise 70 Speed (mm/min) Param(mm) Concentrated 60.0 Operating Mode Countdown Co Time (min) 图-1.第一次净化固相萃取步骤 图-2.浓缩仪氮吹步骤 3.3 第二次净化 将GCB/NHz柱接在固相萃取装置上，加入约2 cm无水硫酸钠于柱上方，下接收集管。 活化：约4mL乙乙+甲苯(3+1)；上样：将浓缩液转移至固相萃取柱上方；以6mL 乙腈+甲苯(3+1)分三次清洗鸡心瓶后转移到固相萃取柱上 洗涤串联柱：25mL乙腈+甲苯(3+1)。 40℃水浴温度下，将收集液旋转浓缩至 0.5mL，详细过程请见下图-3。根据样品基质的复杂程度，如果样品较干净可以将洗脱的流速适当增大，但不建议超过 3 mL/min。将浓缩液转移至氮吹管中，用5mL正己烷分三次洗涤鸡心瓶，合并，40℃氮吹吹至 0.5mL， 再加入5mL正己烷转溶，氮吹至体积小于 1 mL， 添加 40 uL内标液，混匀，供 GC/MS 检 测。! 固萃萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科Fotector Plus/Fotector 02HT 固相萃取柱 C18 & GCB/NH固相萃取柱 淋洗 乙腈：甲苯(v： v，3：1) 洗脱 乙腈：甲苯(v： v，3：1) No Step Source Output Flow rate(mL/min) Volume(mL) Time(min) 1 Rinse Syringe C2H3N+C7H8(3：1) 30 3 0.5 2 Rinse Sample Path C2H3N 60 3 1.3 3 Condition C2H3N+C7H8(3：1) Waste1 5 5 1.4 4 Load Sample Collect 1 3 3.5 5 Rinse Sample Tubes C2H3N+C7H8(3：1) Collect 60 5 5.9 6 Rinse Sample Tubes C2H3N+C7H8(3：1) Collect 60 5 5.9 7 Rinse Sample Tubes C2H3N+C7H8(3：1) Collect 60 5 5.9 8 Rinse C2H3N+C7H8(3：1) Collect 1 10 10.5 9 Air Push Waste1 30 10 1.1 10 End 图-3. Fotector Plus 第二步净化详细步骤 4.1色谱条件 进样量：1uL；进样口温度：280℃；进样模式：不分流进样 分流出口吹扫流量：60 mL/min， 0.75 min分流出口打开；隔垫吹扫流量：3mL/min； 载气节节模式：20mL/min， 等待时间2 min；载气：氦气流速=1.0 mL/min 进样量：1uL。 升温程序：初温40℃保持 1 min， 以 30C/min升温到130℃保持1 min，， 再以5C/min 升温到250℃， 再以10℃/min 升到300℃，保持5 min。 4.2质谱条件 离子源温度：230℃，质量分析器温度：150℃，辅助加热：280℃ 采集方式：选择离子监测模式(SIM)；电子倍增器电压：相对电压200V， 总电压1671V 各组分保留时间以及定量、定性离子如表-1所示： 标准品配置采用 Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站进行配置。 表-1.78种农药的定性定量离子及保留时间表 名称 分组 检出限 混标浓度 RT. 