饲料中阿那曲唑检测方案(固相萃取仪)

饲料中阿那曲唑的测定(农业部1068号公告-5-2008) 适用范围 适用于饲料中阿那曲唑的检测。（本实验样品采用复合饲料） 参考标准《农业部1068号公告-5-2008 饲料中阿那曲唑的测定 高效液相色谱法》 溶液的配置 阿那曲唑储备液：精确称量1mg阿那曲唑样品，用流动相C定容至10mL，即0.1mg/mL储备液。 阿那曲唑标准工作液：精确移取1mL阿那曲唑储备液，用流动相C定容至10mL，即0.01mg/mL工作液。 3）提取剂：乙醚-二氯甲烷=3:2。 4）流动相C：300mL乙腈加水定容至1000mL，在加入5mL磷酸（乙腈-水-磷酸=30:70:0.5）。 5）0.1mol/L盐酸溶液：9mL盐酸，加水定容至1000mL。 6）5%氨化甲醇：5mL氨水，加甲醇定容至100mL。 提取步骤 精确称取5g样品置于50mL的螺口尖底离心管。 加入10mL水，摇匀，静止10min，加入10mL提取剂，振荡数秒，放气，再次震荡，放气，超声10min，4000rpm下离心10min，移取上清液； 再次加入10mL提取剂，振荡数秒，放气，再次震荡，放气，超声10min，4000rpm下离心10min，移取上清液，合并上清液，取5mL上清液置于15mL离心管中，在40℃下氮吹至干，用2mL流动相C溶解待净化。 SPE净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom® P-SCX，规格：60mg/3mL； 活化：依次3mL甲醇，3mL水活化，弃去； 上样：待净化液全部上样，控制流速，不宜过快，弃去； 淋洗：依次3mL0.1mol/L盐酸溶液，5mL甲醇，弃去； 洗脱：精确移取4mL的5%氨化甲醇洗脱，抽干并收集于15mL离心管中； 复溶：洗脱液于40℃水浴氮吹干，用流动相C定容至1mL，经0.22μm有机滤头，供液相检测。 注意事项 加标水平：在5g样中加入200μL 0.01mg/mL的枸橼酸氯米芬标准工作液，加标水平0.4mg/kg，机度数0.5mg/L。 色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18，4.6×250mm，5μm 流动相：A-水，B-甲醇，C-见2-4（梯度见表1） 流速：1.000mL/min 柱温：30℃ 进样量：20μL 检测波长：220nm 表1 . 流动相梯度表 时间 流速（mL/min） %A %B %C 0.000 1.000 0.0 0.0 100.0 25.000 1.000 0.0 0.0 100.0 25.100 1.000 5.0 95.0 0.0 35.000 1.000 5.0 95.0 0.0 35.100 1.000 0.0 0.0 100.0 45.000 1.000 0.0 0.0 100.0 7、色谱图或者加标回收率结果 图1. 阿那曲唑0.5mg/L标准图谱 序号 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 不对称度 分离度 塔板数 min mAU*min mAU % (EP) (EP) (EP) 1 阿那曲唑 22.147 0.271 0.760 100.00 0.98 n.a. 24183 图2. 复合饲料空白过柱图谱 图3. 复合饲料样加标0.4mg/kg过柱图谱 表2. 加标回收表 名称 加标水平mg/kg 平均回收率% RSD%（n=2） 阿那曲唑 0.5 85 2.78 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00523-20016 SPE小柱 Welchrom® P-SCX ，60mg/3ml,30pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg，袋装，未灭菌，15ml，50/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00201-31043 液相色谱柱 Ultimate® XB- C18, 4.6×250mm, 5μm 00802-02201 针头式过滤器 Welchrom® 进口NY,13mm*0.22μm,100pk 声明:除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号Tel:400-810-6969 邮编：321000E-mail:lingyuyu@welchmat.com 适用范围适用于饲料中阿那曲唑的检测。（本实验样品采用复合饲料）参考标准：《农业部1068号公告-5-2008 饲料中阿那曲唑的测定 高效液相色谱法》。 提取步骤精QUE称取5g样品置于50mL的螺口尖底离心管。1）加入10mL水，摇匀，静止10min，加入10mL提取剂，振荡数秒，放气，再次震荡，放气，超声10min，4000rpm下离心10min，移取上清液；2）再次加入10mL提取剂，振荡数秒，放气，再次震荡，放气，超声10min，4000rpm下离心10min，移取上清液，合并上清液，取5mL上清液置于15mL离心管中，在40℃下氮吹至干，用2mL流动相C溶解待净化。 SPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® P-SCX；规格：60mg/3mL；活化：依次3mL甲醇，3mL水活化，弃去；上样：待净化液全部上样，控制流速，不宜过快，弃去；淋洗：依次3mL0.1mol/L盐酸溶液，5mL甲醇，弃去；洗脱：精QUE移取4mL的5%氨化甲醇洗脱，抽干并收集于15mL离心管中；复溶：洗脱液于40℃水浴氮吹干，用流动相C定容至1mL，经0.22μm有机滤头，供液相检测。注：流动相C：300mL乙腈加水定容至1000mL，在加入5mL磷酸（乙腈-水-磷酸=30:70:0.5） 色谱条件色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18，4.6×250mm，5μm；流动相：A-水，B-甲醇，C-见2-4（梯度见表1）；流速：1.000mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；检测波长：220nm。色谱图或者加标回收率结果相关产品信息