馒头样品中双乙酸钠检测方案

食品中双乙酸钠的测定 (GB5009.277-2016) 双乙酸钠，分子式为 C4H7NaO4，又称二乙酸钠、双醋酸钠，商品名为 Vita-crop(维他可乐波)是一种性质稳定、价格低廉的新型食品饲料防霉剂、酸味剂和改良剂，被美国食品和药品管理局定为安全物质，具有高效防霉、防腐、保鲜，提高适口性，增加营养价值，助生长等功效，现广泛应用于畜禽饲料。 双乙酸钠结构式 双乙酸钠水解产物为乙酸，属于极性化合物，《GB5009.277-2016 食品中双乙酸钠的测定方法》使用纯水相作为流动相检测乙酸含量。 因此，我们选择了两款可以耐 100%水相的反相色谱柱，CAPCELL PAK C18 AQ 和CAPCELL PAK ADME HR， 分别对乙酸标准品和馒头样品进行分析，均能得到良好的分离结果。 CAPCELL PAK C18 AQ 图1乙酸标准品在 CAPCELL PAK C18AQ 上的分析色谱图 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3；4.6mm i.d.×250mm 流速： 1.0mL/ min 温度：25℃ 检测：PDA 214nm 进样量： 20uL 浓度： 0.05mg/mL 我们用上述方法，对馒头样品进行分析时，发现基质较为复杂，有疏水性物质无法洗脱，影响后续样品检测。 因此，我们在 9-14min 加入50%乙羊对样品进行洗脱，馒头样品中乙酸峰与其前后相邻杂质分离度分别为2.94、1.98，均可达到基线分离，结果如图2所示。 图2馒头样品在 CAPCELL PAK C18 AQ 上的分析色谱图 HPLC Conditions ( 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3；4.6mm i.d.×250mm ) 流动相： A： 1.5g/L 磷酸氢二铵 (pH3.0) B：乙腈 B%0% (0min) -> 0% (8min) ->50% (9min)-> 50% (14min) -> 0% (14.1min)-> 0% (25min) 流速：1.0mL/min 温度：25℃ 检测：PDA 214nm 进样量：20uL 样品配置：准确称取2g馒头样品至100mL烧杯中，加水8mL， 加入1mol/L 磷酸溶液200uL，混匀，经超声浸提 10min 后，用磷酸调 pH至3左右，转移至20mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。15000r/min 离心10min， 取上清液，过 0.22um滤膜，即得。 CAPCELL PAK ADME-HR 为了给用户提供更多的选择，我们尝试了键合立体结构金刚烷基的CAPCELL PAK ADME HR 色谱温，将柱温调节至35℃，也能得到良好的分离结果。 图3馒头样品在 CAPCELL PAK ADME HR上的分析色谱图 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELLPAK ADME HR S5；4.6mm i.d.×250mm 流动相：A：1.5g/L 磷酸氢二铵((pH3.0) B：乙腈i) ->( (9min))-->>50%(14min)- B%0%)(0min) 0% (8min)) -> 50%6 -〉0%(14.1min) ->0% (25min) 流 速：1.0mL/min 检 测： PDA 214nm 进样量：20pL 样品配置：准确确取2g馒头样品至100mL烧杯中，加水8mL，加入1mol/L磷酸溶液 200uL，混匀，经超声浸提 10min 后，用磷酸调 pH至3左右，转移至20mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。15000r/min 离心10min， 取上清液，过 0.22um滤膜，即得。 食品中双乙酸钠的测定（GB5009.277-2016）双乙酸钠，分子式为C4H7NaO4，又称二乙酸钠、双醋酸钠，商品名为Vita-crop（维他可乐波）是一种性质稳定、价格低廉的新型食品饲料防霉剂、酸味剂和改良剂，被美国食品和药品管理局定为安全物质，具有高效防霉、防腐、保鲜，提高适口性，增加营养价值，助生长等功效，现广泛应用于畜禽饲料。双乙酸钠结构式 双乙酸钠水解产物为乙酸，属于极性化合物，《GB 5009.277-2016 食品中双乙酸钠的测定方法》使用纯水相作为流动相检测乙酸含量。 因此，我们选择了两款可以耐100%水相的反相色谱柱，CAPCELL PAK C18 AQ和CAPCELL PAK ADME HR，分别对乙酸标准品和馒头样品进行分析，均能得到良好的分离结果。 CAPCELL PAK C18 AQ图1 乙酸标准品在CAPCELL PAK C18 AQ 上的分析色谱图  HPLC Conditions色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3;4.6mm i.d.×250mm流动相：1.5g/L 磷酸氢二铵（pH3.0）流  速：1.0 mL / min温 度：25°C检 测：PDA 214 nm进样量：20 µL浓 度：0.05mg/mL 我们用上述方法，对馒头样品进行分析时，发现基质较为复杂，有疏水性物质无法洗脱，影响后续样品检测。 因此，我们在9-14min加入50%乙腈对样品进行洗脱，馒头样品中乙酸峰与其前后相邻杂质分离度分别为2.94、1.98，均可达到基线分离，结果如图2所示。 图2 馒头样品在CAPCELL PAK C18 AQ 上的分析色谱图 HPLC Conditions色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3;4.6mm i.d.×250mm流动相：A：1.5g/L 磷酸氢二铵（pH3.0）    B：乙腈B% 0%（0min）-〉0%（8min）-〉50%（9min）-〉50%（14min）-〉0%（14.1min）-〉0%（25min）流 速：1.0 mL / min温 度：25°C检 测：PDA 214 nm进样量：20 µL样品配置：准确称取2g馒头样品至100mL烧杯中，加水8mL，加入1mol/L磷酸溶液200uL，混匀，经超声浸提10min后，用磷酸调pH至3左右，转移至20mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。15000r/min离心10min，取上清液，过0.22um滤膜，即得。 CAPCELL PAK ADME-HR 为了给用户提供更多的选择，我们尝试了键合立体结构金刚烷基的CAPCELL PAK ADME HR色谱柱，将柱温调节至35℃，也能得到良好的分离结果。 图3 馒头样品在CAPCELL PAK ADME HR 上的分析色谱图  HPLC Conditions色谱柱：CAPCELL PAK ADME HR S5;4.6mm i.d.×250mm流动相：A：1.5g/L 磷酸氢二铵（pH3.0）    B：乙腈B% 0%（0min）-〉0%（8min）-〉50%（9min）-〉50%（14min）-〉0%（14.1min）-〉0%（25min）流  速：1.0 mL / min温  度：35°C检  测：PDA 214 nm进样量：20 µL样品配置：准确称取2g馒头样品至100mL烧杯中，加水8mL，加入1mol/L磷酸溶液200uL，混匀，经超声浸提10min后，用磷酸调pH至3左右，转移至20mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。15000r/min离心10min，取上清液，过0.22um滤膜，即得。