葡萄酒中三氯苯甲醚检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-318Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-205 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GCMSMS 法结合 SPME 进样测定葡萄酒中 2，4，6-三氯苯甲醚 GCMSMS-205 摘要：本文参考轻工行业标准QB/T5198-2017《葡萄酒用软木塞中 2，4，6-三氯苯甲醚迁移量的测定方法》，使用 AOC-6000 自动进样器 SPME Arrow 自动固相萃取功能结合 GCMS-TQ8050 NX气相色谱三重四极杆质谱联用仪，采用同位素内标法，建立了一套快速、准确检测葡萄酒中2，4，6-三氯苯甲醚含量的检测方法，在2-50 ng/L 浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数在 0.995 以上。10 ng/L空白基质加标溶液连续进样6针，目标峰面积 RSD小于5%，精密度良好，在5 ng/L 添加浓度的回收率为 96.26%， RSD 为 4.94%；50ng/L添加浓度的回收率为98.01%， RSD 为 6.63%。该方法简单方便，能够快速准确检测葡萄酒样品中2，4，6-三氯苯甲醚含量。 关键词： GCMS-TQ8050 NX气相色谱三重四极杆质谱联用仪SSPME-Arrow 三氯苯甲醚 随着生活水平的提高，人们越来越关注葡萄酒的品质问题。其中2，4，6-三氯苯甲醚(2，4，6-Trichloroanisole， TCA) 的污染是葡萄酒行业目前所面临的最严重问题之一，它直接影响到葡萄酒的品质。TCA 是由软木塞中的氯酚在曲霉菌、青霉菌、木霉菌等微生物的作用下甲基化产生的。 TCA 呈木塞味， 性质稳定，尤其是灌瓶后渗透到葡萄酒中的 TCA比葡萄酒本身更稳定。FDA 提供的研究报告表明，由软木塞迁移到葡萄酒中的 TCA质量浓度为2.4~210.0ng/L，而消费者不可接受的 TCA异味的阈值水平一般在 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050 NX气相色谱-三重四极杆质谱联用仪 1.2分析条件 GCMSMS条件： 色谱柱： SH-Rxi 5Sil MS (30m ×0.25mm × 0.25um) 柱温程序：50℃(2 min)_9℃/min_150℃ (1 min) _20℃ /min_260℃ (3 min) 进样口温度：260℃ 色谱质谱接口温度：250℃ 检测器电压：调谐电压 +0.5 kV 3.1 ng/L左右。据估计，全球每年有2%~5%的葡萄酒会受到 TCA污染，每年因此而造成的葡萄酒损失达到100亿美元。 GCMS结合顶空固相萃取方法是目前最常用的检测葡萄酒及软木塞中 TCA含量的方法。本文参考轻工行业标准QB/T5198-2017《葡萄酒用软木塞中2，4，6-三氯苯甲醚迁移量的测定方法》建立了一套使用气代同位素内标结合AOC-6000+GCMS-TQ8050NX中SPME Arrow 自动固相微萃取功能检测葡萄酒中TCA的含量的检测方法。与传统 SPME Fiber 方式相比，该方法能够提供更好的灵敏度并获得更低的检出限。 AOC-6000 SPME Arrow 条件： 萃取头类型：PDMS SPME Arrow (100 um) 萃取时间：20min 老化温度：260℃ 萃取温度：60℃ 进样前老化时间：5min Agitator 震荡速度：300 rpm 进样后老化时间： 3 min Stirrer 震荡速度：1000rpm AOC-6000 SPME Fiber 条件： 萃取头类型： PDMS SPME Fiber (30 um) 萃取温度：60℃ 老化温度：260℃ 萃取时间：20 min 进样前老化时间：5min Agitator震荡速度：300 rpm 进样后老化时间：3min 样品前处理 用氢氧化钠溶液和甲酸将体积分数12%的乙醇溶液调整至 PH约等于3.5模拟葡萄酒空白基质。取10 mL空白基质于20 mL顶空瓶中，加入2g氯化钠，密封后置于 AOC-6000 自动进样器按照前文条件预处理。 结果与讨论 3.1标准溶液谱图 TCA 和TCA-D5(气代同位素内标)混合标准溶液 TIC 图如下图1所示，各组分信息显示于表1，各组分质量色谱图显示于图2。 (x100，000) 图1TCA 及 TCA-D5 混合溶液 TIC 图(50.0ng/L) 图2 TCA 及 TCA-D5质量色谱图(5ng/L) 表1 TCA 及 TCA-D5两组分MRM信息 No. 