饲料中25-羟基-VD3检测方案(液相色谱仪)

华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪二维液相色谱仪测定饲料中25-羟基-VD3 方案优势 1) 一次进样实现饲料中低浓度25-羟基-VD3的分析测定 2) 分析时间短，分析效率高 3) 灵敏度高，定量限低，可达到 ppb 级别 4) 待测物质附近无杂峰干扰 前言 维生素D对食用动物的适当补充具有重要的意义，因为它在骨骼和肌肉发育以及免疫反应调节方面都有很多益处。目前维生素D 添加剂有 VD3齐 25-羟基 VD3(25-OH-VD3)，结构式见图1。传统添加剂 VD3需要通过肠道及肝脏吸收，对于肠道疾病、肝功能损伤的禽畜来说，VD3的吸收效率较低。新型添加剂 25-OH-VD3 是VD3的代谢产物，不再需要经过肝脏的代谢，可直接进入血液循环，吸收效率高，且25-OH-VD3的效价是 VD3 的3-5倍，最终表达出的生物活性是 VD3 的 20-40倍。由于新型添加剂 25-OH-VD3的生物活性高、吸收率高、投喂效果明显、应用面广，越来越受到人们的重视。 25-0H-VD3活性高，添加量少，最低可达到 ppb 级别，且饲料基质相对复杂，，一一维液相方法对于低含量 25-OH-VD3检测相对困难。本方案采用二维液相色谱法检测饲料中的25-OH-VD3，该方法第一维对 25-OH-VD3初步净化；第二维对 25-OH-VD3进行分离分析，在 30 min 内完成饲料中低含量 25-OH-VD3 的净化和定量检测。 图1 25-OH-VD3的结构式 实验部分 样品的制备 该方法根据国标 GB/T 17818-2010 《饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法》的方 法进行优化。 取试样5g于250mL皂化瓶中，加0.5gL-抗坏血酸， 50 mL 95%乙醇溶液，20mL氢氧化钾溶液(500g/L)，混匀。86℃水浴回流 30 min， 期间不时摇动皂化瓶，防止样品黏连，皂化结束后，冷却至室温再转移；用少量水将皂化液完全转移至500 mL分液漏斗中，加100 mL无水乙醚，加盖、混合、放气，剧烈震荡 5 min， 静置分层；转移水相至另一500 mL分液漏斗中，水相中再加100 mL乙醚，剧烈震荡5min， 静置分层；弃去水相，合并两次乙醚相。再用水每次100 mL 洗涤乙醚提取液至中性。水相清洗后弃去，乙醚提取液全部转移至旋蒸瓶中，在转移过程中用无水硫酸钠脱水。旋蒸乙醚提取液，水浴温度45℃，旋蒸至近干，剩余乙醚氮气吹干，残渣用甲醇溶解，并定容至10 mL，过0.45um 滤膜，进高效液相色谱。 仪器配置与分析方法 第一维 第二维 仪器配置 Acchrom S6000 组织器 S6110 四元泵S6410紫外检测器 S6410 紫外检测器 色谱柱 Alphasil VC-C18，2.1*50 mm，5 um Alphasil XD-C18UN，4.6*150 mm，5 um 捕获柱 Alphasil VC-C18，4.6*50 mm，5 um 流动相 A：甲醇；B水 A：乙腈；B水 流速 0.2 mL/min 1.0 mLl/min 进样量 30 pL 柱温 20°℃ 检测波长 265nm 结果与讨论 1.。标准品的测定 取 25-OH-VD3标准品配制成不同浓度的标准溶液，，l以待测物峰面积为纵坐标，待测物浓度为横坐标绘制标准曲线， 25-OH-VD3 在 4-1000 ng/mL 范围内线性良好，相关系数为 0.9999。 图225-OH-VD3标准品色谱图(1ug/mL) 2. 选取 50 ug/kg、100 ug/kg 样品进行检测，每个样品做两个平行，检测图谱见图4，检测结果见表1。从图可以看出，25-OH-VD3峰与杂峰分离度较好，峰形良好；由表可得，检测结果与标签含量一致，且两次平行结果相对偏差在10%以内，说明前处理方法和液相方法适用于 25-OH-VD3的提取和检测。 图3不同浓度样品色谱图 表1 不同浓度样品含量表 浓度 含量 平均含量 相对偏差 标签含量 ug/mL) (ug/kg) (ug/kg) (%) (ug/kg) 50ug/kg-1 24.917 49.72 50.56 3.32 50 50pg/kg-2 25.829 51.40 100pg/kg-1 49.678 99.20 98.78 0.86 100 100ug/kg-2 49.612 98.35 3.定量限 当进样量为 30 uL时，标准品的定量限为 4 ng/mL。 结论 本实验采用二维液相色谱测定25-OH-VD3，使用第一根色谱柱对目标物进行初步分离，再将目标物切割进入第二根色谱柱进一步分离，不仅实现了在线净化，还减少了前处理步骤，缩短了前处理时间，提高了分析效率，在30 min 内完成 25-OH-VD3的净化和定量检测，该方法是分析饲料中 25-OH-VD3的快速有效手段。 联系我们 关注我们 www.acchrom-tech.com 华谱科仪(北京)科技有限公司 热线电话：010-8410-9313 即 邮箱： marketing@acchrom-tech.com 本解决方案采用二维液相色谱测定25-OH-VD3，使用一维色谱柱对目标物进行初步分离，再将目标物切割进入二维色谱柱进一步分离，不仅实现了在线净化，还减少了前处理步骤，缩短了前处理时间，提高了分析效率，在30 min内完成25-OH-VD3的净化和定量检测。