燕窝中唾液酸检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-362Excellence in Science Excellence in ScienceLC-231 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 使用 Nexera LC-40 HILIC 模式测定燕窝中唾液酸 LC-231 摘要：本文采用 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，以 HILIC 色谱柱建立了燕窝中唾液酸的测定方法。实验结果表明，浓度为60 ug/mL的对照品溶液，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差 (RSD%)分别为0.036%和0.68%，方法精密度良好。在5-100 ug/mL浓度范围内，方法线性良好，线性判定系数 R为 0.9992。实际燕窝样品三次平行分析，结果表明：唾液酸平均含量为107.70 g/kg， RSD 为 2.72%。该方法简单，灵敏，稳定性好，满足 GB/T 30636-2014的要求，适用于燕窝中唾液酸的检测。 关键词： Nexera LC-40高效液相色谱仪燕窝 唾液酸 HILIC 模式 唾液酸又称燕窝酸，是燕窝主要的生物活性成分，是智力发展催化剂。在燕窝中主要以N一乙酰神经氨酸形式存在。据报道，一般燕窝的唾液酸含量可达7%以上，这也是初步鉴定真假燕窝的手段。 对价格昂贵，耐用性较差，岛津利用 Nexera LC-40 液相色谱仪，建立了一种实用性较强的 HILIC 模式的唾液酸的分析方法，供相关检测人员参考。 目前唾液酸的检测方法主要有分光光度法，高效液相色谱法，液相色谱质谱联用法等，本文参考 GB/T30636-2014(燕窝及其制品中唾液酸的测定液相色谱法)，标准中采用了强离子交换柱进行分析，色谱柱相 HILIC 是亲水作用色谱法 (Hydrophilic InteractionChromatography)的简称，如分析在反相色谱柱保留困难的极性化合物可使用该分离模式， HILIC 模式随着有机溶剂浓度升高保留会逐渐增强。此外，溶液中经常添加一定的醋酸铵等缓冲盐，可实现稳定的分析。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 XR 高效液相色谱仪，具体配置为： 系统控制器： CBM-40 Lite脱气机： DGU-405输液泵： LC-40B XR自动进样器： SIL-40C XR柱温箱：CTO-40S检测器：SPD-M40 色谱工作站： LabSolutions Ver.5.97 图1岛津Nexera LC-40 XR高效液相色谱仪 1.2分析条件 色谱柱： Inertsil HILIC (150 mm × 4.6 mml.D.，3um，岛津(上海)实验器材有限公司， P/N：5020-07795) 流动相：A，水((10 mM甲酸铵)；；B，乙腈 流速：1mL/min柱 温：40C 检测波长：205nm 进样体积：10 uL 洗脱方式：等度洗脱，A： B=15： 85。 1.3.准准品溶液制备 唾液酸标准储备液： 精密称取唾液酸标准品 100 mg， 加水20mL溶解后，加乙腈定容至100 mL容量瓶中，制得1 mg/mL唾液酸标准储备液。 唾液酸标准系列工作溶液： 从上述储备液中移取适量，用流动相逐级稀释制成 5 ug/mL、10ug/mL、20 ug/mL、40 ug/mL、60 ug/mL、80 ug/mL、100 ug/mL的标准系列工作溶液。 1.4样品前处理 取适量干燕窝于105℃烘干60 min，干燥器中冷却，用研钵研成细粉，混匀。准确称取0.1g粉碎均匀试样(精确至0.0001 g) 至25 mL具塞刻度试管中，加入50%乙酸溶液10 mL， 加塞，置于100℃水浴中水解10 min， 取出试管冷却至室温。将水解液转移至100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀，取上清液，0.22 um 微孔滤膜过滤，滤液进液相色谱仪分析。 结果与讨论 2.1标准溶液色谱图 图2唾液酸酒准品溶液色谱图(10 ug/mL) 2.2线性范围和灵敏度考察 将1.3中制备的5、10、20、40、60、80、100 ug/mL标准系列工作溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，使用外标法拟合工作曲线。