烘烤食品中富马酸检测方案(液相色谱仪)

1376中国卫生检验杂志2010年6月第20卷第6期 Ch inese Joumal ofH ealth Laboratory T echnologyJun 2010 V ol 20No6 高效液相法测定富马酸的超声波提取条件研究 周劭桓，廖艳华 (广西壮族自治区疾病预防控制中心，南宁 530028) [摘要] 目的：研究超声波辅助提取面包中富马酸的提取条件。方法：样品加不同比例的甲醇-乙酸水溶液，经超声波提取不同时间后，用高效液相法测定提取液中的富马酸含量。分析柱为 Agilent C柱，流动相为甲醇：0.5%的乙酸=1：2流速为 0.9m l/m in。以保留时间定性，峰面积定量，测定波长220 mm。结果：以含60%甲醇的0.5%乙酸溶液为提取溶剂，超声波辅助提取 20min， 能有效提取出烘烤面包中的富马酸。方法回收率在98%~104%之间。结论：该方法能快速、简单、准确的用于烘烤食品中富马酸的测定。 [关键词1 富马酸；高效液相法；超声波 [中图分类号1 0657.7*2 [文献标识码1 A [文章编号1 1004-8685(2010)06-1376-02 Study on supersonic condition in detemm ination of fuam acid by HPLC ZHOU Shao-huan LIAO Yan-hua ( Guangxi Center for D isease Control and Prevention N anning 530028 China) 「Abstract11cObjective Study on the sonic extraction cond ition in detem ination of fumaric ac idl by HPLC. M ethods The samplw as added the m ied solution of d ifferent rate of m ethanol in 0.5%ace detected fum aric acil content by HPLC after extractingd ifferent tm e w ith supersonic The analysis colmn was Agilent C， m obile phase w as m ethanol0.5%ace=1： 2 detecting at220 nm. R esults 60% m ethanol in 0. 5% ace extracting 20 m in by supersonic is a good m ethod for ex tracting Fum a the m eth odrecovery is bew een 98%and 104%. Conclsion This methods is fastSsi ple： accurate and it can be effectively used to determ inate the fum aric acid in faked foods [Key words] Fuan acit H gh perfom ance liqu il chroma tography (HPLC)； Supersonic wave 超声波辅助提取具有高效、简便、易操作等特点，是目前常用的样品前处理方法。尤其在针对一些热敏物质的测定时，超声波辅助提取能很好地减少热提取过程对待测物质的损害。富马酸又名延胡索酸，是一种常用的食品添加剂121。本实验探讨烘焙食品中富马酸分析预处理方法。在样品预处理中，文献常见的提取方法是热回流法3。考虑到富马酸的热不稳定性，我们采用超声波辅助提取法，利用高效液相色谱法分析不同提取溶剂，不同超声条件对共烤食品中富马酸提取效果的影响，以期得到最优化的前处理方法。 1材料与方法 1.1仪器 Shin adzu SCL-10Avp型高效液相色谱仪(配二极管阵列检测器)，超声波清洗器 KQ2200DE. 1.2试剂与材料 甲醇(色谱纯)；0.5%的乙酸溶液；富马酸标准品，配制成1mg/m l的储备液。 .3 色谱条件 色谱柱： Agilent Cs， 5 Im， 4. 6mm× 150mmg 检测波长：220 mm；柱温：25℃；流动相：甲醇：0.5%的乙酸=1：2流速：0.9m1im in. ( [作者简介] 周 周劭( 1 975- ) ，女 ， 博 士 ，主要从事食品理化 检 验工作 。 ) 1.4 实验方法 1.4.1 样品提取 称量：11. 000 g粉碎样品于25ml容量瓶中，加入提取溶液 15ml经超声提取后，取出冷却，用提取溶液定容 25ml摇匀，经 0.451m 滤膜过滤后，供HPLC测定用. 1.4.2标准溶液制备 将富马酸储备液用混合溶液(甲醇：0.5%的乙酸=12)稀释成浓度为110 H g/m1 20Hgm40g/m160Hg/m 1 80 1 g/ml 1001g/ml的标准系列。 1. 4. 3色谱分析 将制备的标准系列和样品溶液按照1.3中所述的分析条件进行分析，进样量为2011以保留时间定性，以峰面积定量。富马酸标准图谱见图1，其工作曲线方程为 y=64610X+87320线性相关系数r=0.9996. 图1富马酸标准图谱 1. 