环境水中三维荧光光谱检测方案(分子荧光光谱)

HITACHIInspire the Next http：//www.hitachi-hightech.com/ FL No.200001-1 荧光分光光度计 环境水样品的三维数据校正功能介绍 荧光分光光度计F-7100的软件FL Solutions4.2(英文版rev.9~)新增三维数据交正功能。包括三维荧光光谱的空白扣除功能，以及内滤效应校正功能(由于激发光和荧光的吸收，导致荧光减弱的内滤效应现象)，可应对环境水的检测要求。此次实验采用荧光和吸收通用支架通过切换样品的测定位置，获得荧光和吸收光谱，从而进行三维荧光光谱的空白扣除以及内滤效应校正。 F-7100荧光分光光度计 使用荧光和吸收通用支架测定荧光和吸收光谱 荧光和吸收通用支架可通过移动支架的位置，测定荧光和吸收光谱。 测定三维荧光光谱时，将激发光直接照射到样品上，由此检测到样品的荧光光谱。 测定吸收光谱时，入射光经平面镜反射，照射到样品上，由此检测到透过光。 无需替换附件，简单滑动即可轻松实现荧光光谱和吸收光谱的测定。 使用荧光和吸收通用支架的测定方法 图1 测定荧光光谱时的样品仓 图2测定吸收光谱时的样品仓 将激发光直接照射到样品上，测定荧光光谱。通过将荧光和吸收通用支架向左滑动，即可测定荧光光谱。 测定吸收光谱时，入射光经平面镜反射，检测透过光。通过测定空白样品和样品的同步光谱，可计算出样品的吸收光谱。 图3 三维数据校正画面 河川水的三维空白扣除 发射波长/nm 图4 河川水的三维荧光光谱 图5 空白样品的三维荧光光谱 图6 扣除空白后的三维荧光光谱 FL No.200001-1 荧光分光光度计 内滤效应校正功能(河川水样品) 内滤效应是指样品浓度较大时，激发光和荧光被吸收，荧光减弱的现象。 通过测定河川水的吸收光谱，进行三维荧光光谱的内滤效应校正。吸收光谱除了FL Solutions测定的吸收数据之外，也可使用紫外分光光度计软件UV Solutions的测定数据或文本数据。 内滤效应校正功能 图7 内滤效应校正画面 河川水的内滤效应校正 图9 河川水的三维荧光光谱(三维空白扣除后) √ 使用扣除三维空白值的河川水三维荧光光谱，进行内滤效应校正(图9、10)。 得到消除激发光和荧光吸收影响的三维荧光光谱。 【计算公式】 corr ：校正激发波长/发射波长后的荧光强度 Absex Fmeas 在激发波长/发射波长下测得的荧光强度激发波长(x)的吸光度 AbSem：发射波长(em)的吸光度 a ：校正系数 (初始值1) 图8 河川水净化工序的吸收光谱 (②~⑤为参考) 图10 校正后的河川水三维荧光光谱 (三维空白扣除以及内滤效应校正后) 使用校正后的三维荧光光谱，利用多变量分析软件“3D SpectAlyze”可以实现谱峰分离(PARAFAC)、主成分分析等。关于多变量分析的详细内容，请参考技术报告“FL160002 使用三维荧光光谱的多变量分析法评价水中有机物”。       荧光分光光度计F-7100 的软件FL Solutions4.2(英文版 rev.9~)新增三维数据校正功能。包括三维荧光光谱的空白扣除功能，以及内滤效应校正功能（由于激发光和荧光的吸收导致荧光减弱的内滤效应现象）可应对环境水的检测要求。       此次实验采用荧光和吸收通用支架通过切换样品的测定位置，获得荧光和吸收光谱从而进行三维荧光光谱的空白扣除以及内滤效应校正。