标准曲线见图3，线性判定系数R’=0.9992。标准曲线各浓度点的准确度、信噪比、定量限如表1所示。曲线各标点准确度在95.0-108.1%之间。5 ug/mL标准溶液的 S/N 为29.50 (ASTM计算方式)。 面积(x100，000) 图3唾液酸工作曲线 表1唾液酸校准曲线准确度和定量限 定量结果视图ID#1 4 唾液酸 Data 数据文件名 保留时间 面积 浓度(mg/L 标准浓度 精确度% S/H 定量限 1 标液_05ppm_ 6.438 19，584 5.404 5 108.1 29.50 1.83172 2 标液_10ppm_ 6.424 36，887 9.684 10 96.8 64.72 1.49621 3 标液_20ppm_ 6.417 74，507 18.990 20 95.0 104.48 1.81753 4 标液_40ppm_ 6.415 158，154 39.682 40 99.2 236.42 1.67845 5 标液_60ppm_ 6.421 235，876 58.908 60 98.2 317.11 1.85764 6 标液_80ppm_ 6.435 327，760 81.638 80 102.0 463.55 1.76113 7 标液_100ppm 6.441 404， 789 100.693 100 100.7 502.49 2.00389 2.3精密度实验 60 ug/mL 浓度对照品溶液，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表2所示。保留时间和峰面积的相对标准偏差 (RSD%) 分别为 0.036% 和0.68%。 图4对照品溶液6针重复性色谱图 表 2 60 ug/mL唾液酸标准溶液连续6针重复性结果 编号 保留时间 峰面积 1 6.413 234，671 2 6.410 233，240 3 6.410 230，349 4 6.410 234，589 5 6.407 233，704 6 6.407 233，551 平均值 6.410 233，351 RSD% 0.036 0.68 2.4实际样品分析及重复性考察 样品信息：品种-燕碎；原产国-印度尼西亚；燕窝种类-屋燕。 将样品用研钵研成细粉后按照1.4前处理方法处理后上机，平行3份样品考察稳定性和 RSD， 具体结果如下：样品中唾液酸实际含量平均为107.70 g/kg， RSD 为 2.72%，结果见表3。该方法稳定性及重现性良好。 唾液酸含量计算公式： X=(cxV×10)/(m×10°) X-试液中唾液酸含量，单位克每千克 (g/kg) C-由标准曲线查得试液中唾液酸浓度，单位为微克每毫升 (ug/mL) V-试液定容体积，单位为毫升(mL) m-试液取样质量，单位为克(g) 图5燕窝样品溶液色谱图 表3三平行样品及重复性计算结果(n=3) No. 燕窝中唾液酸含量 (g/kg) 1 110.16 2 108.49 3 104.46 平均值 107.70 CV% 2.72 结论 本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，了立了燕窝中唾液酸的测定方法。实验结果表明， 60 ug/mL浓度对照品溶液，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别为 0.036%和0.68%，方法精密度良好。在5-100 ug/mL 浓度范围内，方法线性良好，线性判定系数R为 0.9992。曲线各标点准确度在94.2-104.4%。实际干燕窝样品平行三份分析，结果为平均含量为 107.70 g/kg， RSD 为2.72%。该方法灵敏，准确，稳定性好，适用于燕窝中的唾液酸的检测。 岛津应用云 本文采用岛津Nexera LC-40高效液相色谱仪，建立了以实用性较强的HILIC模式分析燕窝中唾液酸的分析方法。实验结果表明， 60 μg/mL浓度对照品溶液，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别为0.036 %和0.68 %，方法精密度良好。在5-100 μg/mL浓度范围内，方法线性良好，线性判定系数R2为0.9992。曲线各标点准确度在94.2-104.4%。实际干燕窝样品平行三份分析，结果为平均含量为107.70 g/kg，RSD为2.72%。该方法灵敏，准确，稳定性好，适用于燕窝中的唾液酸的检测。