化合物 名称 保留时间 (min) 定量离子 CE 电压 定性离子1 CE 电压 定性离子2 CE 电压 1 TCA-D5 13.905 215.00>197.00 12 199.00>171.00 15 217.00>198.80 15 2 TCA 13.965 195.00>166.90 15 212.00>197.00 15 210.00>167.00 24 3.2标准曲线和检出限 取不同浓度的标准溶液加入10 mL空白基质中，配制成 TCA 浓度为2、5、10、20和50ng/L的空白基质加标溶液(其中内标物 TCA-D5 浓度为 10 ng/L)， 使用 AOC-6000 自动进样器 SPME Arrow 模式按照前文所述方法进样，以浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标拟合校准曲线。使用 SPME Arrow 和 Fiber 两种模式分析2ng/L基质加标溶液，以3倍信噪比分别计算两种模式下 TCA 的方法检出限。各化合物检出限以及线性相关系数如表2所示，校准曲线如图3所示。 表2各组分相关系数及检出限 No. 组分名称 线性方程 相关系数 (R) 检出限(ng/L) SPME Arrow SPEM Fiber 1 TCA Y=0.9169598X+0.04173279 0.998 0.06 0.48 图3TCA 校准曲线图 3.3重复性实验 取 10 ng/L 空白基质加标溶液，连续进样6次，考察仪器重复性，测定结果见表3。目标组分和内标组分峰面积 RSD% 均小于5%。 表31 TCA 及 TCA-D5重复性结果 No. 组分名称 面积1 面积2 面积3 面积4 面积5 面积6 RSD (%) 1 TCA-D5 34052 32520 33323 31524 30390 30983 4.40 2 TCA 64342 63459 63235 59819 57155 60426 4.47 3.4加标回收率 设计添加浓度为5 ng/L 和50 ng/L两个添加浓度，每个添加浓度3个平行样品，按照上述前处理方法使用SPME Arrow-GCMSMS分析，回收率和 RSD 结果如表4所示：在5 ng/L 添加浓度的回收率为 96.26%， RSD 为4.94%；50 ng/L 添加浓度的回收率为 98.01%， RSD 为 6.63%。 表4 各组分添加回收率结果 No. 组分名称 添加水平 (5ng/L) 添加水平(50ng/L) 平均回收率(%) RSD (%) 平均回收率(%) RSD (%) 1 TCA 96.26 4.94 98.01 6.63 3.5样品测试结果 采用上文所述的前处理方法，分析了4份葡萄酒样品，结果如表5所示： 图4某葡萄酒样品谱图 表5四种市售葡萄酒中TCA含量(ng/L) 汇总 No. 组分名称 1号酒样 2号酒样 3号酒样 4号酒样 1 TCA 0.08 0.34 3.67 1.97 结论 本方法采用同位素内标结合岛津AOC-6000+GCMS-TQ8050 NX 检测葡萄酒中2，4，6-三氯苯甲醚，在2-50ng/L浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.99以上。10 ng/L 空白基质加标液连续分析6针，目标组分峰面积 RSD 均小于5%，精密度良好。在5 ng/L 添加浓度的回收率为 96.26%， RSD 为 4.94%； 50 ng/L添加浓度的回收率为98.01%， RSD 为6.63%。测试的4份实际葡萄酒样品中2，4，6-三氯苯甲醚均有检出，含量分别为 0.08、0.34、3.67和 1.97 ng/L。 该方法简单方便，能够有效分析葡萄酒样品中的2，4，6-三氯苯甲醚，SPME Arrow 较传统 SPME Fiber 方法相比，灵敏度得到大幅提升，能够检测葡萄酒中更低浓度水平的2，4，6，-三氯苯甲醚。 岛津应用云  本方法采用同位素内标结合岛津AOC-6000+GCMS-TQ8050 NX检测葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚，在2-50 ng/L浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.99以上。10 ng/L空白基质加标液连续分析6针，目标组分峰面积RSD均小于5%，精密度良好。在5 ng/L添加浓度的回收率为96.26%，RSD为4.94%；50ng/L添加浓度的回收率为98.01%，RSD为6.63%。该方法简单方便，能够有效分析葡萄酒样品中的2,4,6-三氯苯甲醚，SPME Arrow较传统SPME Fiber方法相比，灵敏度得到大幅提升，能够检测葡萄酒中更低浓度水平的2,4,6,-三氯苯甲醚。