吐温 80中定性分析检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-398Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-384 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. - Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GCMS 结合 SPME Arrow 定性分析吐温降解产物 GCMS-384 摘要：本文建立了 GCMS 结合 SPME Arrow 定性分析吐温降解产物的分析方法。分析结果表明，冷藏保存数月后的吐温降解产物主要为醛、酮、酸类物质，如：庚醛、2-辛酮、壬酸等， NIST20 商品谱库检索相似度均在90以上。冷藏保存数天的吐温未检测到醛、酮、酸等降解物质。 关键词：吐温降解产物 SPME 吐温(Tween)， 又名聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，是生物药物制剂中使用最广泛的表面活性剂之一，可防止蛋白质在溶解过程中变性、聚集、表面吸附和絮凝。 生物制剂中的吐温可以通过氧化和水解途径降解。由于吐温的降解可能会影响蛋白质制剂的质量、功效、安全性和稳定性，因此，药品监管部门对吐温的控制策略的审查日益严格，以确保在药物产品的保质期内吐温含量保持恒定。 实验部分 1.1仪器 气相色谱-质谱联用仪： GCMS-QP2020 NX 自动进样器：AOC-6000 1.2分析条件 AOC-6000条件 进样方式： SPMEArrow 平衡温度：40℃ 萃取时间： 30 min GCMS条件 进样口温度：250℃ 色谱柱： Rxi-5Sil MS， (30m×0.25 mm×0.25 um) 柱温程序：50℃(1 min)_10℃ /min_280℃ (5 min) 载气控制方式：恒线速度(36.3 cm/sec) 近期也有生物药企业反映吐温保存一段时间后，通过液相色谱仪(衍生-荧光方法)无法检测到吐温，岛津采用 MALDI-TOF 分析后发现吐温分子量出现减小的趋势，意味着制剂中吐温发生了降解，因此确定吐温降解后的产物，了解其是否对人体有副作用是非常必要的。 本文采用 GCMS 结合 SPME 进样定性分析吐温降解产物，使用三合一萃取填料萃取吐温中小分子组分并使用气相色谱质谱仪进行分析。此方法无需手动前处理，全自动进样分析，操作简便、快速。 萃取填料：DVB/CarbonWR/PDMS 解析温度：250℃ 解析时间：2 min 进样方式：分流进样(分流比10：1) 离子方式：El 离子源温度：230℃ 色谱质谱接口温度：250℃ ( 采集方式： Sc a n (4 5 ~500 m/z) ) 1.3样品前处理 准确移取 10 mL吐温样品至顶空瓶，密封，经AOC-6000+GCMS分析。 结果讨论 2.1空白色谱图 将烘烤后的顶空瓶压盖后上机分析，得到空白的色谱图。 图1空白色谱图 2.2样品1色谱图及定性结果 样品1为4℃下保存3个月的吐温样品，按照1.2分析条件分析后色谱图如图2所示。通过 NIST 20商品谱库检索，定性结果如表1所示，主要为醛、酮、酸类化合物。 图2 样品1色谱图 表1 样品1定性结果 No. 保留时间((min) 中文名称 英文名称 CAS号 峰面积 相似度 3.595 正己醛 Hexanal 66-25-1 4224939 97 2 4.755 2-庚酮 2-Heptanone 110-43-0 l739256 95 3 4.935 庚醛 Heptanal 111-71-7 120962849 98 4 5.965 正庚醇 l-Heptanol 111-70-6 10814852 98 5 6.285 2-辛酮 2-Octanone 111-13-7 9589556 97 6 6.495 正辛醛 Octana 124-13-0 355853513 97 7.555 辛醇 1-Octanol 111-87-5 35350133 98 8 7.880 2-壬酮 2-Nonanone 821-55-6 59956460 95 9 8.100 壬醛 Nonanal 124-19-6 294889854 97 10 8.955 反式-2-壬醛 (E)-2-nonenal 18829-56-6 6459699 96 11 9.115 辛酸 Octanoic acid 124-07-2 13749281 94 12 9.420 甲基正辛酮 2-Decanone 693-54-9 53968868 96 13 9.645 癸醛 Decanal 112-31-2 8663707 94 14 10.475 反式-2-癸烯醛 (E)-2-decenal 3913-81-3 86196422 95 15 10.600 正壬酸 Nonanoic acid 112-5-0 42874139 97 16 10.955 3-Methyl-hepta- 1，6-dien-3-ol 34780-69-3 18751787 90 17 11.900 2-十一烯醛 2-Undecenal 2463-77-6 45775000 94 18 13.650 反-2-十二烯酸 Trans-2- undecenoic acid 15790-94-0 8097914 95 2.3样品2色谱图及定性结果 样品2为4℃下保存20天的吐温样品，按照1.2分析条件分析后色谱图如图3所示。通过 NIST 17 谱库检索，定性结果如表2所示，主要为硅氧烷类化合物，可能来源为存放吐温的塑料瓶。 图3 样品2色谱图 表2样品2定性结果表 No. 保留时间(min) 中文名称 英文名称 CAS号 峰面积 相似度 1 6.125 未知 2 7.387 六甲基环三硅氧烷 Hexamethyl- cyclotrisiloxane 541-5-9 5382493 90 3 7.881 未知 4 8.528 环五聚二甲基硅氧烷 Decamethyl- cyclopentasiloxane 541-2-6 41422413 87 5 9.650 八甲基环四硅氧烷 6 9.913 556-67-2 Octamethyl- cyclotetrasiloxane 556-67-2 3963202 89 7 10.987 未知 8 11.745 十二甲基环六硅氧烷 Dodecamethyl- cyclohexasiloxane 540-97-6 18415712 88 9 13.209 未知 10 13.974 / isopropyl pentakis(trimethylsilyl) disilicate 71579-69- 1211903 83 6 10 13.974 对乙氧基苯甲酸乙酯 4-Ethoxy-ethyl ester benzoic acid- 23676-9-7 4330947 97 备注：未知指 NIST 谱库检索相似度小于80。 结论 本文建立了 GCMS 结合 SPME Arrow 定性分析吐温降解产物的分析方法。分析结果表明，冷藏保存数月后的吐温降解产物主要为醛、酮、酸，如：庚醛、2-辛酮、壬酸等， NIST20谱库检索相似度均在90以上。冷藏保存数天的吐温中未检测到醛、酮、酸等降解产物。 岛津应用云 本文建立了GCMS结合SPME   Arrow定性分析吐温降解产物的分析方法。分析结果表明，冷藏保存数月后的吐温降解产物主要为醛、酮、酸类物质，如：庚醛、2-辛酮、壬酸等，NIST20商品谱库检索相似度均在90以上。冷藏保存数天的吐温未检测到醛、酮、酸等降解物质。