帕米膦酸二钠注射液中有效成分含量检测方案(离子色谱仪)

Thermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.SCIENTIFICPart of Thermo Fisher Scientific 钟新林赛默飞世尔科技(中国)有限公司 Key words： lon chromatography； pamidronate disodium 引言 帕米膦酸二钠注射液(Pamidronate Disodium Injection ) 为帕米膦酸二钠加适量甘露醇制成的灭菌水溶液。帕米膦酸二钠是一种双膦酸类骨吸收抑制剂，临床上广泛应用于治疗骨质疏松症、肿瘤并发的高钙血症和变形性骨炎团。目前高效液相色谱法测定帕米膦酸二钠及其制剂的方法主要有荧光检测高效液相色谱法12.3、蒸发光散射高效液相色谱法“和示差折光检测高效液相色谱法。由于荧光检测需要柱前衍生，步骤繁琐；蒸发光检测需要用用离子对试剂，对实验条件要求较高，重现性较差；示差折光检测的灵敏度较低等原因，故本文采用离子色谱法建立了帕米膦酸二钠注射液的含量检测方法。 帕米膦酸含有一个氨基和两个膦酸基团，为双性离子，通过一定PH抑制其中一方向电离，可以通过离子色谱进行分离。而中性情况下其带负电荷较多，可以通过电导检测器进行检测。如果使用阴离子交换离子色谱分离，由于双膦酸基团价态较高，疏水性较强，所以适宜使用疏水性弱的柱子来进行分离。曾实验过疏水性极弱的Dionex lonPac AS16，疏水性低的Dionex lonPac AS19， 及疏水性中低的Dionex lonPac AS11-HC进行实验，用OH梯度进行淋洗，但均出现峰分叉明显，峰扩展宽等情况，可能受其氨基的影响。而使用用酸盐作为淋洗液的分离柱，如亲水性强的DionexlonPac AS22， 则由于保留太强无法出峰。如使用酸作为淋洗液，则可抑制其电离，使其保持较低的价态，从而加快出峰。但由于酸只能用非抑制型电导检测，因此使用非完全电离的有机酸比完全电离的无机酸有助于降低背景值。且多价态的酸其电离类似于膦酸，更有利于洗脱，故选用草酸，邻苯二甲酸等进行试验。邻苯二甲酸pKa1=2.95 pKa2=5.41， 草酸的PKa1=1.23，Pka2=4.19，因此相同摩尔浓度的淋洗液，草酸由于电离更强，抑制双膦酸电离效果更明显，帕米膦酸出峰更早。且在草酸淋洗液中，帕米膦酸响应更强，相同浓度的峰高为其在邻苯二甲酸淋洗体系中的20倍。因此使用草酸进行后续实验。 仪器： ICS系列离子色谱。 分析柱： lonPac AS22+lonPac AG22， 4mm 流动相组成：草酸3mM 流速：：1.2mL/min 柱温：30℃ 检测方式：直接电导检测 进样量：25pL 样品前处理 注射液按测试条件下的规定稀释后直接进样。 结果与讨论 1.方法专属性考察 取对照品储备液，加水制成浓度约为0.45 mg/mL的对照品溶液，与供试品溶液、空白辅料溶液和水在上述色谱条件下分别进样，帕米膦酸二钠的保留时间为7.07min， 理论板数按帕米膦酸二钠计为5010，分离效果好，空白辅料溶液无干扰，见图1。 2.温度的影响 图1.对照品溶液(A)、供试品溶液(B)、空白辅料溶液(C)及水(D)的色谱图1.帕米膦酸二钠 考察了色谱柱温度分别为30℃、35℃和40℃时的色谱行为，当温度逐渐升高时，保留时间逐渐增大，帕米膦酸二钠峰的理论板数逐渐减小，故柱温为30℃。 3.草酸溶夜浓度的影响 考察了草酸溶液浓度(2mmol/L~10mmol/L)的影响(如图2所示)，当草酸溶液浓度逐渐增大时，帕米膦酸二钠保留时间减小，帕米膦酸二钠主峰与水溶液的负峰逐渐接近，为了保证分离效果和节省分析时间，确定草酸溶液浓度为3mmol/L。 图2.不同浓度淋洗液影响 4.线性与检出限 精密量取对照品储备液5、5、3、5、5、2、2mL分别置20、25、20、50、100、50、100mL量瓶中，加水稀释至刻度，在上述色谱条件下进样分析，以溶液浓度(mg/mL)为横坐标Y， 峰面积(ps*min)为纵坐标X，进行线性回归，回归方程为：Y=31.559X-0.1407，相关系数为r=0.9996，表明帕米膦酸二钠在浓度0.07~0.92mg/mL范围内线性关系良好。 取对照品储备液逐级稀释并注入离子色谱仪，其检测限和定量限分别为0.2pg/mL和0.7 pg/mL。 5.仪器精密度试验 取供试品溶液连续进样6次，测定峰面积，其RSD为0.2%，结果表明，精密度良好。 取供试品溶液于配制后0，1.5，3，4，5，6小时分别进样，其峰面积的RSD为0.2%，表明供试品溶液在6小时内是稳定的。 按帕米膦酸二钠注射液处方，分别取帕米膦酸二钠对照品与辅料适量，精密称定，配成相当于标示量80%、100%和120%3个浓度的溶液，每个浓度3份，照上述色谱条件进行测定。其低、中、高3种浓度加入量的回收率(n=3)分别为99.6%(RSD=0.2%)，100.0%(RSD=0.3%)， 100.1%(RSD=0.5%)，平均回收率为99.9%(n=9)。 表1.样品含量测定结果 序号 生产厂家 规格 批号 含量 1 080103 100.0% 2 浙江奥托康制药集团股份有限公司 5mL： 15 mg 070914 99.3% 3 060102 102.5% 4 浙江省耀江药业有限公司 -5mL： 15mg 20071106 96.4% 5 20070301 104.1% 6 江苏神龙药业有限公司 10mL： 30mg 061019 109.4% 8.实际样品的分析 取本品3批，按“1.4.2”项下制备供试品溶液，进样测定，其结果见表1。 结论 本文所建立的离子色谱法测定帕米膦酸二钠注射液的含量的方法，准确、灵敏、简便，可用于帕米膦酸二钠注射液的质量控制，并为帕米膦酸二钠其他制剂的含量测定提供了参考。 ( [参考文献] ) ( 1 钟永祥，张祥斌.帕米膦酸二钠的临床应用进展[J].中华全科医师杂志，2005，4(1)：27-29. ) ( [2] 刘爱芹，马淑涛.高效液相色谱法测定注射用帕米膦酸二钠的含量[J].中国药业，2007，16(21)： 12- 1 3. ) ( 13] 孔俐文，胡志远，王东凯，黎玲，宋扬，苏娟娟.反相高效液相色谱法测定帕米膦酸二钠的含量[J]. 中国药房，2007，18(1)： 60-61. ) ( 谢赞，蒋晔，田书霞.反相离子对色谱-蒸发光散射法测定帕米膦酸二钠及其有关物质[J].药物分 析杂志，2006，26(12)：1729-1732. ) thermoscientific.com C 2012 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and itssubsidiaries. Specifications， terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult yourlocal sales representative for details. 上海 北京 免费服务热线：上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 8008105118邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118电话：021-68654588 由编：100007传真：021-64457830 电话：010-84193588传真：010-88370548 本文所建立的离子色法测定帕米膦酸二钠注射液的含量的方法，准确、灵敏、简便，可用于帕米膦酸二钠注射液的质量控制，并为帕米膦酸二钠其他制剂的含量测定提供了参考。