本文通过赛默飞Trace 1300系列气相色谱仪器,在国标GB/T5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》的基础上建立了快速检测方法。使37种脂肪酸甲酯的分离在40min内完成,且保证37种化合物的分离度均大于1.25,满足国标需求。运用本方法对食品中脂肪酸甲酯的分析,有效提高了分析速度。最终确认了50M的TG-FAME色谱柱满足实验需求。并在MS上对各组分进行了初步定性。
thermoscientific 快速分析脂肪酸甲酯的应用 孙薇,金琦芸,赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 脂肪酸甲酯,快速,分离度 摘要 2.实验部分 本文通过赛默飞Trace 1300系列气相色谱仪器,在国标GB/T5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》的基础上建立了快速检测方法。使37种脂肪酸甲酯的分离在40min内完成,且保证37种化合物的分离度均大于1.25,满足国标需求。运用本方法对食品中脂肪酸甲酯的分析,有效提高了分析速度。最终确认了50M的TG-FAME色谱柱满足实验需求。并在MS上对各组分进行了初步定性。 2.1仪器与试剂 2.1.1 Thermo Fisher Trace1300气相色谱仪 2.1.2 Thermo Fisher ISQ质谱仪 2.1.3二氯甲烷(色谱纯,美国Thermo Fisher公司); 2.1.437种脂肪酸甲酯混合标准品购自SIGM-ALDRICH公司 2.2化合物信息及溶液配制 1.引言 脂肪作为人体的三大供能营养素之一,对人体有许多重要的生理作用。油脂中90%以上是脂肪酸,而脂肪酸又分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。多不饱和脂肪酸中含有的n-6和n-3脂肪酸属必需脂肪酸,是人体无法合成而必须从食物中获取的。2016年发布国标GB/T 5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》,规定了脂肪酸的检测方法,本方法依据并改进了该标准方法对食品中的脂肪酸进行了测定。 表一37种脂肪酸甲酯信息: ( 注: 上 表来源于Sigma-Aldrich公司标准品附带的COA报告。 ) 2.2.2储备液:精确称取37种脂肪酸甲酯混合标准品适量(总浓度10000ppm),,二氯甲烷溶解,配制储备液总浓度为 1000pg/mL,具体单个组分浓度详见上表。 2.2.3样品溶液:取食用由样品适量,移入到250mL平底烧瓶中,加入约100 mg 焦性没食子酸,加入几粒沸石,再加入2mL95%乙醇和4mL水,混匀。加入2%氢氧化钠甲醇溶液8mL,连接回流冷凝器,80℃水浴上回流,直至油滴消失。从回流冷凝器上端加入7mL15%三氟化硼甲醇溶液,在80℃水浴中继续回流2min。用少量水冲洗回流冷凝器。停止加热,从水浴上取下烧瓶,迅速冷却至室温。准确加入15 mL二氯甲烷,振摇2 min,再加入饱和氯化钠水溶液,静置分层。吸取上层二氯甲烷提取溶液大约5mL, 至25mL试管中,加入大约5g无水硫酸钠,振摇1min, 静置5min, 吸取上层溶液到进样瓶。 2.3色谱条件 2.3.150M色谱柱条件 色谱柱: TG-FAME (50mx0.25mm, 0.25pm) (P/N:26054-5920) 载气 Nitrogen 分流比 100:1 柱流速 0.63 mL/min 升温程序 80℃(保持1min),以20℃/min速率升高到160℃ (保持1.5min), 再以3℃/min的速率升高到250℃ (保持3min) 进样口温度 270°C 检测器类型 FID 检测器温度 280C 空气流量 300 mL/min 氢气流量 30ml/min 尾吹 40ml/min 3.实验结果与讨论 3.1实验结果 3.1.1标准品检测结果 采用上述仪器分析方法,使用TG-FAME 50m色谱柱分析37种脂肪酸甲酯,在39.5分钟内均可获得良好的色谱峰,且分离度大于国标要求的1.25。图1为混标测试图谱。 图1.37种脂肪酸甲酯混标在50m色谱柱上的测试图谱 3.1.2样品检测结果 在相同仪器分析条件下,甲酯化后的食用油样品中脂肪酸甲酯与基质分离效果良好,峰形尖锐对称,且分离度大于国标要求的1.25。图2为样品测试图谱。 图2.样品在50m色谱柱上的测试图谱 表3:食用油样品的检测结果: 峰顺序 目标物 出峰时间min 1 C16:0 15.043 2 C16:1[cis-91 16.123 3 C17:1[cis-10] 17.650 4 C18:0 17.968 5 C18:1[cis-9] 18.998 6 C18:2[cis-9,12] 20.563 7 C18:3[cis-9,12,15] 22.398 8 C23:0 25.922 3.1.3MS定性分析: 重复上面方法条件,载气为He气,扫描范围50-350,传输线260℃,离子源280℃。从全扫图上看,总浓度为1000ppm的标准品,仅分析出36个峰,重复试验,均为36个峰。