中药中黄曲霉毒素含量检测方案(色谱检测器)

上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co.， Ltd.Application NoteAN2524-ZY010035 2020版新药典解决方案：黄曲霉毒素检测解决方案 1.背景介绍 黄曲霉毒素概况： 黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，，目前已发现20余种，主要有 B1、G1、G2以及M1、M2，这些代谢产物在分子结构上十分接近。黄曲霉毒素具有致癌、制畸、制诱变作用，将抑制蛋白质的合成，干扰RNA 和 DNA 的合成，导致动物全身性损害，因此近年来各级食品药品监管部门高度重视。一直以来，药材、食品以及饲料等的相关国家标准中都对黄曲霉毒素有严格限量要求。近期新发布的2020版药典也是新增了多个检测品种(如远志、胖大海、陈皮、桃仁等)要求检测黄曲霉毒素含量。 黄曲霉毒素检测方法： 2020版新药典四部通则：2351真菌毒素测定法中规定黄曲霉毒素的检测方法有液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、酶联免疫法。其中，液相色谱法具有前处理简单、可实现异构体有效分离、分离灵敏度高和稳定性好等特点，因而得到了广泛的应用。 上海通微分析技术有限公司按照2020版《中国药典》的要求，推出了从样品前处理到最终分析检测的详细的黄曲霉毒素检测解决方案，以助您轻松应对黄曲霉毒素检测，切实保证产品质量和安全。 2. 测试条件 2-1样品前处理方法： 对照品溶液制备：精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素 Gi和黄曲霉毒素 G2标示浓度分别为1.0 ug/mL、0.3 ug/mL、1.0ug/mL、0.3 ug/mL) 0.5 mL， 置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1mL，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备：取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75 mL，高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000r/min)，离心5分钟(离心速度4000 r/min)， 精密量取上清液15ml， 置 50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，离心10分钟(离心速度4000 r/min)，精密量取上清液20mL， 通过免疫亲合柱，流速每分钟3mL，用水 20mL 洗脱(必要时可以先用淋洗缓冲液10mL洗脱，再用水 10mL洗脱)，弃去洗脱液，使空气进入柱子，将水挤出柱 子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22um)滤过，取续滤液，即得。 2-2高效液相色谱分析 由于黄曲霉毒素 B1和 G1 在含水的流动相中易发生荧光淬灭现象，因此需要进行衍生增强荧光信号。光化学衍生法无需任何化学试剂，检测结果准确且灵敏度高，因而被列为药典规定检测方法之一。 分析条件 色谱柱 C18，250 mmx4.6 mm， 5um 流速 1.0 mL/min柱温 35℃流动相 甲醇：乙腈：水=40：18：42进样量 5 uL发射波长 360 nm 激发波长 450 nm 混合标样色谱图 3.注意事项 3-1免疫亲和柱在2-8℃保存，使用前需提前解冻。 3-2由于黄曲霉毒素毒性较大，使用过的玻璃容器及黄曲霉素溶液请用5%次氯酸钠溶液浸泡过夜。 4.光化学衍生法推荐配置 编号 产品类别 1：分析检测系统 液相色谱系统(等度或梯度)、荧光检测器、光化学柱后衍生系统及数据采集系统一套 2：样品前处理方法包 样品前处理方法包(含免疫亲和柱、离心机等) 3：耗材包 耗材包(含黄曲霉毒素混标液体、C18色谱柱等) 4：其他服务 方案定制、安装调试与培训等技术服务 注：咨询详细黄曲霉毒素配置方法包，请联系上海通微分析技术有限公司。 www.unimicrotech.com.cn TEL： E-mail：info@unimicrotech.comcn 黄曲霉毒素概况：黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，目前已发现20余种，主要有B1、G1、G2以及M1、M2，这些代谢产物在分子结构上十分接近。黄曲霉毒素具有致癌、制畸、制诱变作用，将抑制蛋白质的合成，干扰RNA和DNA的合成，导致动物全身性损害，因此近年来各级食品药品监管部门高度重视。一直以来，药材、食品以及饲料等的相关国家标准中都对黄曲霉毒素有严格限量要求。近期新发布的2020版药典也是新增了多个检测品种（如远志、胖大海、陈皮、桃仁等）要求检测黄曲霉毒素含量。