茶叶中香豆素、侧柏酮、２-己基噻吩、反式-β-金合欢烯和肉桂酸丁酯检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-324Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-206 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn GCMSMS 法快速测定茶叶中5种禁用香精成分 GCMSMS-206 摘要：本文介绍了一种气相色谱-三重四极杆质谱法 (GC-MS/MS) 测定茶叶中5种禁用香精成分含量的分析方法。茶叶样品经乙酸乙酯萃取，涡旋振荡，离心后上清液经QuEChERS 净化处理，涡旋，离心后过膜，采用多反应监监模式(MRM)进行检测。结果表明，5种禁用香精成分在1~200 ug/L线性范围内线性关系良好，标准曲线相关系数均大于0.999， 检出限在0.003~0.243 ug/L。取校准曲线最低浓度点的标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于5%。实际样品在含量为 0.15 mg/kg的加标水平下，各组分的基质加标回收率为 88.3~99.9%。该方法简单方便，能够快速有效的监测茶叶中5种禁用香精成分的含量。 关键词：气相色谱三重四极杆质谱联用仪QuEChERS 茶叶 禁用香精 茶叶是中国传统饮品，具有独特的风味与保健功能，深受国内外广大消费者的喜爱。近年来，有些商家在利益的驱使下违法往茶叶中添加香精，以此来改善和增加茶叶的香气，这种做法不仅增加了茶叶的安全隐患，同时也损害了消费者的利益。有研究表明，部分香精成分具有一定的毒性，比如香豆素具有致癌性，而侧柏酮具有一定的神经毒性等等，这些成分都会在一定程度上影响人类的身体健康。 2-己基噻吩、反式-β-金合欢烯和肉桂酸丁酯只能以天然生成的形式存在于某些食品，禁止作为添加剂用于茶叶。因此，建立快速、准确的禁用香精成分检测方法，对于保障茶叶质量安全和人类身体健康有着重大的意义。 我国食品安全国家标准 GB2760-2014《食品添加剂使用标准》中规定茶叶中不得添加香精香料。目前茶叶中外加香精的检测方法十分欠缺。香豆素、侧柏酮、 本文采用 QuEChERS 净化处理技术，结合多反应监测模式(MRM)进行检测，建立一种茶叶中5种禁用香精成分含量的分析方法，该方法简单方便，快速高效，抗干扰能力强，灵敏度高，可为茶叶中禁用香精成分的检测提供参考。 实验部分 1.1仪器 三重四极杆气质联用仪：GCMS-TQ8050 NX 1.2分析条件 GCMS条件 色谱柱： Rxi-5Sil MS (30 m×0.25 mm l.D.× 0.25 um) 线速度：36.1cm/sec 进样口模式：不分流进样 离子化方式：El 进样体积：1pL 离子源温度：200°℃ 进样口温度：250C 接口温度：250℃ 进样时间：1min 采集模式：MRM模式 柱温程序： CID气：氩气 40°℃ (1 min)_(30°C/min)_250°℃(5 min) CID气压力：200kPa 控制模式：恒线速度控制 检测器电压：调谐电压+0.8 kV 1.3样品前处理 准确称尔茶叶样品1g，置于50mL离心管中，加入15mL乙酸乙酯，涡旋1 min 混匀，离心5 min。取，上清液至 WondaPak QuEChERS 净化管中，涡旋1 min， 低温离心5 min，用0.22 um 滤膜过滤后上机检测。 结果与讨论 2.1标准色谱图 标准色谱图如图1所示，化合物相关信息见表1，化合物质量色谱图见图2。 图15种禁用香精成分MRM 图(浓度为 100 ug/L) 表1目标物的保留时间及 MRM模式下优化的质谱参数 编号 组分名称 英文简称 CAS 保留时间 定量离子对 CE 定性离子对 CE (min) (V) (V) 1 侧柏酮 Thujone 546-80-5 5.256 110.00>95.20 9 81.00>79.10 9 2 2-己基噻吩 2-Hexylthiophene 18794-77-9 6.082 168.00>97.10 21 97.00>53.10 18 3 反式-β-金合欢烯 Trans-beta-Acacene 18794-84-8 6.926 93.00>77.10 9 93.00>91.10 9 4 香豆素 Coumarin 91-64-5 6.996 146.00>118.10 9 118.00>90.10 9 5 肉桂酸丁酯 Butyl Cinnamate 538-65-8 7.921 131.00>103.10 9 131.00>77.10 21 图25种禁用香精成分MC图(浓度为5.0 ug/L) 2.2标准曲线和检出限 分别称取不含目标物的空白茶叶样品1g，按1.3方法进行样品前处理，用基质提取液稀释标准溶液，目标组分浓度分别为1.0、5.0、10、50、100和200 ug/L。