定量离子 定性离子 甲拌磷五氯硝基苯 二嗪磷 地虫硫磷艾氏剂 乙烯菌核利 β-六六六 AAAAAAA 0.0063 0.01250.00630.00630.01250.0063 0.0063 2.552.52.552.52.5 15.4616.7517.1417.3119.6720.2920.31 260295304246263285 219 121/231/153 237/249 179/137 137/174/202265/293/329 212/198 217/181/254 4.3 定性及定量分析 待测样品中，检出的色谱峰保留时间与标准图谱相一致；进行背景扣除后，定量离子、定性离子都出现；定量离子与定性离子的比值需要与标准品中的比值保持一致，如果样品定量离子的相对丰度为标准品的50%以上，允许±10%偏差；相对丰度 为20~50%，允许±15%偏差；相对丰度为10~20%，允许±20%偏差；相对丰度为小于10%，允许±50%偏差； 如果不能确证，将样品进行 GC/MS/MS上进行MRM测试进行确认。 5.1基质效应验证 取空白样品，按照上述的步骤进行样品处理后，加入标准使用液，定容成1mL，供GC/MS-MS检测，工作曲线计算。如果基质加标浓度准确，则可以直接用标准曲线对样品进行定量；如果不准确，请使用基质加标做曲线进行定量。 选择定量离子的峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，做相关曲线，曲线为线性回归，各点权重相等，拟合出工作曲线，要求 R²>0.99；此曲线两 周需要重新配置一次。 5.2基质加标回收实验 以大米为基质样品，进行样品基质加标回收实验，添加高浓度样品、中浓度样品、低浓度样品进行固相萃取净化，测试其回收率及精确度(n=3)详细的测试数据见下表。 高浓度加标试验回收率的相对标准偏差需要小于20%，中浓度与低浓度加标试验回收率的相对标准偏差需要小于30%。 A组化合物工作曲线范围、相关系数、回收率以及相对标准偏差 B组化合物工作曲线范围、相关系数、回收率以及相对标准偏差 灭线磷 150-1500 ≥0.99 0.03 3.09% 82.2% 90.0% 检测项目 基质标准工作曲线相关范围(ug/L) 工作曲线相关系数R 加标水平(mg/kg) 相对标准偏差 回收率 0.04 2.59% 56.3% 60.3% 0.10 1.25 69.1% 70.7% 三氯杀螨醇 100-1500 ≥0.99 0.04 7.66% 91.6% 105.6 0.08 7.77% 91.3% - 112.8% 0.2 3.53% 111.8% 122.1% 丁草胺 100-1500 ≥0.99 0.04 6.92% 94.5% - 108.3% 0.08 8.11% 82.3% - 115.3% 0.2 2.0% 113.0% 118.1% 多效唑 100-1500 ≥0.99 0.04 8.36% 87.2% - 106.2% 0.08 9.07% 87.5% - 113.7% 0.2 3.15% 114.7% 125.9% 硫丹硫酸盐 100-1500 >0.99 0.04 9.25% 92.6% 115.0% 0.08 6.30% 99.1% - 112.0% 0.2 2.32% 112.2% - 117.5% 咪鲜胺 200-3000 >0.99 0.08 6.18% 61.5% - 72.5% 0.016 4.49% 66.6% 74.2% 0.040 4.68% 100.3% - 111.4% C组化合物工作曲线范围、相关系数、回收率以及相对标准偏差 检测项目 基质标准工作曲线相关范围(ug/L) 工作曲线相关系数R² 加标水平(mg/kg) 相对标准偏差 回收率 敌敌畏 100-1000 ≥0.99 0.02 4.96% 39.5% - 45.7% 0.04 12.53% 41.5% 58.5% 0.1 6.62% 44.5% - 51.8% 仲丁威 50.0-500 ≥0.99 0.01 5.26% 85.4% - 95.5% 0.02 2.67% 80.8% 86.7% 0.05 1.93% 80.7% - 85.3% y-六六六 50.0-500 ≥0.99 0.01 4.16% 87.0% - 97.2% 0.02 2.57% 85.5% - 91.6% 0.05 1.26% 82.8% - 85.7% 嘧霉胺 50.0-500 ≥0.99 0.01 4.58% 83.6% - 93.1% 0.02 3.92% 79.9% - 89.0% 0.05 2.80% 80.1% - 