菜豆中灭蝇胺检测方案

分子印迹固相萃取柱净化-HPLC 法测定菜豆中的灭蝇胺 (北京普析通用仪器有限责任公司) 1.方法概述 本方法利用分子印迹固相萃取柱提取菜豆中灭蝇胺，无需旋蒸浓缩即可直接上柱净化，操作过程简单；方法 RSD 小于5%，可充分满足 NY/T1725-2009中规定不大于15%的要求。 2.适用范围 菜豆中灭蝇胺的检测。 3.仪器与试剂 3.1仪器与设备 高效液相色谱仪，配有紫外检测器；电子天平，固相萃取装置，涡旋混合器，微量移液器，离心机，氮吹仪，超声波清洗器等。 3.2试剂 灭蝇胺分子印迹固相萃取柱(40mg/3mL，京京普析通用仪器有限责任公司)，乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，乙酸(色谱纯)，灭蝇胺标准品(CAS：66215-27-8)。 4.分析步骤 4.1试样制备 按照NY/T1725-2009 制备试样。 4.2试样提取 称取2.5g(精确至0.01g)样品于50mL离心管中，加入17.5mL乙腈溶液，充分混匀，漩涡震荡5min，超声提取 5min。离心机10000r/min 离心 8min， 转移全部溶液用乙腈定容到20mL。再移取定容溶液 3mL 用乙腈定容到9mL，待净化。 4.3净化 预淋洗：：乙酸：甲醇(1：9) 3mL 预淋洗。 活化：3mL甲醇活化 平衡：：3.2mL水平衡，保证水未流干。 上样： 将上述待净化的溶液取6mL上柱 淋洗：3mL乙青淋洗，完全抽干。 洗脱：用3mL的乙酸：甲醇(1：9)洗脱固相萃取柱，彻底抽干，收集洗脱液，40℃N，吹干，乙腈-水溶液(97+3，体积比)复溶。旋涡震荡 1min， 1min 超声混匀。将溶液用0.2um 有机相滤膜过滤后供液相色谱测定。 注：上上样和洗脱时流速不易太快不超过0.5mL/min， 大约5~10s一滴。 4.4标准曲线制作 标准物质储备液(10儿g/mL)：根据标准物质储备液的含量，精确移取标准物质储备液，并用乙腈定容，标准物质的浓度均为 10 ug/mL。此溶液置于-4℃下冷藏。 标准物质中间液(1g/mL)：移取 10ug/mL 混合标准物质储备液1mL于10mL容量瓶中，用乙腈-水溶液(97+3，体积比)至刻度，摇匀，得到 1ug/mL溶液，备用。 分别准确移取混合标准物质中间液(1ug/mL)适量，乙腈-水溶液(97+3，体积比)至刻度稀释得到以下浓度的标准工作液(见表1)，备用。 表1 标准工作液浓度 序号 1 2 3 4 5 工作液浓度 ng/mL 50 100 200 300 400 混合标准物质中间液(1000ng/mL)体积L 950 900 800 700 600 定容体积 mL 1 4.5测定条件 液相仪器条件 色谱柱： NH2不锈钢柱(250mm×4.6mm， 5Hm) 柱温：：35℃ 进样量：25mL 检测波长：215nm 流动相：乙腈：水(97：3) 总流速：1mL/min 5.结果与分析 5.1标准曲线线性及相关系数 实验的线性及相关系数见图1. 图1 线性及相关系数 5.2检出限 按照 NY/T1725-2009 中的检出限为 0.02mg/kg 做菜豆中的加标实验，加标值为 0.02mg/kg， 稀释倍数为10倍，最终检出限为5ng/mL。 5.3精密度 对菜豆的平行样连续测定7次，用相对标准偏差表示，结果试验数据见表2。 表2方法精密度数据表 样品编号 1 2 3 4 5 6 7 检测结果 ng/mL 104.275 102.88 105.966 101.328 108.035 105.924 108.751 此方法精密度为2.54%。小于15%，满足NY/T1725-2009中规定不大于15%。 5.4回收率 菜豆中灭蝇胺检测加标回收率见表3。 表3菜豆中灭蝇胺回收率 样品名称 化合物名称 添加浓度(mg/kg) 取样量(g) 实测值 (mg/kg) 回收率 % 菜豆 灭蝇胺 0.5 2.5 1.04 84.55 0.5 1.03 83.42 0.5 1.06 82.30 0.5 1.01 84.77 0.5 1.08 81.06 0.5 1.06 86.43 0.5 1.09 84.74 由表可知，菜豆中灭蝇胺检测回收率在 81.06%—86.43%之间。 本方法利用分子印迹固相萃取柱提取菜豆中灭蝇胺，无需旋蒸浓缩即可直接 上柱净化，操作过程简单；方法 RSD 小于 5%，可充分满足 NY/T1725-2009 中规 定不大于 15%的要求。