鸡肉冻干粉中兽药残留检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-117Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-464 Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8050 测定鸡肉中氯霉素的含量 LCMSMS-464 摘要：本文使用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪 LCMS-8050， 建立了鸡肉中氯霉素的定量分析方法。参考《ISO/AWI 13493：肉与肉制品中氯霉素含量的检测方法》标准，鸡肉样品经乙酸乙酯提取，氮吹浓缩，流动相初始比例溶液复溶，正己烷萃取，液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。结果显示氯霉素线性良好，标准曲线相关系数≥0.9999， 准确度在97.3~106.4%之间。0.1 ug/kg、1 ug/kg浓度的加标回收率在91.1~93.81%之间。该方法可满足鸡肉样品中氯霉素的定性定量测定。 关键词： LCMS-8050兽药残留鸡肉氯霉素 氯霉素 (chloramphenicol， CAP)是由委内瑞拉链丝菌产生的一种光谱抗生素，抑菌效果好、价格低廉，曾广泛应用于各类动物源性食品生产过程中。但是氯霉素对造血系统有毒性反应，长期食用氯霉素残留超标食品可能导致消化机能紊乱、再生障碍性贫血和血小板减少、肝损伤等健康危害。因此，美国、日本等许多国家都将氯霉素列为违禁药品，我国也规定氯霉素在动物源性食品中不得检出。 目前用于氯霉素监测的方法有气相色谱法、竞争 性 ELISA法、高效液相色谱串联质谱法，为了提高检测的准确度和灵敏度，越来越多的检测中心逐步开发出用于氯霉素药物浓度监测的高效液相色谱串联质谱法。 本文参考《ISO/AWI 13493：肉与肉制品中氯霉素含量的检测方法》标准，建立了基于岛津 LCMS-8050的鸡肉中氯霉素的测定方法。该方法快速、稳定，适合动物性食品中氯霉素的测定。 实验部分 1.1仪器 岛津超高效液相色谱与三重四极杆质谱仪联用系统 LCMS-8050。具体配置为 LC-30ADcL×2(输液泵)) ，DGU-20A5RCL(在线脱气机)， SIL-30ACMPCL(自动进样器)， CTO-30AcL(柱温箱)， CBM-20AcL系统控制器，LCMS-8050三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.81 色谱工作站。 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱： Shimadzu Shim-pack GIST C18 (150 mm×2.1 mm l.D.， 5 um)Shimadzu SGLC. 流动相：流动相A-水流动相B-乙腈 流速：0.3mL/min 柱温：30℃ 进样量：20uL 洗脱方式：梯弟洗脱，B相初始浓度为10%，， 时间程序见表1. 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 2 Pumps Pump B Conc. 10 6 Pumps Pump B Conc. 80 7 Pumps Pump B Conc. 80 7.1 Pumps Pump B Conc. 10 10 Controller Stop 质谱条件 离子源： ESI-加热模块温度：400℃雾化气流速：3.0 L/minDL温度：250C加热气流速：10.0L/min扫描模式：多反应监测(MRM)干燥气流速：10.0 L/minMRM 参数：见表2 表2 MRM 参数 序号 化合物名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE Q3 Pre Bias (V) 1 2 氯霉素 氯霉素-D5(内标) 321.05 326.10 152.10* 12 17 14 257.05 25 11 27 157.15 16 18 26 *定量离子对 1.3标准品及试剂 标准品：氯霉素(chloramphenicol，CuH12CI2N205， CAS号：56-75-7，浓度1mg/ml)，上海市质量监督检验技术研究院提供、氯霉素-D5 (chloramphenicol-D5， C1H12CI2N20， CAS 号：202480-68-0，浓度100 ug/L)，上海市质量监督检验技术研究院提供。 