4.4 统计分析 所有样品重复测定3次，结果表示为平均值±SD采用 SPSS分析软件， Dunken分析方法进行差异分析。以P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。 2结果与讨论 国标中采用水提取样品中的富马酸41。预实验中发现酸化甲醇-水体系的提取效果明显优于纯水体系。图2是不同比例甲醇-0.5%乙酸溶液为提取溶剂测定的提取液中富马酸含量(超声提取时间为10min)。由图可知提取溶剂对提取效果的影响较大，统计分析表明不同提取溶剂中的富马酸浓度差异极显著(P<0.01)。纯水系和纯甲醇体系的提取效果较差，60%的甲醇溶液对样品中的富马酸提取效果最佳，当甲醇浓度高于80%时，提取效果开始下降。 不同字母表明两者之间差异极显著(P<0.01) 图2提取溶剂对富马酸提取效果的影响 2.2超声时间的影响 文章中报道的超声提取时间一般小于40min5。表1是超声时间对提取效果的影响(甲醇浓度均为60%)。从表中可知， 10m in 提取效率明显偏低。显著性分析结果显示， 20 m in提取效率显著高于15min和 30min(P<0.01)，但 20min 和25m in之间没有显著差异(P>0.05)。当超声时间达到40 m in时，提取效率显著降低(P<0.01)，这可能是由于超声疲劳所致1671。 表1超声时间对富马酸提取效果的影响 超声时间(m in) 含量(Hg/ml) 10 54. 88 ±0. 35 a 15 69.65±4.58b 20 78. 97 ±0. 50c 25 77. 50 ±1.56 cd 30 70.61±4.14 bd 40 62. 34±1.24 e 注：相同字母表明两者之间无显著性差异(P>0.05) 2. 3 方法的准确度和精密度 对面包样品加入3个不同浓度的标准溶液，进行加标回收试验，其回收率在98.%~103.6%之间。对同一面包样品，在相同条件下测定4次，相对标准偏差小于4.5%。 表2：方法回收率 加标水平 (mg/g) 回收率(%) 106 99.4 157 98.1 203 103.6 3结论 超声波辅助提取是一种简单、高效的样品前处理方法。以含60%甲醇的0.5%乙酸溶液为提取溶剂，超声波辅助提取20m in， 能有效提取出烘烤面包中的富马酸。随超声时间延长，提取效果将达到饱和，当时间继续延长，提取效率将下降。 ( [参考文献] ) ( [ 1 ] Kn orr D. Ap p lications an d potential of ul t rason ics in food p r ocessing[J].Tr e nds i n F o od Science & T echnology 2 2004 ， 15 ( 5) ：2 61-266 ) ( [2 ] 凌关庭.食品添加剂手 册 [M] . 第3版.北京 ： 化学 工 业出版社， 2003. ) ( [3] 谭 小鸿，张援虎，张荣祥 . HPLC法测定 草 珊瑚 中 富马酸含量 的 方 法 学研究[J].亚 太 传 统 医药，20095(8 ) ： 43-4 6 . ) ( [4] GB/T 23877 - 2009 . 饲 料酸 化剂中柠檬酸、富马 酸 和乳 酸 的测 定 [ S]. ) ( [5 ] 胡改 鑫 ，杨 尧 ，杨思思 . 超 声 波提 取玉 米须 总黄 酮的 工艺 研究 [J].粮油加 工，20 09， 4 0 ( 3)： 120-122. ) ( [ 6 ] P atist A . B ates D.U l t rasonic i n novations in t he f ood i ndustry f rom t he l ab oratory lo ccmm e r c i al production[ J ]. h novative Fo od Sci Em e r g ing T echnologies 2 008 9 (4 ) ： 147-154. ) ( [ 7 ] D agmar R. Si lv ia R . Rad o s lav R. U l t r a sound-assis t ed extraction inthe f ractionation a n alysis of gravitation d ust s e d in en ts[ J]. M icmch in A cta， 2008， 1 63(3)： 2 57-261. ) ( (收 稿 日期：2 0 09-11-17) ) @ China Academic Journal Electronic PublishingH浴剂的 reserved. http：//www.cnki.net 研究超声波辅助提取面包中富马酸的提取条件。方法：样品加不同比例的甲醇－乙酸水溶液，经超声波提取不同时间后，用岛津10A高效液相法测定提取液中的富马酸含量。分析柱为Agilent C18柱，流动相为甲醇：0.5%的乙酸=1:2,流速为0.9ml/min。以保留时间定性，峰面积定湿，测定波长220nm。结果：以含60%甲醇的0.5%乙酸溶液为提取溶剂，超声波辅助提取20min,能有效提取出烘烤面包中的富马酸。方法回收率在98%-104%之间。结论：该方法能快速、简单、准确的用于烘烤食品中富马酸的测定。