植物性食品中拟除虫菊酯类农药多种残留量检测方案(凝胶色谱仪)

植物性食品中拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定 适用范围 适用于粮食、蔬菜中3种有机氯和拟除虫菊酯农药残留量的测定 。（本实验样品为生姜、菠菜样） 参考标准《GB/T 5009.146-2003 植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定》 溶液的配置 标准贮备液：称取已经配制好100μg/mL的联苯菊酯，氯氟氰菊酯、氯氰菊酯标准储备液单标1mL的于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并稀释至刻度，配置成浓度为10μg/mL的混合标准贮备液，于4℃保存。 标准工作液：准确移取标准混合贮备液2mL，用丙酮稀释至10mL，配置成2μg/mL的混合标准工作液。 乙酸乙酯-环己烷（1:1）：量取500mL乙酸乙酯和500mL环己烷，混匀备用。 氯化钠水溶液：称取5g氯化钠固体，加入250mL水备用。 正己烷-乙酸乙酯（3:2）：称取150mL正己烷和100mL乙酸乙酯溶液混匀备用。 提取步骤 样品前处理：将样品经搅拌机搅碎，冷藏保存，备用。 蔬菜类： 称取5g生姜于50mL离心管中，加入4mL水，摇匀后静置1h。然后加入20mL丙酮，涡旋3min混匀后离心8min（8000r/min）。离心结束后吸取上层清液于另一50mL鸡心瓶中。残渣再用10mL丙酮重复提取一次，合并两次上清液，于40℃水浴中旋转浓缩至约4mL。将浓缩液转移至50mL离心管中。在离心管中加入20mL氯化钠溶液和20mL二氯甲烷，涡旋3min混匀，静置分层，收集下层二氯甲烷相。水相再分别用10mL二氯甲烷重复提取两次，合并二氯甲烷相于50mL离心管中，把吸取出来的二氯甲烷经无水硫酸钠柱（Welchrom® Na2SO4,6g/12mL,20pk）脱水，收集于50mL鸡心瓶中，于40℃水浴中旋蒸浓缩至近干，加入10mL乙酸乙酯-环己烷（1:1）以溶解残渣并用0.45µm滤膜过滤待净化。 菠菜样则是用相同的步骤进行提取。 净化步骤 4.1、凝胶渗透色谱净化步骤： GPC仪器型号 月旭 GPC-1600凝胶色谱仪 凝胶色谱柱 月旭Bio-Beads S-X3凝胶色谱柱，规格25×700mm 流动相 乙酸乙酯-环己烷（1:1） 流速 5.0 mL /min 进样量 5.0mL 收集时间 18-40min 将待净化液经凝胶色谱柱以乙酸乙酯-环己烷（1:1）洗脱，流速5mL/min，收集18-40min流分于150mL圆底烧瓶中，将其旋转蒸发至干， 再用正己烷2mL以溶解残渣，待净化。 4.2、固相萃取净化（SPE） SPE柱：Welchrom® Carb,500mg/6mL。 活化：5mL正己烷，弃去； 上样：待净化液全部上样，收集； 洗脱：加入30mL正己烷-乙酸乙酯（3:2）洗脱，收集于50mL浓缩瓶中； 浓缩：40℃水浴中旋转浓缩至干，用乙酸乙酯溶解并定容至1mL，供气相色谱-质谱测定。 注意事项 加标水平：5g生姜样品中加入0.5mL 2μg/mL混合标准工作液，最后定容至1mL，因此加标水平为0.2mg/kg，最终机度数为 0.5μg/mL；5g菠菜样品中加入1mL 2μg/mL混合标准工作液，最后定容至1mL，因此加标水平为0.4mg/kg，最终机度数为 1μg/mL。 色谱条件 6.1气相色谱条件 色谱柱 WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm 进样口温度 280℃ 升温程序 50℃，保持2min，以10℃/min升温至180℃，保持1min，以3℃/min升温至270℃，保持14min。 载气 高纯氦气（纯度>99.999%） 进样方式 不分流进样，1.5min后开阀 恒流模式 1.0mL/min 进样量 1μL 6.2质谱条件 电离方式 电子轰击电离源（EI） 电离能量 70eV 传输线温度 280℃ 离子源温度 250℃ 四极杆温度 150℃ 监测方式 联苯菊酯 227 228 274 氯氟氰菊酯 163 206 199 氯氰菊酯 163 165 209 溶剂延迟 5min 色谱图或者加标回收率结果 图1、三种菊酯类农药混合标准溶液0.5μg/mL图谱 表1、出峰情况 物质 保留时间 类型 峰宽 面积 开始时间 结束时间 联苯菊酯 35.093 M 0.06 13672 35.018 35.173 氯氟氰菊酯 42.49 M 0.065 2544564 42.397 42.597 42.703 M 0.061 1284216 42.611 42.765 42.838 M 0.062 1553052 