盐酸利多卡因注射剂中杂质检测方案

2020版 《中国药典》盐酸利多卡因注射剂有关物质的分析 盐酸利多卡因是局麻醉、抗心律失常药物，属于酰胺类化合物，这类物质在 C18色谱柱分析过程中容易出现拖尾的问题。 我们按照2020版 《中国药典》和EP方法，对盐酸利多卡因注射剂及其杂质2，6-二甲基苯胺、2，6-二甲基氯代乙酰苯胺进行分析，希望能够解决主成分与杂质分离效果差和拖尾的问题。 常规硅胶系色谱柱，由于受到硅胶基材表面残留硅醇基和金属杂质的影响，在分析碱性化合物时普遍易出现色谱峰拖尾的现象。 CAPCELL PAK 色谱柱凭借填料表面致密的聚合物包被来抑制硅胶基材的影响，因此能得到对称性良好的色谱峰。 我们使用经过包膜处理的 CAPCELL PAK C18 AQ S5 柱，很好地解决了盐酸利多卡因拖尾的问题；同时主峰与杂质的分离也满足要求。 2020版《中国药典》方法 系统适用性要求：盐酸利多卡因与杂质2，6-二甲基苯分离度满足要求，理论塔板数不低于2000。 按照2020 版 《中国药典》的要求，选择经过包膜处理的 CAPCELL PAK C18 AQ S5 柱，盐酸利多卡因峰形良好；同时2，6-二甲基苯胺与利多卡因分离度16.49，满足基线分离要求。 图1盐酸利多卡因与2，6-二甲基苯胺的色谱图 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5；4.6mmi.d.×250mm 流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈=50： 50 (pH8.0) 流速：1.0mL/min 温度：30℃ 检测： PDA230 nm 进井量： 20uL 浓度：盐酸利多卡因样品2mg/mL、系统适用性溶液： 50 ug/mL(溶剂为流动相) 注：磷酸盐缓冲液：1mol/L磷酸二氢钠溶液1.3mL， 0.5mol/L 磷酸二氢钠32.5mL，用水稀释至1000mL，摇匀。 EP 9.0方法 推荐色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5 目前，EP没有盐酸利多卡因注射剂的相关规定，因此我们参考了EP 中盐酸利多卡因的检测方法。 系统适用性要求：主峰(盐酸利多卡因)保留时间约为17min， 杂质A(2，6-二甲基苯胺)与主峰的相对保留时间约为0.4，杂质H(2，6-二甲基氯代乙酰苯胺)与主峰的相对保留时间约为0.37，杂质A与杂质H的分离度不小于1.5。 按照 EP 9.0的检测方法，对杂质A、H以及盐酸利多卡因混合标准品进行分析，结果如图2所示，杂质H保留时间6.098min， 杂质A保留时间 7.357min， 杂质A、H分离度为5.31，满足二者分离度大于1.5的标准要求。 图2盐酸利多卡因与杂质A、H的色谱图 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5；4.6mmi.d.×150mm 流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈=70：30 (pH8.0) 流速：1.0mL/min 温度：30℃ 检测：PDA230nm 进样量：20uL 浓度：杂质A： 0.5ug/mL、杂质H： 5ug/mL、盐酸利多卡因： 5ug/mL(溶剂为流动相) 注：磷酸盐缓冲液： 4.85g/L磷酸二氢钾溶液。 2020版《中国药典》方法 推荐色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5 系统适用性要求：盐酸利多卡因与杂质2,6-二甲基苯分离度满足要求，理论塔板数不低于2000。 按照2020版 《中国药典》的要求，选择经过包膜处理的CAPCELL PAK C18 AQ S5 柱，盐酸利多卡因峰形良好；同时2,6-二甲基苯胺与利多卡因分离度16.49，满足基线分离要求。 图1 盐酸利多卡因与2,6-二甲基苯胺的色谱图 HPLC Conditions 色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5;4.6mm i.d.×250mm流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈=50：50（pH8.0）流  速：1.0 mL / min温  度：30 °C检  测：PDA 230 nm进样量：20 µL浓  度：盐酸利多卡因样品2mg/mL、系统适用性溶液：50 µg/mL（溶剂为流动相） 注：磷酸盐缓冲液：1mol/L磷酸二氢钠溶液1.3mL，0.5mol/L磷酸二氢钠32.5 mL，用水稀释至1000 mL，摇匀。 EP 9.0方法 推荐色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5 目前，EP没有盐酸利多卡因注射剂的相关规定，因此我们参考了EP中盐酸利多卡因的检测方法。 系统适用性要求：主峰（盐酸利多卡因）保留时间约为17min，杂质A（2,6-二甲基苯胺）与主峰的相对保留时间约为0.4，杂质H（2,6-二甲基氯代乙酰苯胺）与主峰的相对保留时间约为0.37，杂质A与杂质H的分离度不小于1.5。 按照EP 9.0的检测方法，对杂质A、H以及盐酸利多卡因混合标准品进行分析，结果如图2所示，杂质H保留时间6.098min，杂质A保留时间7.357min，杂质A、H分离度为5.31，满足二者分离度大于1.5的标准要求。图2 盐酸利多卡因与杂质A、H的色谱图 HPLC Conditions 色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5;4.6mm i.d.×150mm流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈=70：30（pH8.0）流  速：1.0 mL / min温  度：30 °C检  测：PDA 230 nm进样量：20 µL浓  度：杂质A：0.5µg/mL、杂质H：5µg/mL、盐酸利多卡因：5µg/mL（溶剂为流动相） 注：磷酸盐缓冲液：4.85g/L磷酸二氢钾溶液。