玉米中杂色曲霉素检测方案(液质联用仪)

SSL-CA19-115Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-408 上海市徐汇区宜州路180号B2栋http：//www.shimadzu.com.cn咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai LC-MS/MS 测定玉米中杂色曲霉素含量 LCMSMS-408 摘要：本文参照 GB 5009.25-2016《食品安全国家标准食品中杂色曲霉素的测定》，玉米样品经乙腈-水溶液提取后，以HLB固相萃取柱净化，利用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪 LCMS-8050 检测，建立了玉米样品中杂色曲霉素含量的检测方法。结果表明：在0.01~50 ng/mL范围内，杂色曲霉素内标法校准曲线线性良好，线性相关系数r为0.9998，准确度为90.7~112.7%；仪器定量限为 0.009 ng/mL；不同浓度加标样品加标回收率89.7~108.2%. 关键词： LC-MS/MS 玉米杂色曲霉素 杂色曲霉素 (Sterigmatocystin)为含有双呋喃环的氧杂蒽酮类化合物，主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生，杂色曲霉素被国际癌症研究机构归类为“2B类致癌物””，具有肝毒性、肾脏毒性、免疫毒性和遗传毒性等，其主要污染谷物及谷物制品。 本文参照 GB 5009.25-2016《食品安全国家标准食品中杂色曲霉素的测定》，玉米样品经乙腈-水溶液提取后，以HLB固相萃取柱净化，利用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪 LCMS-8050 检测，建立了玉米样品中杂色曲霉素含量的检测方法。 图1杂色曲霉素结构式 |实验部分 1.1仪器 本实验使用超高效液相色谱仪LC-30A、三重四四杆质谱仪LCMS-8050联用系统。具体配置为LC-30AD×2输液泵， DGU-20A5R在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-20AC柱温箱， CBM-20A系统控制器，LCMS-8050三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.91 色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack GISS C18(2.1 mm l.D. ×100 mm L.， 1.9 um) 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液，B相-乙腈 流速：0.40 mL/min， 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始比例为70%，梯度时间程序见表1 表1梯度时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 70 1.50 Pumps Pump B Conc. 95 3.00 Pumps Pump B Conc. 95 3.10 Pumps Pump B Conc. 70 6.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式： ESI(+) 接口电压：-4kV 接口温度：300℃ 加热块温度：400℃ 雾化气流量： 2.0L/min加热气流量：10.0 L/minDL温度：120℃干燥气流量：10.0L/min MRM参数：见表2 表2MRM参数 化合物名称 监测离子对 Q1 pre(V) )CE(V) Q3 Pre(V) 杂色曲霉素 325.10>281.05* -10.0 -36.0 -29.0 325.10>310.10 -10.0 -25.0 -21.0 Cig-杂色曲霉素 343.20>297.15 -13.0 -38.0 -30.0 注：带66★99表示定量离子对 1.3样品前处理 (1)提取：取粉碎并过1~2 mm 孔径试验筛的均质样品5g(精确至0.01 g) 至50mL离心管，加入100uL内标溶液(100 ng/mL)， 加入20 mL乙-水溶液(80+20)，涡旋混匀后超声 10 min， 离心取上清液备用； (2)净化：准确移取2mL上清液用纯水稀释至8mL，转移至已活化好的 HLB 固相萃取柱中，以约3mL/min 的流速上样，依次加入5mL乙腈-水溶液(40+60)和5mL甲醇-水溶液(40+60)淋洗，以6mL乙腈洗脱，洗脱液在60℃下氮气吹干，用1mL甲醇-水(70+30)复溶，涡旋后以0.22 um 滤膜过滤待测。 结果与讨论 2.1标准样品色谱图 杂色曲霉素标准溶液 MRM 色谱图如图2所示。 图2杂色曲霉素标准溶液 MRM色谱图(0.05ng/mL) 2.2标准曲线和定量限 配制浓度分别为0.01、0.02、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50 ng/mL的标准溶液(均含10 ng/mL混合内标)， 取5uL进样，以目标组分与内标物的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线如图3.以0.01 ng/mL标准溶液进样所得色色图计算得目标峰 S/N 为11.4，以此可得仪器定量限为0.009 ng/mL. 图3标准曲线(0.01~50ng/mL) 表3标准曲线方程、线性相关系数 目标物 标准曲线方程 线性范围 相关系数 准确度% (ng/mL) (R) 杂色曲霉素 Y=1.49X+4.70e-005 0.1~50.0 0.9998 90.7~112.7 2.3样品检测结果和加标回收率 将待测样品及加标样品(加标浓度分别为0.05，1.0和20.0ng/mL)，按照““1.3样品前处理”中步骤处理后，得样品检测结果和加标回收率，结果如表4所示。 表4样品结果及加标回收率 目标物名称 样品检测结果 加标1 加标2 加标3 加标浓度 回收率 加标浓度 回收率 加标浓度 回收率 (ng/mL) (ng/mL) (%) (ng/mL) (%) (ng/mL) (%) 杂色曲霉素 N.D. 0.05 108.2 1.0 89.7 20.0 90.3 l结论 本文参照 GB 5009.25-2016《食品安全国家标准食品中杂色曲霉素的测定》，玉米样品经乙腈-水溶液提取后，以 HLB固相萃取柱净化，利用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪 LCMS-8050检测，建立了玉米样品中杂色曲霉素含量的检测方法。结果表明：在0.01~50 ng/mL范围内，杂色曲霉素内标法校准曲线线性良好，线性相关系数r为0.9998， 准确度为 90.7~112.7%；仪器定量限为 0.009 ng/mL；不同浓度加标样品加标回收率89.7~108.2%. 本文参照GB 5009.25-2016《食品安全国家标准 食品中杂色曲霉素的测定》，玉米样品经乙腈-水溶液提取后，以HLB固相萃取柱净化，利用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪LCMS-8050检测，建立了玉米样品中杂色曲霉素含量的检测方法。结果表明：在0.01~50 ng/mL范围内，杂色曲霉素内标法校准曲线线性良好，线性相关系数r为0.9998，准确度为90.7~112.7%；仪器定量限为0.009 ng/mL；不同浓度加标样品加标回收率89.7~108.2%.