动物源食品中倍他米松检测方案(固相萃取仪)

动物源食品中倍他米松的测定农业部1031号公告-2-2008 适用范围 适用于动物源食品中倍他米松的测定（该实验选用基质为鸡肉） 参考标准：《农业部1031号公告-2-2008 动物源食品中糖皮质激素类药物多残留检测 液相色谱-串联质谱法》 溶液的配置 倍他米松标准储备液：准确称取10mg标准品，用甲醇稀释并定容至10mL，浓度为1000μg/mL。 标准中间液: 准确移取100μL标准储备液，用20%乙腈水定容至10mL，浓度为10μg/mL； 准确移取100μL浓度为10μg/mL的标准中间液，用20%乙腈水定容至10mL，浓度为0.1μg/mL。 3）倍他米松标准工作液：准确移取适量标准中间液，用20%乙腈水稀释成适宜浓度的标准工作液。 4）丙酮-正己烷（4-6）：量取40mL丙酮，60mL正己烷，混匀。 5）0.1%甲酸水：量取1mL甲酸加水稀释至1000mL。 6）20%乙腈水：量取20mL乙腈，80mL水，混匀。 7）0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠，用水溶解，稀释定容至1000mL。 提取步骤 试样称取2g，加入15mL乙酸乙酯，涡旋混合，8000 r/min离心15 min,移取乙酸乙酯层于100mL浓缩瓶中。在残渣中0.1mol/L氢氧化钠溶液10mL，混匀，加乙酸乙酯20mL，涡旋混合，200r/min摇床振动15min，8000 r/min离心15 min,移取乙酸乙酯层，合并提取液，在旋转蒸发器上40℃浓缩至近干，加入1mL乙酸乙酯和5mL正己烷溶解残渣待净化。 SPE净化步骤 SPE柱：Welchrom® Silica,500mg/6mL, 活化：6mL正己烷，弃去 上样：待净化液全部上样，弃去 淋洗：6mL正己烷，弃去 洗脱：6mL正己烷-丙酮（6:4）洗脱，接收 复溶：50℃水浴氮吹至干，加入20%乙腈水1mL溶解残渣，过膜后供高效液相色谱-串联质谱测定。 注意事项 加标水平：2g样品中分别加入0.02mL、 0.04mL、0.1mL的0.1μg/mL标准中间液，定容至1mL，因此加标水平为1μg/kg，2μg/kg，5μg/kg，最终机度数为 2ng/mL，4ng/mL,10ng/mL。 色谱条件 6.1 UPLC条件 液相色谱型号：LC30A 色谱柱： Ultimate XB-C18 2.1×150mm，5µm 流动相：A: 0.1%甲酸水溶液；B: 乙腈（A:B=70:30等度） 柱温：40℃；流速：0.2mL/min；进样体积：20µL 6.2质谱条件 检测方式：多反应监测（MRM）模式； 离子源：电喷雾离子源（ESI）； 扫描方式：正离子扫描； 离子喷雾电压：4500 V；离子源温度：500℃； 气帘气（CUR）35 psi；雾化气（GS1）55 psi；辅助气（GS2）55 psi。 其他质谱参数见表2 液质仪器型号：AB Sciex QTRAP 4500 表1 多反应监测模式（MRM）参数 化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) 驻留时间(msec) 去簇电压DP/V 碰撞能CE/V 倍他米松 393.2 355.2* 150 80 15 337.3 150 80 19 色谱图或者加标回收率结果 图1. 倍他米松标准品2μg/L 图谱 图2.鸡肉样品空白图谱 图3. 鸡肉样品加标1μg/kg图谱 图4. 鸡肉样品加标2μg/kg图谱 图5. 鸡肉样品加标5μg/kg图谱 表2.加标回收率表 分类 加标水平μg/kg 平均回收率% RSD %（n=6） 倍他米松 1 89.08% 0.88% 2 80.08% 0.74% 5 84.75% 0.49% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00500-11006 SPE小柱 Welchrom® Silica,500mg/6mL,30pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，15mL，50/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00201-31014 液相色谱柱 Ultimate XB-C18, 5μm, 2.1×150mm 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:上海市松江区明南路85号启迪漕河泾（中山）科技园.紫荆园10号楼 邮编：201600 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号 邮编：321000 Tel:400-810-6969 E-mail:lingyuyu @welchmat.com 1、适用范围适用于动物源食品中倍他米松的测定（该实验选用基质为鸡肉）参考标准：《农业部1031号公告-2-2008 动物源食品中糖皮质激素类药物多残留检测 液相色谱-串联质谱法》 2、提取步骤试样称取2g，加入15mL乙酸乙酯，涡旋混合，8000 r/min离心15 min,移取乙酸乙酯层于100mL浓缩瓶中。在残渣中0.1mol/L氢氧化钠溶液10mL，混匀，加乙酸乙酯20mL，涡旋混合，200r/min摇床振动15min，8000 r/min离心15 min,移取乙酸乙酯层，合并提取液，在旋转蒸发器上40℃浓缩至近干，加入1mL乙酸乙酯和5mL正己烷溶解残渣待净化。 3、SPE净化步骤SPE柱：Welchrom® Silica,500mg/6mL活化：6mL正己烷，弃去上样：待净化液全部上样，弃去淋洗：6mL正己烷，弃去洗脱：6mL正己烷-丙酮（6:4）洗脱，接收复溶：50℃水浴氮吹至干，加入20%乙腈水1mL溶解残渣，过膜后供高效液相色谱-串联质谱测定。 4、色谱条件UPLC条件色谱柱：Ultimate®XB-C18，2.1×150mm，5µm流动相：A: 0.1%甲酸水溶液；B: 乙腈（A:B=70:30等度）柱温：40℃流速：0.2mL/min进样体积：20µL 质谱条件检测方式：多反应监测（MRM）模式离子源：电喷雾离子源（ESI）扫描方式：正离子扫描离子喷雾电压：4500 V离子源温度：500℃气帘气（CUR）35 psi雾化气（GS1）55 psi辅助气（GS2）55 psi其他质谱参数见表2液质仪器型号：AB Sciex QTRAP 45005、色谱图或者加标回收率结果6、相关产品信息