植物种皮或叶子中提取花青素检测方案(制备液相色谱)

SepaFlash®反相C18纯化柱再添新应用！ ——花青素类样品的纯化制备 仇文军，徐波 应用技术研究中心 花青素（anthocyanidin）或称花色素，化学式为C15H11O6（其基本结构式如图1所示），是一种水溶性的植物色素，存在于液泡内的细胞液中。其与糖类物质以糖苷键结合之后即为花色苷，与花的颜色、叶子变红等有关。花青素广泛存在于各种植物的核、皮或籽中，如葡萄、松树皮、杏壳、樱桃花、山楂叶、云杉叶等。目前食品工业上使用的色素多为合成色素，几乎都有不同程度的毒性，长期食用会危害人的健康，因此，天然色素逐渐引起了科研工作者的关注。花青素作为一种天然食用色素，不仅安全、无毒、资源丰富，还具有一定营养和药理作用。研究表明，原花青素具有抗氧化、清除自由基、护肝解毒、降血压、降血脂、消炎、抗癌、治疗心血管疾病等功效，在食品、化妆、医药等方面有着巨大的应用潜力。 图1. 花青素的化学结构。 常州大学食品学院的邹老师目前正致力于从植物种皮或叶子中提取花青素，前期采用传统的乙醇萃取法，经初步提取后，发现提取液中除主要成分外，还含有少量水溶性杂质，HPLC分析图谱如图2所示。为了去除这些杂质，进一步提高提取的花青素纯度，邹老师联系到三泰科技的应用技术研究中心，希望我们能帮他解决这一难题。 图2. 花青素粗提物的HPLC分析图谱。 在了解了对方的需求和样品性质后，应用工程师仇文军决定利用SepaFlash®系列C18反相纯化柱进行纯化制备。样品为液态的植物种皮的乙醇提取物，经简单的离心处理后取上清液5 mL进样，Flash制备实验参数如表1所示。 表1.样品制备纯化实验参数设置 仪器 SepaBean® machine 色谱柱 40g SepaFlash® Bonded Series C18反相纯化柱 (球形硅胶, 40-60μm, 120Å, 订货号：SW-5231-040-SP) 检测波长 220 nm；254 nm 流动相 溶剂A：水； 溶剂B：乙腈 流速 30 ml/min 进样量 5 mL 洗脱梯度 时间 (min) 溶剂B (%) 0 5 2 5 8 34 10 34 18 90 27 90 图3. 花青素粗提物的Flash制备图谱。 花青素粗提物的Flash制备图谱如图3所示，对收集的目标产物经冻干处理后得到干粉，然后将其溶解后进行HPLC分析，结果如图4所示。对比Flash纯化制备前后样品的HPLC分析图谱（图2和图4）可知，花青素粗提物有效成分的纯度从84.2%提高到97.2%，粗提物中的水溶性杂质被有效去除，获得的目标产物可以用于下一步的生物活性实验等用途。 图4. 花青素粗提物经Flash纯化制备后的HPLC分析图谱。 通过本次Flash纯化制备的尝试，为我们今后的应用开发也拓展了思路，三泰科技将继续致力于天然产物分离纯化方案的开发，为广大客户提供更多更好的分离纯化解决方案。 如需进一步了解SepaBean® machine的详细规格信息，或配套使用的Flash柱订购信息，请访问ChemBeanGo在线商店：https://store.chembeango.com/。 常州大学食品学院的邹老师目前正致力于从植物种皮或叶子中提取花青素，前期采用传统的乙醇萃取法，经初步提取后，发现提取液中除主要成分外，还含有少量水溶性杂质，HPLC分析图谱如图2所示。为了去除这些杂质，进一步提高提取的花青素纯度，邹老师联系到三泰科技的应用技术研究中心，希望我们能帮他解决这一难题。图1. 花青素的化学结构。图2. 花青素粗提物的HPLC分析图谱。在了解了对方的需求和样品性质后，应用工程师仇文军决定利用SepaFlash系列C18反相纯化柱进行纯化制备。样品为液态的植物种皮的乙醇提取物，经简单的离心处理后取上清液5 mL进样，Flash制备实验参数如表1所示。表1.样品制备纯化实验参数设置仪器SepaBean machine色谱柱40g SepaFlash Bonded Series C18反相纯化柱(球形硅胶, 40-60μm, 120Å, 订货号：SW-5231-040-SP)检测波长220 nm；254 nm流动相溶剂A：水；溶剂B：乙腈流速30 ml/min进样量5 mL洗脱梯度时间 (min)溶剂B (%)0525834103418902790图3. 花青素粗提物的Flash制备图谱。花青素粗提物的Flash制备图谱如图3所示，对收集的目标产物经冻干处理后得到干粉，然后将其溶解后进行HPLC分析，结果如图4所示。对比Flash纯化制备前后样品的HPLC分析图谱（图2和图4）可知，花青素粗提物有效成分的纯度从84.2%提高到97.2%，粗提物中的水溶性杂质被有效去除，获得的目标产物可以用于下一步的生物活性实验等用途。图4. 花青素粗提物经Flash纯化制备后的HPLC分析图谱。通过本次Flash纯化制备的尝试，为我们今后的应用开发也拓展了思路，三泰科技将继续致力于天然产物分离纯化方案的开发，为广大客户提供更多更好的分离纯化解决方案。如需进一步了解SepaBean machine的详细规格信息，或配套使用的Flash柱订购信息，请访问ChemBeanGo在线商店：https://store.chembeango.com/。