如图3所示: 图3.37种脂肪酸甲酯混标在MS上TIC图 对比氮气的分析图,发现34号峰后面的位置峰丢失(图3红圈内位置)。由于脂肪酸甲酯提取离子比较相似,无法直接提取出丢失的目标物。调整方法为恒压模式,柱头压为100kPa,其他条件不变,在推测的丢失位置出现目标峰,如图4所示: 图4.恒压模式下37种脂肪酸甲酯混标TIC图 对37种物质进行NIST谱库对比,对应处相应化合物,出峰顺序如下: 表4.化合物出峰顺序 峰顺序目标物 出峰时间min 标准品浓度 (He做载气) ug/ml 1 C4:0 4.19 40.4 2 C6:0 5.12 40.4 3 C8:0 6.43 40.4 4 C10:0 7.69 40.8 5 C11:0 8.43 20.4 6 C12:0 9.22 40.4 7 C13:0 10.11 20.3 8 C14:0 11.12 40.4 9 C14:1[cis-9] 12.07 20.4 10 C15:0 12.24 20.3 11 C15:1[cis-101 13.33 20.4 12 C16:0 13.51 61.2 13 C16:1[cis-9] 14.51 20.4 14 C17:0 14.90 21.0 15 C17:1[cis-10L 15.98 20.4 16 C18:0 16.39 40.8 17 C18:1 trans-9] 11.70 20.2 18 C18:1| [cis-91 17.40 40.4 19 C18:2[trans-9,12] 18.26 20.2 热线8008105118 www.thermofisher.com ( 仅用于研究目的。不可用于 诊 断目的。 ◎2019 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留 所 有权利。所有商标均为Thermo Fisher Scientifi c Inc. 及其子公司的资产,除 非 另有指明。 ) 峰顺序 E目标物 出峰时间min 标准品浓度 (He做载气) ug/ml 20 C18:2[cis-9,12] 18.96 20.2 21 C20:0 19.62 40.8 22 C18:3[cis-6,9,12] 20.14 20.3 23 C20:1[cis-111 20.67 20.2 24 C18:3cis-9,12,15] 20.81 20.4 25 C21:0 21.92 20.3 26 C20:2[cis-11,14] 22.31 20.4 27 C22:0 22.98 40.5 28 C20:3[cis-8,11,14] 23.50 20.4 29 C22:1|cis-13 24.04 20.4 30 C20:3[cis-11,14,17] 24.19 20.4 31 C23:0 24.42 20.3 32 C20:4cis-5,8,11,14| 24.67 20.2 33 C22:2[cis-13,16] 25.68 20.4 34 C24:0 26.34 40.4 35 Methyl cis-5,8,11,14,17- 26.40 20.4 eicosapentaenoate 36 C24:1[cis-15] 27.38 20.4 37 Methyl cis-4,7,10,13,16-docosahexenoate 30.77 20.3 注:此表出峰时间是以恒压模式运行,仅供出峰顺序定位。在恒流模式下保留时间略有不同。 3.2讨论 在国标中,100m色谱柱对化合物的分离效果良好,但分析时间较长,通常在60-80min之间,选择50m的TG-FAME色谱柱,在保证分离的同时,缩短分析时间在39.5min以内,实现了分析速度的提升。TG-FAME为脂肪酸甲酯分析专用柱,可以有效提高分析速度的同时保证分离效果,是快速分析37种脂肪酸甲酯的最佳选择。 ( 色谱柱信息: ) 货号 色谱柱描述26054-5920TG-FAME色谱柱, 50mx0.25mm,0.25um 参考文献: Separation of 37 Fatty Acid Methyl Esters Utilizing aHigh-Efficiency 10m Capillary GC Column with Optimization in ThreeCarrier Gases S CIENTIFIC SCIENTIFIC 口赛默飞口 官方微信电话 在国标中,100m色谱柱对化合物的分离效果良好,但分析时间较长,通常在60-80min之间,选择50m的TG-FAME色谱柱,在保证分离的同时,缩短分析时间在39.5min以内,实现了分析速度的提升。TG-FAME为脂肪酸甲酯分析专用柱,可以有效提高分析速度的同时保证分离效果,是快速分析37种脂肪酸甲酯的选择。
还剩2页未读,是否继续阅读?
赛默飞色谱与质谱为您提供《食用油中脂肪酸甲酯检测方案(气相色谱仪)》,该方案主要用于食用油脂制品中营养成分检测,参考标准--,《食用油中脂肪酸甲酯检测方案(气相色谱仪)》用到的仪器有Thermo Scientific 气相色谱仪 TRACE 1300系列、赛默飞ISQ™ 7000单四极杆GC-MS