87.5% 氯唑磷 100-1000 >0.99 0.02 3.84% 81.1% 88.9% 0.04 3.19% 79.1% 86.6% 0.1 2.79% 81.6% 89.1% 七氯 100-1000 ≥0.99 0.02 5.78% 72.0% 82.5% 0.04 3.63% 65.8% - 73.0% 0.1 6.41% 62.6% - 73.2% op'-DDE 50.0-500 ≥0.99 0.01 3.75% 85.9% - 94.7% 0.02 4.68% 81.2% - 92.4% 0.05 3.14% 83.7% - 92.3% D组化合物工作曲线范围、相关系数、回收率以及相对标准偏差 异丙威-1 100-1000 ≥0.99 0.02 3.94% 80.1% 89.1% 0.04 6.19% 77.1% 90.8% 0.1 4.19% 80.4% - 89.4% 异丙威-2 100-1000 ≥0.99 0.02 4.09% 77.8% - 87.7% 检测项目 基质标准工作曲线相关范围(ug/L) 工作曲线相关系数R’ 加标水平(mg/kg) 相对标准偏差 回收率 0.04 3.90% 79.4% - 89.5% 0.1 3.19% 86.2% 93.5% 抗蚜威 100-1000 >0.99 0.02 7.27% 80.6% 97.4% 0.04 1.66% 90.6% 95.4% 0.1 4.12% 89.2% - 98.4% 乙草胺 100-1000 ≥0.99 0.02 5.44% 72.9% - 83.1% 0.04 2.30% 82.8% - 88.3% 0.1 5.26% 87.0% - 97.3% 精甲霜灵 100-1000 ≥0.99 0.02 3.02% 92.3% - 99.9% 0.04 2.24% 92.7% 99.0% 0.1 2.13% 94.5% 100.0% 水胺硫磷 100-1000 ≥0.99 0.02 2.60% 91.0% 97.1% 0.04 2.50% 92.9% - 99.1% 0.1 0.63% 97.9% - 99.6% 氟虫腈 250-2500 >0.99 0.05 4.19% 65.6% - 73.9% 0.1 2.52% 72.9% 78.7% 0.25 0.94% 80.3% - 82.1% 异菌脲 200-2000 ≥0.99 0.04 5.76% 77.0% 92.2% 0.08 2.73% 85.1% - 92.4% 0.2 2.25% 82.4% 86.8% E组化合物工作曲线范围、相关系数、回收率以及相对标准偏差 检测项目 基质标准工作曲线相关范围(ug/L) 工作曲线相关系数R² 加标水平(mg/kg) 相对标准偏差 回收率 炔苯酰草胺 100-1500 ≥0.99 0.04 7.49% 96.0% - 112% 0.08 3.31% 112.1% - 120.4% 0.2 4.00% 113.6% - 126.9% 精甲霜灵 100-1500 ≥0.99 0.04 3.49% 103.5% 108.2% 0.08 1.63% 112.3% 115.2% 0.2 4.28% 101.5% 113.8% 苯酰草胺 100-1500 ≥0.99 0.04 4.18% 93.0% 103.5% 0.08 4.27% 101.0% - 105.2% 0.2 3.26% 98.3% 107.6% 噻呋酰胺 200-3000 >0.99 0.08 6.14% 94.1% 108.3% 0.16 1.69% 112.5% - 117.8% 0.40 4.78% 109.1% 122.4% 虫螨腈 200-3000 >0.99 0.08 2.08% 95.1% 100.3% 0.16 2.54% 81.4% 87.5% 0.40 2.18% 104.9% 110.1% 肟菌酯 100-1500 ≥0.99 0.04 6.42% 105.5% - 119.0% 0.08 9.10% 79.8% - 107.3% 0.2 3.79% 101.6% - 109.3% 检测项目 基质标准工作曲线相关范围(ug/L) 工作曲线相关系数R’ 加标水平(mg/kg) 相对标准偏差 回收率 联苯肼酯 200-3000 ≥0.99 0.08 5.68% 93.9% 105.3% 0.16 3.90% 98.2% 115.2% 0.40 3.58% 104.2% 112.6% 吡唑醚菌酯 200-3000 >0.99 0.08 5.63% 125.0% 130% 0.16 8.62% 112.0% 125.3% 0.40 2.63% 118.7% 126.0% 6.