以浓度为横坐标，定量离子对峰面积为纵坐标进行线性拟合，各组分标准曲线如下所示。以3倍信噪比(S/N)计算各目标物的检出限，各物质检出限和标准曲线相关系数如下表2所示： 侧柏酮 反式-β-金合欢烯 香豆素 图35种禁用香精成分标准曲线 表25种禁用香精成分相关系数、检出限 No. 组分名称 相关系数 检出限(ug/L) 1 侧柏酮 0.9999 0.018 2 2-己基噻吩 0.9999 0.003 3 反式--金合欢烯 0.9999 0.243 4 香豆素 0.9998 0.056 5 肉桂酸丁酯 0.9997 0.022 2.3重复性实验 取校准曲线浓度系列中1.0 ug/L标准溶液，重复进样6次，考察仪器重复性，各组分峰面积及 RSD%见表3. 表35种禁用香精成分的重复性结果 No. 组分名称 峰面积 1 2 3 4 5 6 RSD(%) 1 侧柏酮 14869 14529 15304 15114 15938 15336 3.14 2 2-己基噻分 14938 15112 15093 15930 15008 15421 2.44 3 反式-B-金合欢烯 5347 5104 5711 5761 5645 5662 4.65 4 香豆素 19778 18921 18367 18875 19130 18068 3.17 5 肉桂酸丁酯 38990 40286 36166 39441 40250 38920 3.88 2.4样品加标回收率 取空白茶叶样品1g，添加5种禁用香精成分标准溶液，加标量为 0.15 mg/kg，按照上述前处理方法处理后上机，平行处理3份，样品加标测定结果及加标回收率结果见表4。 表4样品加标回收率结果 No. 组分名称 测定结果 (mg/kg) 平均回收率 1 2 3 (%) 1 侧柏酮 0.153 0.149 0.144 99.1 2 2-己基噻吩 0.152 0.146 0.149 99.2 3 反式-β-金合欢烯 0.157 0.143 0.149 99.9 4 香豆素 0.144 0.132 0.137 91.7 5 侧柏酮 0.137 0.131 0.130 88.3 6 肉桂酸丁酯 0.153 0.149 0.144 99.1 2.5实际样品则试 取2种市售的茶叶样品，采用1.3前处理方法进行5种禁用香精成分的检测，得到样品色色图，如如4，两个样品均有侧柏酮和肉桂酸酯检出，测定结果见表5。 图4样品色谱图 表5样品测试结果(mg/kg) No. 组分名称 样品1 样品2 侧柏酮 0.128 0.133 2 2-己基噻吩 N.D. N.D. 反式-β-金合欢烯 N.D N.D. 4 香豆素 N.D. N.D. 5 肉桂酸丁酯 0.017 0.015 注： N.D.表示未检出 结论 本方法采用岛津 GCMS-TQ8050 NX 气相色谱-三重四极杆质谱联用仪快速检测茶中中5种禁用香精成分，在1~200 ug/L 浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.999以上，检出限在0.003~0.243 ug/L。取校准曲线浓度系列的最低浓度标准溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于5%，精密度良好。在0.15 mg/kg的空白样品加标水平下，各组分的基质加标回收率为88.3~99.9%。该方法简单方便，采用QuEChERS净化方式，净化效率高，能够快速有效的检测茶叶中禁用香精成分的含量。 岛津应用云 本方法采用岛津GCMS-TQ8050 NX气相色谱-三重四极杆质谱联用仪快速检测茶叶中5种禁用香精成分，在1~200 μg/L浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.999以上，检出限在0.003~0.243 μg/L。取校准曲线浓度系列的最低浓度标准溶液连续进样6针，峰面积RSD均小于5 %，精密度良好。在0.15 mg/kg的空白样品加标水平下，各组分的基质加标回收率为88.3~99.9 %。该方法简单方便，采用QuEChERS净化方式，净化效率高，能够快速有效的检测茶叶中禁用香精成分的含量。