乙酸乙酯：色谱级，室温保存。 正己烷：色谱级，室温保存。 乙腈：质谱级，室温保存。 实验用水：：由 Milli-Q Plus 水净化系统经去离子与二次净化制得。 1.4样品及标准曲线配制 1.4.1样品制备 参考《ISO/AWI 13493：肉与肉制品中氯霉素含量的检测方法液相色谱-串联质谱法》标准前处理方法：取待测样品鸡肉干粉1g(准确至±0.0001g)， 于50mL离心管中，取样品量4倍质量的超纯水复溶冻干粉末，冻干粉复水膨胀约10分钟后，加0.1 mL (5.0 ug/L) 的内标工作液，加入乙酸乙酯25 mL， 涡旋振荡5min，离心5分钟，取上清液转移至另外一个离心管中，再次加入乙酸乙酯15mL，重复上述操作，合并两次上清液。氮吹上清液至近干，加入流动相初始比例溶液1.0 mL使溶解，再加入正己烷10 mL，充分混合，离心，弃去正己烷，再次加入正己烷4mL，重复上述处理，最后取下层溶液，过0.22 um滤膜，液相色谱-串联质谱仪测定。 1.4.2标准曲线配制 分别取氯霉素标准品溶液适量，用初始比例流动相溶液稀释成氯霉素浓度为 0.25，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0ug/L 系列混合标准工作液，其中含氯霉素-D5的浓度分别为 0.5 ug/L， 待上机分析。 结果讨论 2.1标品色谱图 氯霉素((标曲中间点L3) 氯霉素-D5(内标) 图1 氯霉素及相应内标色谱图 2.2线性关系 对系列混合标准曲线溶液进行分析，以面积比为纵坐标，浓度比为横坐标，进行线性拟合。结果如图2所示，氯霉素在0.25-10 ug/L范围内，线性良好，线性相关系数均>0.9999，准确度在97.3-106.4%之间。 图2 氯霉素标准曲线 2.3重复性考察 对0.25、1、10 ug/L 的标准溶液连续分析6次，计算保留时间和峰面积的RSD。结果见表3，氯霉素的保留时间 RSD<0.05%，峰面积的 RSD<1.2%。仪器稳定性良好。 表3保留时间和面积 RSD 中文名称 浓度((ug/L) 保留时间RSD(%) 面积RSD(%) 氯霉素 0.25 0.05 1.11 1 0.05 0.16 10 0.05 0.47 2.4加标回收率考察 在鸡肉冻干粉样品上进行低、高水平 (0.1ug/kg、1ug/kg)的加标回收试验。结果见表4，氯霉素平均回收率在92.4~92.8%之间。 表4鸡肉冻干粉加标回收率结果 中文名称 浓度(ug/L) 保留时间RSD(%) 低水平 (0.1ug/kg) 高水平 (1ug/kg) 氯霉素 92.4 92.75 2.5实际样品测定 采用上述方法测定某鸡肉冻干粉，样品中检出氯霉素，结果如表5所示。 图3鸡肉冻干粉氯霉素及相应内标色谱图 表5鸡肉冻干粉检测结果 中文名称 测定1(ug/kg) 测定2(ug/kg) 平均值(ug/kg) 氯霉素 0.174 0.176 0.175 结论 本文使用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪LCMS-8050， 参考《ISO/AWI 13493：肉与肉制品中氯霉素含量的检测方法液相色谱-串联质谱法》标准，建立了鸡肉中氯霉素的测定方法。该方法可供相关行业参考。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心 本文使用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪LCMS-8050，建立了鸡肉中氯霉素的定量分析方法。参考《ISO/AWI 13493：肉与肉制品中氯霉素含量的检测方法》标准，鸡肉样品经乙酸乙酯提取，氮吹浓缩，流动相初始比例溶液复溶，正己烷萃取，液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。结果显示氯霉素线性良好，标准曲线相关系数≥0.9999，准确度在97.3~106.4%之间。0.1 μg/kg、1 μg/kg浓度的加标回收率在91.1～93.81%之间。该方法可满足鸡肉样品中氯霉素的定性定量测定。