结果与讨论 6.1 基质干扰回收率 由于粮油样品中存在的基质大多为强极性的醇类化合物，采用石墨化碳柱净化能除去大部分干扰物，但仍可能洗脱一部分杂质，因此需要考虑样品基质效应干扰，推荐进行样品基质效应确认，详细方法见步骤5.1。 6.2常见问题以及解决方案 6.2.1. 固相萃取净化步骤误差 分取不准确，前处理过程中需要准确量取以及分取乙腈的体积，不准确会造成回收率偏低或者偏高。固相萃取过程中的损失，主要体现在强极性化合物上。 不同品牌的固相萃取柱的柱效有差异，活化或者上样、洗脱过程中固相萃取柱中的溶液流干，造成固相萃取柱柱效下降；洗脱至最后约2mL的洗脱液不应该收集，因在干柱过程中大量杂质被洗脱。 固相萃取柱的柱效差或者填料量不足，造成杂质无法完全在固相萃取柱上吸附。如果柱效过高则强极性化合物有可能无法被完全洗脱而造成回收率下降；净化效果不理想固相萃取过程中上样速度过快，杂质没有完全吸附在固相萃取柱上。 7.解决方案的优势 本方法可实现粮油中多种农药以及相关化学品残留样品提取和净化前处理过程自动化，将称量好的样品及硅藻土放置于萃取罐中，萃取罐置于HPFE 中进行加压流体萃取，其快速的萃取以及萃取效果使实验效率有效地提升；经HPFE萃取完的萃取液通过 Fotector Plus 全自动固相萃取仪对其进 6.2.2浓缩过程中损失 目标化合物多为半挥发性有机物，过快或者过于剧烈的浓缩会造成目标化合物气化，主要原因为旋转蒸发过程转速过高，没有选择合适容积的鸡心瓶(样品的体积不能超过鸡心瓶容量的1/2)；氮吹时气流量过大，样品吹溅起后沾在液面上方的瓶壁上，.气化进行空气被氮气流带走；转溶不彻底，目标化合物在不同定容液中的响应值存在差异，而在正己烷中的响应值最高，因此转溶不彻底则有可能会影响样品的响应。 6.2.3基质的影响 基质会对化合物进行增强或者抑制， 般情况下需要做同种基质的基质加标，如果样品种类较杂，则需要选取有代表性的作为基质加标测试。 6.3检测仪器常见问题 没有使用新的进样瓶垫片，造成后续样品的体积越来越小，浓度增高，主要表现在质控样的响应值越来越高，应使用新的垫片进样；噪音过大或者响应值低，保留时间重现性差、峰拖尾严重与峰宽过大。 行净化，可设置柱插杠下压高度，在固相萃取柱上方填充2cm 无水硫酸钠，其精准控速使得仪器可实现多种农药净化要求，确保完成净化效果；洗脱液通过 Auto EVA-60 平行浓缩仪进行浓缩，相对于手动浓缩和其他厂家仪器来说，我们仪器可实现针随液面的高度，加快浓缩速度，节约氮气成本；多种 农药中间液、使用液、混标的配制以及替代物、内标物的添加，均可通过 Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站所内置储存的方法，精准配制多种农 药混标的标准工作曲线，轻松地解决混标配制，忘加、少加、多加的烦恼，顺利完成标准液的配制任务。 加压流体萃取仪样品提取 全自动固相萃取仪样品免疫亲和净化 全自动浓缩仪样品浓缩 全自动液体样品处理工作站标准溶液配制 邮箱： info@raykol.com热线：址：： www.raykol.com 网址：： www.raykol.com邮箱： info@raykol.com热线： 本应用文章参考GB 23200.9-2016《食品安全国家标准粮谷中475种农药及相关化学品残留量测定气相色谱-质谱法》，采用C18及GCB/NH2 柱进行净化气相色谱/质谱联用技术检测，建立了复杂粮油样品基质中对多种农残方案快速有效前处理和检测分析方法。