42.769 42.938 氯氰菊酯 43.078 M 0.066 1066234 43.003 43.174 43.404 M 0.067 1650688 43.305 43.503 43.613 M 0.061 623671 43.533 43.674 43.748 M 0.064 939163 43.676 43.839 图2、三种菊酯类农药混合标准溶液1μg/mL图谱 图3、生姜样品空白图谱 图4、生姜样品加标0.2mg/kg图谱 图5、菠菜样品空白图谱 图6、菠菜样品加标0.4mg/kg图谱 表2、加标回收率表 基质 加标水平 平均回收率 RSD值（n=2） 生姜 0.2mg/kg 102% 3.93% 菠菜 0.4mg/kg 100% 2.71% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00551-20131 SPE小柱 Welchrom® Na2SO4,6g/12mL,20pk 00517-20006 SPE小柱 Welchrom® Carb,500mg/6mL,30pk 00823-00003 GPC凝胶色谱柱 Welch Bio-Beads SX3 700*25mm 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 03904-22001 气相色谱柱 WM-5MS, 30m×0.25mm×0.25μm 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00826-B027P100 联苯菊酯标准品 A2S, CAS No.:82657-04-3,100mg 00826-C419P100 氯氟氰菊酯标准品 A2S, CAS No.:68085-85-8,100mg 00826-C102P025 氯氰菊酯标准品 A2S, CAS No.:52315-07-8,25mg 适用范围适用于粮食、蔬菜中3种拟除虫菊酯农药残留量的测定 。（本实验样品为生姜、菠菜样）参考标准《GB/T 5009.146-2003 植物性食品中有机氯和ni除虫ju酯类农药多种残留量的测定》 提取步骤样品前处理：将样品经搅拌机搅碎，冷藏保存，备用。蔬菜类：称取5g生姜于50mL离心管中，加入4mL水，摇匀后静置1h。然后加入20mL丙酮，涡旋3min混匀后离心8min（8000r/min）。离心结束后吸取上层清液于另一50mL鸡心瓶中。残渣再用10mL丙酮重复提取一次，合并两次上清液，于40℃水浴中旋转浓缩至约4mL。将浓缩液转移至50mL离心管中。在离心管中加入20mL氯化钠溶液和20mL二氯甲烷，涡旋3min混匀，静置分层，收集下层二氯甲烷相。水相再分别用10mL二氯甲烷重复提取两次，合并二氯甲烷相于50mL离心管中，把吸取出来的二氯甲烷经无水硫酸钠柱（货号：00551-20131）脱水，收集于50mL鸡心瓶中，于40℃水浴中旋蒸浓缩至近干，加入10mL乙酸乙酯-环己烷（1:1）以溶解残渣并用0.45µm滤膜过滤待净化。菠菜样则是用相同的步骤进行提取。 净化步骤凝胶渗透色谱净化步骤：GPC仪器型号:月旭 GPC-1600凝胶色谱仪凝胶色谱柱:月旭Bio-Beads S-X3凝胶色谱柱，规格25×700mm流动相:乙酸乙酯-环己烷（1:1）流速：5.0 mL /min进样量：5.0mL收集时间：18-40min将待净化液经凝胶色谱柱以乙酸乙酯-环己烷（1:1）洗脱，流速5mL/min，收集18-40min流分于150mL圆底烧瓶中，将其旋转蒸发至干， 再用正己烷2mL以溶解残渣，待净化。 固相萃取净化（SPE）SPE柱：Welchrom® Carb,500mg/6mL。活化：5mL正己烷，弃去；上样：待净化液全部上样，收集；洗脱：加入30mL正己烷-乙酸乙酯（3:2）洗脱，收集于50mL浓缩瓶中；浓缩：40℃水浴中旋转浓缩至干，用乙酸乙酯溶解并定容至1mL，供气相色谱-质谱测定。 色谱条件气相色谱条件色谱柱：WM-5MS,30m×0.25mm×0.25μm。进样口温度：280℃；升温程序：50℃，保持2min，以10℃/min升温至180℃，保持1min，以3℃/min升温至270℃，保持14min；载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；进样方式：不分流进样，1.5min后开阀；恒流模式：1.0mL/min；进样量：1μL。 质谱条件电离方式：电子轰击电离源（EI）电离能量：70eV传输线温度：280℃离子源温度：250℃四极杆温度：150℃监测方式：联苯菊酯 227 228 274氯氟氰菊酯 163 206 199氯氰菊酯 163 165 209溶剂延迟：5min 色谱图或者加标回收率结果